检测猪流行性腹泻病毒抗体的酶联免疫试剂盒制造技术

本发明专利技术提供检测猪流行性腹泻病毒抗体的酶联免疫试剂盒，所述试剂盒以猪流行性腹泻病毒N蛋白的重组蛋白为包被抗原，还包括以下组分：包被液、封闭液、血清稀释液、底物显色液和终止液。本发明专利技术的PEDV ELISA检测试剂盒用以检测PEDV抗体，经检验，以及与市场所售PEDV检测试剂盒比较分析，该PEDV ELISA试剂盒敏感性、特异性均良好。同时该试剂盒所需要的样品量少操作方法简便快捷，其造价成本低廉，适合用于畜牧养殖业中猪流行性腹泻病的诊断及实验室中PEDV病原的检测，在养殖业的发展中具有重大意义。

【技术实现步骤摘要】
检测猪流行性腹泻病毒抗体的酶联免疫试剂盒
本专利技术属于酶联免疫试剂盒
，具体涉及一种检测猪流行性腹泻病毒抗体的酶联免疫试剂盒，本试剂盒适用于临床猪群中猪流行性腹泻病毒血清抗体的快速检测。
技术介绍
猪流行性腹泻病(Porcineepidemicdiarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)引起的疾病，其症状与猪的传染性胃肠炎(TGE)相似，主要包括腹泻，呕吐，厌食，脱水，和仔猪体重减轻等。尽管各年龄段猪均可感染并出现不同程度的症状，但仔猪病情特别严重，其中死亡率高达100％。这种疾病正在对养猪业造成严重损害。首次在比利时分离出病毒株，并命名为冠状病毒CV777。PED在欧洲的传播自2000年以来一直在控制之中，但该疾病在亚洲国家仍然流行，包括中国，韩国和日本。目前猪流行性腹泻疾病尚缺乏有效的针对性的根治手段。在检测猪流行性腹泻病毒方面目前主要通过病毒分离鉴定、血清中和试验、免疫电镜观察(IEM)、间接血凝试验(IHA)、免疫焚光(IF)，免疫组织化学技术，RT-PCR等技术。这些方法都存在不同程度的耗时时间本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测猪流行性腹泻病毒抗体的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒以猪流行性腹泻病毒N蛋白的重组蛋白为包被抗原。

【技术特征摘要】
1.检测猪流行性腹泻病毒抗体的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒以猪流行性腹泻病毒N蛋白的重组蛋白为包被抗原。2.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述重组蛋白的制备方法为：将PEDVN基因使用BamHI与HindⅢ克隆至载体pET-28a中，将重组质粒pET-30a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)，选择单克隆于37℃下进行培养，待OD600值达到0.6-0.8时，加入终浓度为0.1mmol/LIPTG于37℃进行诱导，IPTG诱导6h后，收集诱导表达后的菌体，超声破碎，离心后，取上清进行纯化，收集纯化的重组蛋白。3.根据权利要求2所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述纯化的具体方法为：镍柱纯化。4.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括以下组分：包被液、封闭液、血清稀释液、底物显色液和终止液。5.根据权利要求1所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PEDV标准阳性血清和PEDV标准阴性血清。6.权利要求1-5任一项所述的酶联免疫试剂盒在检测猪流行性腹泻病毒抗体中的应用，所述应用不以疾病的诊断和治疗为目的。7.猪流行性腹泻病毒抗体的检测方法，所述检测不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于：包括以下步骤：(1)包被酶标板：将纯化后的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓霞，马忠仁，马鹏，马炳，张德荣，李明生，刘俊林，赵永清，
申请(专利权)人：西北民族大学，
类型：发明
国别省市：甘肃,62