具有突变型犬尿氨酸酶基因的非人动物制造技术

本发明专利技术提供了非人动物、其制备和使用方法以及组合物，其中所述非人动物包含突变型L‑犬尿氨酸水解酶(或犬尿氨酸酶)基因。在一些实施方案中，所述非人动物可以被描述为具有内源性犬尿氨酸酶基因中的遗传修饰，以使所述非人动物表达包括氨基酸置换的犬尿氨酸酶多肽，所述氨基酸置换导致存在于人类免疫缺陷病毒‑1 gp41的近膜端外部区中的所述犬尿氨酸酶多肽中的表位消除。

Non-human Animals with Mutant Canine Urinase Gene

The present invention provides non-human animals, their preparation and use methods, and compositions, in which non-human animals contain mutant L canine uridine hydrolase (or canine uridine hydrolase) genes. In some implementations, the non-human animal can be described as having genetic modification in an endogenous canine uricase gene so that the non-human animal expresses a canine uricase polypeptide including amino acid replacement, which results in the elimination of epitopes in the canine uricase polypeptide existing in the proximal outer region of the human immunodeficiency virus gp41.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有突变型犬尿氨酸酶基因的非人动物相关专利申请的交叉引用本专利申请要求2016年2月16日提交的美国临时专利申请No.62/295,524的优先权，该临时专利申请的公开内容全文以引用方式并入本文。
包含突变型L-犬尿氨酸水解酶(或犬尿氨酸酶)基因的非人动物。表达突变型L-犬尿氨酸水解酶蛋白的非人动物。制备和使用包含突变型L-犬尿氨酸水解酶核酸序列的非人动物的方法。
技术介绍
根据世界卫生组织(WHO)的报告，人类免疫缺陷病毒(HIV)是重大全球性健康问题，已夺去超过3400万人的生命。特别是，2014年全球HIV相关的死亡估计为98万至160万。HIV感染免疫系统的关键细胞；具体地讲，CD4+T细胞，并且随着时间的推移削弱宿主对许多感染和癌症的防御，从而导致称为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病症。尽管开发了许多已显示出有望控制HIV感染和预防进一步传播的抗病毒治疗，但仍未治愈。最近的研究显示，HIV涉及到通过免疫耐受性来逃避宿主免疫监视，从而削弱中和与自体抗原类似的HIV表位的免疫应答(例如，抗体应答)。
技术实现思路
本专利技术涵盖以下认知：希望对非人动物进行工程化改造，以允许使用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因组包含突变型犬尿氨酸酶(Kynu)基因的啮齿动物，所述突变型Kynu基因包含外显子3中的一个或多个点突变并且编码具有D93E置换的Kynu多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.16 US 62/295,5241.一种基因组包含突变型犬尿氨酸酶(Kynu)基因的啮齿动物，所述突变型Kynu基因包含外显子3中的一个或多个点突变并且编码具有D93E置换的Kynu多肽。2.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述突变型Kynu基因包含外显子3中的5个点突变。3.根据权利要求1或2所述的啮齿动物，其中所述突变型Kynu基因还包含一个或多个选择性标记。4.根据权利要求1至3中任一项所述的啮齿动物，其中所述突变型Kynu基因还包含一个或多个位点特异性重组酶识别位点。5.根据权利要求4所述的啮齿动物，其中所述突变型Kynu基因包含重组酶基因和侧接有重组酶识别位点的选择性标记，所述重组酶识别位点被定向为引导切除。6.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述重组酶基因可操作地连接至启动子，所述启动子驱动分化细胞中的所述重组酶基因的表达而不驱动未分化细胞中的所述重组酶基因的表达，或者所述启动子为有转录能力的和发育调节的。7.根据权利要求6所述的啮齿动物，其中所述启动子为或包括SEQIDNO:37、SEQIDNO:38或SEQIDNO:39。8.根据权利要求7所述的啮齿动物，其中所述启动子为或包括SEQIDNO:37。9.根据权利要求1至8中任一项所述的啮齿动物，其中所述突变型Kynu基因包含外显子3，所述外显子3包括出现于SEQIDNO:42之中的序列或编码包含出现于SEQIDNO:41之中的序列的Kynu多肽。10.根据前述权利要求中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物的基因组还包含人免疫球蛋白重链可变区的插入片段，所述插入片段包括一个或多个人VH区段、一个或多个人DH区段和一个或多个人JH区段，所述人免疫球蛋白重链可变区可操作地连接至免疫球蛋白重链恒定区。11.根据权利要求10所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区是啮齿动物免疫球蛋白重链恒定区。12.根据权利要求11所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物免疫球蛋白重链恒定区是内源性啮齿动物免疫球蛋白重链恒定区。13.根据前述权利要求中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物的所述基因组还包含人免疫球蛋白轻链可变区的插入片段，所述插入片段包括一个或多个人VL区段和一个或多个人JL区段，所述人免疫球蛋白轻链可变区可操作地连接至免疫球蛋白轻链恒定区。14.根据权利要求10所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物的所述基因组还包含人免疫球蛋白轻链可变区的插入片段，所述插入片段包括一个或多个人VL区段和一个或多个人JL区段，所述人免疫球蛋白轻链可变区可操作地连接至免疫球蛋白轻链恒定区。