一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；R1试剂包括电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。该试剂盒是一种用胶乳增强免疫比浊法测定粪便中胰弹性蛋白酶1的装置，稳定准确、省时省力，可实现全自动快速测定样品的临床检测分析的效果，与传统免疫比浊试剂相比，检测灵敏度提高了10倍以上，多克隆抗体通过化学交联的方法偶联于胶乳颗粒表面，有效保护了抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用
本专利技术属于医学检验和体外诊断
，涉及一种测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，具体地说涉及一种利用胶乳增强免疫比浊法定量测定人体粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用。
技术介绍
粪胰弹性蛋白酶1(Fecalelastase1,FE-1)是由外分泌腺分泌的一种胰腺内切蛋白酶，经十二指肠乳头排入十二指肠，其浓度降低时可特异性地提示发生慢性胰腺炎或胰腺外分泌功能不全的情况。粪胰弹性蛋白酶1在肠道内具有稳定性，通过检测其在粪便中的含量可间接反映胰腺外分泌的功能，这种方法安全、无创且不受胰酶替代治疗的影响。但是目前常用的免疫层析检测粪胰弹性蛋白酶1的方法存在准确性和特异性低的问题，且操作复杂，检测不便。胶乳增强免疫比浊法(Latex-enhancedtμrbidimetricimmμnoassay)是一种体液蛋白均相透射免疫比浊检测方法，原理是在纳米级高分子胶乳微球的表面交联多克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能；反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。其具有如下优点：1、省时省力：在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，利用全自动生化分析仪直接测定反应液的吸光度值，几分钟就能获得结果，省却酶联免疫法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤；2、稳定准确：操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测人体血液或粪便排泄物中胰弹性蛋白酶1的含量；3、应用广泛：胶乳增强免疫比浊法的灵敏度足以检测到胰弹性蛋白酶1的下限值，可完全满足临床检测要求，明显优于免疫层析法(胶体金)。但是现有技术中，目前尚无利用胶乳增强免疫比浊法测定人体粪便中胰弹性蛋白酶1的相关试剂盒及检测方法。
技术实现思路
为此，本专利技术正是要解决上述技术问题，从而提出一种利用胶乳增强免疫比浊法定量测定人体粪胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：本专利技术提供一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；其中，所述R1试剂包括电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；所述R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；所述胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。作为优选，所述抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体通过化学交联偶联于所述胶乳颗粒表面，所述化学交联包括如下步骤：S1、向交联缓冲溶液中加入胶乳颗粒和交联表面活性剂，得到胶乳颗粒溶液；S2、将抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶解于交联缓冲溶液中，至浓度为1-10μmol/mL，得到抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶液；S3、将所述胶乳颗粒溶液与所述抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶液混合，加入化学交联剂后在室温下反应2-4h，即得包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒。作为优选，所述电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中的至少一种，在试剂中的浓度为0.1-10％。作为优选，所述稳定剂为酪蛋白、甘露醇、壳聚糖、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白中的至少一种，在试剂中的浓度为0.1-10％。作为优选，所述缓冲液为MES缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸盐缓冲液、磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种，所述缓冲液的浓度为10-500mmol/L，所述缓冲液的pH值为5-9。作为优选，所述表面活性剂为吐温、脂肪醇聚乙二醇醚、聚氧乙烯苯基醚中的至少一种，所述表面活性剂在试剂中的浓度为0.1-10％。作为优选，所述防腐剂为叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、Proclin防腐剂中的至少一种，所述防腐剂在试剂中的浓度为0.1-10％。作为优选，所述化学交联剂为EDC、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、碳化亚胺、酰肼、异氰酸钾中的至少一种；所述交联缓冲液为MES、MOPSO、MOPS、HEPES、PBS缓冲液中的一种，所述交联缓冲液的pH值为6-9。作为优选，所述胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液中，胰弹性蛋白酶1的浓度为0.01-1500μg/mL。本专利技术还提供一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒在检测胰腺外分泌功能中的应用。