基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及农药检测领域，具体而言，涉及一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒。所述试剂盒包括：包被有分子印迹聚合物膜的固相载体以及量子点探针标记的三唑磷半抗原；所述分子印迹聚合物膜以三唑酮为模板分子制备得到。本发明专利技术提供的三唑磷吸附功能材料具有较高的选择性，采用虚拟模板可解决模板渗漏问题，可以代替生物抗体应用于荧光免疫技术；该吸附功能材料由化学方法制备，具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力，克服了传统生物抗体制备周期长、易失活、成本高等缺点。

Quantum dot probe based Triazophos detection kit

The invention relates to the field of pesticide detection, in particular to a Triazophos detection kit based on a quantum dot probe. The kit comprises a solid phase carrier coated with a molecularly imprinted polymer membrane and a Triazophos hapten labeled by a quantum dot probe; the molecularly imprinted polymer membrane is prepared by using Triazolone as a template molecule. The Triazophos adsorptive functional material provided by the invention has high selectivity, can solve the template leakage problem by using virtual template, and can be used in fluorescence immunoassay instead of biological antibody. The adsorptive functional material is prepared by chemical method, has high stability, long service life and strong anti-harsh environment ability, and overcomes the long preparation period of traditional biological antibody. Vulnerable to inactivation and high cost.