15.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白轻链恒定区是啮齿动物免疫球蛋白轻链恒定区。16.根据权利要求15所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物免疫球蛋白轻链恒定区是内源性啮齿动物免疫球蛋白轻链恒定区。17.根据权利要求13至16中任一项所述的啮齿动物，其中所述人VL和JL区段是人Vκ和Jκ区段，并且插入内源性κ轻链基因座中。18.根据权利要求17所述的啮齿动物，其中所述人Vκ和Jκ区段可操作地连接至啮齿动物Cκ基因。19.根据权利要求13至16中任一项所述的啮齿动物，其中所述人VL和JL区段是人Vλ和Jλ区段，并且插入内源性λ轻链基因座中。20.根据权利要求19所述的啮齿动物，其中所述人Vλ和Jλ区段可操作地连接至啮齿动物Cλ基因。21.一种啮齿动物，所述啮齿动物表达包括D93E置换的犬尿氨酸酶(Kynu)多肽。22.根据权利要求21所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物还表达包含人可变域和啮齿动物恒定域的抗体。23.根据权利要求22所述的啮齿动物，其中所述人可变域包括人VH和Vκ域。24.根据权利要求23所述的啮齿动物，其中所述人Vκ域融合至啮齿动物Cκ域。25.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是所述突变型Kynu基因的纯合子。26.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是所述突变型Kynu基因的杂合子。27.根据前述权利要求中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是大鼠或小鼠。28.一种基因组包含突变型犬尿氨酸酶(Kynu)基因的分离的啮齿动物细胞或组织，所述突变型Kynu基因包含外显子3中的一个或多个点突变并且编码具有D93E置换的Kynu多肽。29.一种永生化细胞，所述永生化细胞从根据权利要求28所述的分离的啮齿动物细胞制备。30.一种基因组包含突变型犬尿氨酸酶(Kynu)基因的啮齿动物胚胎干细胞，所述突变型Kynu基因包含外显子3中的一个或多个点突变并且编码具有D93E置换的Kynu多肽。31.一种啮齿动物胚胎，所述啮齿动物胚胎从根据权利要求30所述的胚胎干细胞产生。32.一种制备基因组包含突变型犬尿氨酸酶(Kynu)基因的啮齿动物的方法，所述方法包括(a)将核酸序列引入啮齿动物胚胎干细胞，以使得Kynu基因的外显子3突变为编码包括D93E置换的Kynu多肽，所述核酸包含与Kynu基因座同源的多核苷酸；(b)从(a)获得遗传修饰的啮齿动物胚胎干细胞；以及(c)使用(b)所述的遗传修饰的齿动物胚胎干细胞产生啮齿动物。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述核酸序列包含一个或多个选择性标记。34.根据权利要求32或33所述的方法，其中所述核酸序列包含一个或多个位点特异性重组酶识别位点。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述核酸序列包含重组酶基因和侧接有重组酶识别位点的选择性标记，所述重组酶识别位点被定向为引导切除。36.根据权利要求35所述的方法，其中所述重组酶基因可操作地连接至启动子，所述启动子驱动分化细胞中的所述重组酶基因的表达而不驱动未分化细胞中的所述重组酶基因的表达，或者所述启动子为有转录能力的和发育调节的。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述启动子为或包括SEQIDNO:37、SEQIDNO:38或SEQIDNO:39。38.根据权利要求37所述的方法，其中所述启动子为或包括SEQIDNO:37。39.根据权利要求32至38中任一项所述的方法，还包括步骤(d)繁育(c)中产生的所述啮齿动物，以产生所述突变型Kynu基因的纯合子啮齿动物。40.根据权利要求32至39中任一项所述的方法，其中(a)所述的啮齿动物胚胎干细胞具有包含以下部分的基因组：(i)人免疫球蛋白重链可变区的插入片段，所述插入片段包括一个或多个人VH区段、一个或多个人DH区段和一个或多个人JH区段，所述人免疫球蛋白重链可变区可操作地连接至免疫球蛋白重链恒定区，和/或(ii)人免疫球蛋白轻链可变区的插入片段，所述插入片段包括一个或多个人VL区段和一个或多个人JL区段，所述人免疫球蛋白轻链可变区可操作地连接至免疫球蛋白轻链恒定区。41.根据权利要求40所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区是啮齿动物免疫球蛋白重链恒定区。42.根据权利要求41所述的方法，其中所述啮齿动物免疫球蛋白重链恒定区是内源性啮齿动物免疫球蛋白重链恒定区。43.根据权利要求40至42中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白轻链恒定区是啮齿动物免疫球蛋白轻链恒定区。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述啮齿动物免疫球蛋白轻链恒定区是内源性啮齿动物免疫球蛋白轻链恒定区。45.根据权利要求44所述的方法，其中所述人VL和JL区段是人Vκ和Jκ区段，并且插入内源性κ轻链基因座中且可操作地连接至啮齿动物Cκ基因。46.根据权利要求44所述的方法，其中所述人VL和JL区段是人Vλ和Jλ区段，并且插入内源性λ轻链基因座中且可操作地连接至啮齿动物Cλ基因。47.一种制备基因组包含突变型犬尿氨酸酶(Kynu)基因的啮齿动物的方法，所述突变型Kynu基因编码包括D93E置换的Kynu多肽，所述方法包括修饰所述啮齿动物的所述基因组，以使所述基因组包含编码具有D93E置换的Kynu多肽的突变型Kynu基因，从而制备所述啮齿动物。48.根据权利要求47所述的方法，其中修饰所述啮齿动物的所述基因组，以使所述基因组包含包括出现于SEQIDNO:42之中的序列的突变型Kynu外显子3。49.根据权利要求48所述的方法，其中修饰所述啮齿动物的所述基因组，以使所述基因组还包含内含子3中的缺失。50.根据权利要求49所述的方法，其中所述缺失为约60bp。51.根据权利要求47至50中任一项所述的方法，其中所述方法还包含修饰所述啮齿动物的所述基因组，以使所述基因组包含：(i)人免疫球...

【专利技术属性】
技术研发人员：C基拉特索斯，AO穆西卡，
申请(专利权)人：雷杰纳荣制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US