本专利技术的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：本专利技术所述的定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；其中，所述R1试剂包括电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；所述R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；所述胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。所述试剂盒是一种利用胶乳增强免疫比浊法测定粪便中胰弹性蛋白酶1的装置，具有稳定准确、省时省力的优点，可与全自动生化分析仪相结合，实现全自动快速测定样品的临床检测分析的效果，与传统免疫比浊试剂相比，检测灵敏度提高了10倍以上，抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体通过化学交联的方法偶联于胶乳颗粒表面，胶乳颗粒与抗体Fc片段之间通过化学键结合，提高了抗体的结合率和稳定性，有效地保护了抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测灵敏度。附图说明为了使本专利技术的内容更容易被清楚的理解，下面根据本专利技术的具体实施例并结合附图，对本专利技术作进一步详细的说明，其中图1是本专利技术实施例所述的定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒检测试样时吸光度差值曲线图；图2是本专利技术实施例所述的定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒测试胰弹性蛋白酶1标准品的标准曲线图。具体实施方式材料及来源胰弹性蛋白酶1：通过基因重组技术获取提纯的人胰弹性蛋白酶1；其他试剂购自美国Sigma公司。实施例1本实施例提供一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液。其中，所述R1试剂由如下配比的组分组成：0.1％的电解质、10％的稳定剂、0.1％的表面活性剂、10％的防腐剂，余量为浓度10mmol/L的缓冲液，所述电解质为氯化钠，所述稳定剂为酪蛋白，所述表面活性剂为吐温，所述防腐剂为叠氮钠，所述缓冲液为MED缓冲液，其pH值为5。所述R2试剂由如下配比的组分组成：2mg/mL的包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、0.1％的电解质、10％的稳定剂、0.1％的表面活性剂、10％的防腐剂、余量为浓度10mmol/L的缓冲液。所述电解质为氯化钾，所述稳定剂为甘露醇，所述表面活性剂为脂肪醇聚乙二醇醚，所述防腐剂为苯酚，所述缓冲液为磷酸缓冲液，其pH值为5。本实施例中，所述抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体通过化学交联的方法偶联于胶乳颗粒表面，具体包括如下步骤：S1、将100mg的胶乳颗粒在5mlMES缓冲液中(50mM,pH6.0)，加入交联表面活性剂十二烷基磺酸钠(最终浓度0.01％)，得到胶乳颗粒溶液，所述胶乳颗粒的粒径为50-500nm。S2、将抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶解于5mlMES交联缓冲溶液(50mM，pH6.0)中，至浓度为1μmol/mL，得到抗人胰弹本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；其中，所述R1试剂包括电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；所述R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；所述胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。

【技术特征摘要】
1.一种定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂和胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液；其中，所述R1试剂包括电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和缓冲液；所述R2试剂包括包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、缓冲液；所述胰弹性蛋白酶1抗原校准品溶液包括胰弹性蛋白酶1和稳定剂。2.根据权利要求1所述的定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，其特征在于，所述抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体通过化学交联偶联于所述胶乳颗粒表面，所述化学交联包括如下步骤：S1、向交联缓冲溶液中加入胶乳颗粒和交联表面活性剂，得到胶乳颗粒溶液；S2、将抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶解于交联缓冲溶液中，至浓度为1-10μmol/mL，得到抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶液；S3、将所述胶乳颗粒溶液与所述抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体溶液混合，加入化学交联剂后在室温下反应2-4h，即得包被抗人胰弹性蛋白酶1多克隆抗体的胶乳颗粒。3.根据权利要求1或2所述的定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，其特征在于，所述电解质为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中的至少一种，在试剂中的浓度为0.1-10％。4.根据权利要求3所述的定量测定粪便中胰弹性蛋白酶1的试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为酪蛋白、甘露醇、壳聚糖、乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白中的至少一种，在试剂中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯志波，张伟，
申请(专利权)人：深圳市鸿美诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44