提高植物耐盐性菌株的获得方法及用于所述方法的分离培养基技术

本发明专利技术提供一种提高植物耐盐性菌株的获得方法及用于所述方法的分离培养基，所述分离培养基包括纯海水1000毫升、牛肉浸膏5～8克、精解蛋白胨5～9克、琼脂11～12.5克。本发明专利技术方法通过直接采用高浓度海水为基础生产基质，在此基质上分离菌株，配合采用从耐盐植物组织中寻找并分离耐盐菌的方法，简化了途径并提高了成功率，实现快速有效获得盐生植物共生菌，以提高植物的耐盐性，并保证植物的生存和生长。

【技术实现步骤摘要】
提高植物耐盐性菌株的获得方法及用于所述方法的分离培养基
本专利技术涉及微生物分离与应用
，具体来说涉及一种提高植物耐盐性菌株的获得方法及用于所述方法的分离培养基。
技术介绍
自然界中的生物具有相互依存和促进的关系，植物和菌类也存在这种关系，有些菌在特定的环境条件下对植物的生存和生长具有重要的意义。例如共生于盐生植物中的某些菌种就具有这种价值，其中，盐生植物是指生长在氯化钠含量较高的土壤上的植物，又称盐土植物。土壤中含有大量的可溶性钠盐对大多数植物是有害的，通常土壤中含有0.05％的氯化钠时，许多植物就不能忍受，但盐生植物可以生长在含盐量高达3～4％的土壤中，而与盐生植物共生的菌种可以对植物产生促生作用，提高植物耐盐性和生物产量。因此，如何提取这些菌类并加以利用是有积极意义的。
技术实现思路
鉴于上述情况，本专利技术提供一种提高植物耐盐性菌株的获得方法及用于所述方法的分离培养基，实现快速有效获得盐生植物共生菌，以提高植物的耐盐性，并保证植物的生存和生长。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是提供一种分离培养基，用于提高植物耐盐性菌株的培养，其中，所述培养基包括：纯海水，1000毫升；牛肉浸膏，5～8克；精解蛋白胨，5～9克；琼脂，11～12.5克。较佳地，本专利技术的分离培养基实施例中，牛肉浸膏为6克；精解蛋白胨为6克；琼脂为12克。较佳地，本专利技术的分离培养基实施例中，所述纯海水为海水含盐量在3.5～6wt％的高浓度海水。本专利技术另提供一种提高植物耐盐性菌株的获得方法，其方法步骤包括：步骤(1)：选取高盐地原生植物；步骤(2)：制备如前所述的分离培养基；步骤(3)：在无菌操作环境下清洗所述原生植物，去除泥沙等杂质；步骤(4)：以无菌操作方式截取所述原生植物的组织，将所述组织置于所述分离培养基上，于22-30℃进行培养；步骤(5)：提纯培养；步骤(6)：耐盐性鉴定培养；步骤(7)：菌种保存。较佳地，本专利技术的方法实施例中，所述步骤(1)的高盐地原生植物选自碱蓬、大米草或柽柳。较佳地，本专利技术的方法实施例中，所述步骤(2)的分离培养基的制备方法步骤包括：步骤a：称取制备所述分离培养基所需的组分材料；步骤b：量取1000毫升海水煮沸至100℃；步骤c：加入称取好的琼脂，煮沸、溶解，补充海水煮沸定容至1000毫升；步骤d：加入称取好的其他组分材料，煮沸；步骤e：分装培养皿，121℃灭菌25分钟。较佳地，本专利技术的方法实施例中，所述步骤(3)采用灭菌纯海水为清洗液对所述原生植物进行清洗。本专利技术由于采用了以上技术方案，使其具有以下有益效果：(1)本专利技术的培养基质和分离程序创新。常规的耐盐菌株的筛选是先从菌源物中最大限度的分离出菌群，然后再通过不同盐分浓度的基质培养筛选出耐盐的菌株。本专利技术直接采用高浓度海水为基础生产基质，在此基质上分离菌株。(2)本专利技术的菌源物创新。常规方法是从植物土壤中分离，本专利技术突破常规技术，采用从耐盐植物组织中寻找并分离耐盐菌的方法，简化了途径并提高了成功率。本专利技术的这些和其它目的、特点和优势，通过下述的详细说明和权利要求得以充分体现，并可通过所附权利要求中特地指出的手段、装置和它们的组合得以实现。附图说明无。具体实施方式在这里将公开本专利技术的详细的具体实施方案。然而应当理解，所公开的实施方案仅仅是本专利技术的典型例子，并且本专利技术可以通过多种备选形式来实施。因此，这里所公开的具体结构和功能细节不是限制性的，仅是以权利要求为原则，作为向本领域技术人员说明不同实施方式的代表性原则。除有特别说明，本专利技术中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。为利于对本专利技术的了解，以下结合实施例进行说明。本专利技术提供一种提高植物耐盐性菌株的获得方法及用于所述方法的分离培养基。本专利技术提供的分离培养基是用于提高植物耐盐性菌株的培养。