【技术实现步骤摘要】
基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒
本专利技术涉及农药检测领域，具体而言，涉及一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒。
技术介绍
有机磷杀虫剂是使用最广泛的杀虫剂，包括农业中使用的一些毒性最大的化学品。三唑磷(triazophos)已广泛用作高毒性有机磷的优良替代品，以控制谷物、水果、蔬菜上的害虫。由于化学和光学稳定性及半衰期长，三唑磷可能在自然环境中残留时间长。据文献报道，三唑磷诱导大鼠氧化应激和组织病理学改变，可能对人类健康也有潜在的危害。自2016年底，中国政府已禁止在蔬菜上使用三唑磷。因此，有必要开发一种有效的分析方法，用于定期监测农业和环境样品中的三唑磷残留。目前三唑磷检测方法有气相色谱(GC)，气相色谱与质谱联用(GC-MS)，液相色谱与质谱联用(LC-MS)，以及基于酶/抗体的免疫分析。但成本高，操作复杂，分析时间长、仪器尺寸大等是使用GC/LC-MS进行现场直接检测的主要缺陷。另一方面，抗体的生产，试剂的稳定性和实验动物的使用限制了免疫测定的广泛应用。因此有必要建立一种灵敏，稳定，廉价的三唑磷检测方法，特别适用于现场快速检测，以满足快速响应和控制的需要。分子印迹是模仿抗原-抗体相互作用原理，是一种在合成分子印迹聚合物(MIPs)中产生特异性识别位点的技术，是天然抗体的替代品。MIP具有很多优点，如高化学稳定性和良好的刚性，特异性识别，低成本和易于合成等。因此，MIPs已被广泛用于许多仿生免疫吸附测定中，特别是仿生酶联免疫吸附测定。然而，酶是大分子物质，酶标抗原可能引起空间位阻，影响竞争效应，进一步降低方法的灵敏度。而用量子点(QDs)替代酶标记半抗原探针尺寸小且结构较简单。QDs灵敏度高，亮度强和光稳定性好，发射波长可调，具有宽激发光谱及窄发射光谱。用QD标记半抗原可以增加方法的灵敏度。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服传统的三唑磷检测方法存在检测时间长、仪器价格昂贵、特异性抗体难制备等缺陷，提供一种基于量子点标记三唑磷仿生免疫吸附检测方法。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：本专利技术涉及一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒，包括：包被有分子印迹聚合物膜的固相载体以及量子点探针标记的三唑磷半抗原；所述分子印迹聚合物膜以三唑酮为模板分子制备得到。为了防止分子模板泄漏，本申请选择三唑酮(三唑磷的结构类似物)作为模板，在固相载体(例如96孔板)表面合成分子印迹膜作为识别材料，同时合成CdSe/ZnSQDs标记的探针。本专利技术开发了基于微阵列印迹膜的直接竞争CdSe/ZnS量子点荧光测定法，并用于测定样品(例如蔬菜与水果，如甘蓝和苹果)中的三唑磷。根据本专利技术的另一方面，本专利技术还涉及使用如上所述的试剂盒进行三唑磷检测的方法，包括：使用待检测物与所述量子点探针标记的三唑磷半抗原竞争性地与固相载体上包被的分子印迹聚合物膜结合，读取所述量子点探针的荧光值以确定所述待检测物中三唑磷的含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：1).本专利技术提供的三唑磷吸附功能材料具有较高的选择性，采用虚拟模板可解决模板渗漏问题，可以代替生物抗体应用于荧光免疫技术；该吸附功能材料由化学方法制备，具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力，克服了传统生物抗体制备周期长、易失活、成本高等缺点。2).本专利技术将分子印迹技术与荧光免疫技术联用，建立对三唑磷具有高灵敏度的仿生荧光免疫吸附检测方法。该方法的最低检出限为0.01μgL-1，大大低于最高残留限量值，能够满足检测需要，适用于快速检测三唑磷。3).本专利技术制备的仿生抗体可以重复使用，成本大大降低；并且前处理简单，灵敏度高，实验操作简单，适用于各种食品中三唑磷的快速检测。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术一个实施例中三唑磷的量子点标记仿生免疫分析方法标准曲线。具体实施方式本专利技术涉及一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒，包括：包被有分子印迹聚合物膜的固相载体以及量子点探针标记的三唑磷半抗原；所述分子印迹聚合物膜以三唑酮为模板分子制备得到。在一些实施方式中，所述量子点探针标记的三唑磷半抗原的制备方法包括：将三唑磷半抗原依次与NHS、EDC活化反应后得到活化酯，将所述活化酯与所述量子点探针进行偶联。在一些实施方式中，所述三唑磷半抗原与NHS、EDC的摩尔比为1：(1.7～2.3)：(2.7～3.3)；在一些实施方式中，所述三唑磷半抗原与NHS、EDC的摩尔比为1：2：3。在一些实施方式中，所述活化酯和所述量子点探针的摩尔比为(460～500):1；也可以选择(470～490):1，或480:1。在一些实施方式中，所述量子点探针为CdSe/ZnSQDs。在一些实施方式中，所述分子印迹聚合物膜的制备在所述固相载体中进行，其方法包括：将模板分子于有机溶剂中，与甲基丙烯酸(MAA)进行预反应；随后预反应产物在有机溶剂中与三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)，偶氮二异丁腈(AIBN)接触反应；洗脱模板分子后即得所述分子印迹聚合物膜。在一些实施方式中，所述预反应的反应条件为室温磁力搅拌25min～35min。在一些实施方式中，所述接触反应的条件为：继续磁力搅拌使混合液预聚合反应40～80min得到预聚合液，向所述固相载体中加入预聚合液，真空35℃～39℃下反应20h～28h以完成包被。在一些实施方式中，洗脱模板分子所用的洗脱液为甲醇：乙酸(7:1)溶液。在一些实施方式中，所述模板分子与所述甲基丙烯酸的摩尔比为1：(5～7)；也可以选择1：6。在一些实施方式中，所述模板分子的浓度为1.5～2.5mmol；也可以选择2mmol。在一些实施方式中，所述模板分子与三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯的摩尔比为1:(2.5～3.5)；也可以选择1：3。在一些实施方式中，所述有机溶剂为乙腈；在一些实施方式中，所述模板分子：乙腈＝2mol：15～25ml；也可以选择为2mol：20ml。在一些实施方式中，所述模板分子：偶氮二异丁腈＝1mol：20～30mg；也可以选择为1mol：25mg。在一些实施方式中，所述固相载体为酶标板。根据本专利技术的另一方面，本专利技术还涉及使用如上所述的试剂盒进行三唑磷检测的方法，包括：使用待检测物与所述量子点探针标记的三唑磷半抗原竞争性地与固相载体上包被的分子印迹聚合物膜结合，读取所述量子点探针的荧光值以确定所述待检测物中三唑磷的含量。在一些实施方式中，所述方法具体包括：在包被有分子印迹聚合物膜的固相载体(例如酶标板)上设置空白对照孔、阴性对照孔以及检测孔；所述检测孔中加入量子点探针标记的三唑磷半抗原稀释液，以及三唑磷标准液或样品提取液，且不同孔中所加入的三唑磷标准液或样品提取液按梯度稀释；所述阴性对照孔中加入量子点探针标记的三唑磷半抗原稀释液以及缓冲液；其中，所述量子点探针标记的三唑磷半抗原稀释液由量子点探针标记的三唑磷半抗原标准溶液用缓冲液稀释得到；所述空白对照孔中加入所述缓冲液；各孔按上述方式加入完本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有分子印迹聚合物膜的固相载体以及量子点探针标记的三唑磷半抗原；所述分子印迹聚合物膜以三唑酮为模板分子制备得到。

【技术特征摘要】
1.一种基于量子点探针的三唑磷检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有分子印迹聚合物膜的固相载体以及量子点探针标记的三唑磷半抗原；所述分子印迹聚合物膜以三唑酮为模板分子制备得到。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述量子点探针标记的三唑磷半抗原的制备方法包括：将三唑磷半抗原依次与NHS、EDC活化反应后得到活化酯，将所述活化酯与所述量子点探针进行偶联。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述三唑磷半抗原与NHS、EDC的摩尔比为1：(1.7～2.3)：(2.7～3.3)。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述活化酯和所述量子点探针的摩尔比为(460～500):1。5.根据权利要求1～4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述量子点探针为CdSe/ZnSQDs。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述分子印迹聚合物膜的制备在所述固相载体中进行，其方法包括：将模板分子于有机溶剂中，与甲基丙烯酸进行预反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：佘永新，王静，洪思慧，王淼，王珊珊，郑鹭飞，曹振，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11