本专利技术分离培养基的组成配方包括：纯海水，1000毫升；牛肉浸膏5～8克；精解蛋白胨5～9克；琼脂11～12.5克。较佳地，本专利技术分离培养基的组成配方为：纯海水为1000毫升，牛肉浸膏为6克，精解蛋白胨为6克，以及琼脂12为克。其中，所述纯海水为高浓度海水。于本专利技术实施例中，由于近滩或者平静处的海水浓度低，本专利技术分离培养基的纯海水取自水流流动大区域的海水，以保证为高浓度海水。其中，本专利技术中的高浓度海水是指海水含盐量在3.5～6wt％的。本专利技术提供的提高植物耐盐性菌株的获得方法的具体步骤包括：步骤(1)：选取高盐地原生植物。其中，所述高盐地原生植物选自碱蓬、大米草或柽柳等，但不限于此。步骤(2)：制备如前所述的分离培养基。步骤(3)：在无菌操作环境下清洗所述原生植物，去除泥沙等杂质。其中，本专利技术较佳采用灭菌纯海水为清洗液对所述原生植物进行清洗。步骤(4)：以无菌操作方式截取所述原生植物的组织，将所述组织置于所述分离培养基上，于22-30℃进行培养；步骤(5)：提纯培养；具体地，所述步骤(5)的制法流程包括：制备初提培养基，所述培养基的配方包括水1000毫升、马铃薯200克、牛肉浸膏6克、精解蛋白胨6克、琼脂12克、KH2PO40.5克、MgSO40.5克；装皿，125℃灭菌20分钟；挑取分离出的菌株接种于培养基中，28－30℃培养；视培养情况，不断挑取再培养的菌落接种，直至菌种完全纯一；再转至分离培养基中培养。步骤(6)：耐盐性鉴定培养；具体地，所述步骤(6)的制法流程包括：采用分离培养基配方，分别设置含盐量0.5wt％、1wt％、1,5wt％、2wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％、5wt％、5.5wt％、6wt％；分不同梯度测定菌种在所述培养基上生长的各项性状，综合评价菌株的基本指标。步骤(7)：菌种保存；具体地，所述步骤(7)的制法流程包括：以麸皮配海水(含盐量6wt％)，含水量45wt％，装入750毫升菌种瓶中，125℃灭菌1.5小时，接种母种，摇瓶培养15天，封瓶，5℃以下低温保存。于本专利技术方法实施例的步骤(2)中，所述分离培养基的制备方法步骤包括：步骤a：称取制备所述分离培养基所需的组分材料；步骤b：量取1000毫升海水煮沸至100℃；步骤c：加入称取好的琼脂，煮沸、溶解，补充海水煮沸定容至1000毫升；步骤d：加入称取好的其他组分材料，煮沸；步骤e：分装培养皿，121℃灭菌25分钟。以上说明了本专利技术提高植物耐盐性菌株的获得方法及用于所述方法的分离培养基的具体实施方式，以下说明通过本专利技术技术方案获得提高植物耐盐性菌株的相关数据。以海滨濒水生长的碱蓬为采集源，将碱蓬采集后，用灭菌过的离岸纯海水反复清洗植株，再用解剖刀分解植物组织，以接种刀切取根部的组织，置于培养基上，以28-32℃培养3天，得到耐盐细菌，经生物对比鉴定，属于Bacillus属。以上内容是结合具体的优选实施方式对本专利技术所作的进一步详细说明，不能认定本专利技术的具体实施只局限于这些说明。对于本专利技术所属
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离培养基，用于提高植物耐盐性菌株的培养，其特征在于，所述培养基包括：纯海水，1000毫升；牛肉浸膏，5～8克；精解蛋白胨，5～9克；琼脂，11～12.5克。

【技术特征摘要】
1.一种分离培养基，用于提高植物耐盐性菌株的培养，其特征在于，所述培养基包括：纯海水，1000毫升；牛肉浸膏，5～8克；精解蛋白胨，5～9克；琼脂，11～12.5克。2.根据权利要求1所述的分离培养基，其特征在于：牛肉浸膏为6克；精解蛋白胨为6克；琼脂为12克。3.根据权利要求1或2所述的分离培养基，其特征在于：所述纯海水为海水含盐量在3.5～6wt％的高浓度海水。4.一种提高植物耐盐性菌株的获得方法，其特征在于，包括：步骤(1)：选取高盐地原生植物；步骤(2)：制备如权利要求1至3中任一权利要求所述分离培养基；步骤(3)：在无菌操作环境下清洗所述原生植物，去除泥沙等杂质；步骤(4)：以无菌操作方式截取所述原生植物的组织，将所述组织置于所述分离培养基上，于22-30℃进行培养；...

【专利技术属性】
技术研发人员：谈峰，李敏，李玉娟，王莹，郭聪，
申请(专利权)人：江苏沿江地区农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32