一种D-氨基酸的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种D‑氨基酸的制备方法，包括如下步骤：1、重组菌构建：克隆N‑乙酰‑D‑氨基酰化酶基因，基因连入pET系列载体或pKK223‑3载体，转化至BL21(DE3)宿主菌，构建D酰化酶重组菌（NLase）；克隆N‑乙酰‑氨基酸消旋酶基因，基因连入pET系列载体或pKK223‑3载体，转化至BL21(DE3)宿主菌，构建N‑乙酰氨基酸消旋酶重组菌（NAAR）；2、重组菌发酵；3、固定化酶制备；4、固定化酶转化联合膜分离；5、产品结晶。本发明专利技术降低了酶的成本，减少了副产物乙酸对消旋酶的抑制。同时由于转化液杂质很少，分离纯化简单，收率高，产品品质好，得到的D‑氨基酸e.e.值达99.9%以上，含量99%以上，摩尔收率85%以上。

A Method for Preparing D-Amino Acids

The present invention relates to a method for preparing D amino acid, which includes the following steps: 1. Construction of recombinant bacteria: cloning N acetyl D aminoacylase gene, connecting the gene into pET series vector or pK223 3 vector, transforming it into BL21 (DE3) host bacteria, constructing D acylase recombinant bacteria (NLase); cloning N acetyl amino acid racemase gene, connecting the gene into pET series vector or pK223. It was transformed into BL21 (DE3) host bacteria to construct recombinant N -acetylamino acid racemase (NAAR); 2. fermentation of recombinant bacteria; 3. preparation of immobilized enzymes; 4. separation of immobilized enzymes by combined membrane; 5. product crystallization. The invention reduces the cost of the enzyme and the inhibition of racemase by acetic acid, a by-product. At the same time, because of the few impurities, simple separation and purification, high yield and good product quality, the obtained D_amino acid E.E. value is over 99.9%, content is over 99%, and molar yield is over 85%.

【技术实现步骤摘要】
一种D-氨基酸的制备方法
本专利技术涉及一种D-氨基酸的制备方法。
技术介绍
自然界存在20种氨基酸，均为L-型氨基酸，它们是组成蛋白质的基本结构单元。所以，一般认为D-氨基酸在自然界中极少存在，近年来，随着科学研究的深入，人们发现D-氨基酸虽然不是构成蛋白质的基本结构氮源，但许多植物、微生物和高等植物中都有D-氨基酸的存在。研究结果显示D-型氨基酸在生命活动和药物制备中具有L-氨基酸所不能替代的地位，是重要的药物合成中间体和食品添加剂，被广泛应用于生产半合成抗体、激素、生物活性多肽和化学杀虫剂。特别是作为半合成抗生素的侧链原料，D-型氨基酸更受到学术界和产业界的关注。目前D-型氨基酸的应用领域主要是：1.医药方面。用于合成多肽药物，如多肽抗生素（阿扑西林ASPOXICILLIN），肠胃药（OXTREOTIDE），利尿药，腹泻药（善得定SANDOSTATINACETATE），酶抑制剂，促皮质素类似物，止痛镇痛药，减肥药，Ⅱ型糖尿病治疗药（那格列奈NATEGLINIDE）等。2.食品方面。天苯二肽（阿斯巴甜），天丙二肽（阿力甜）等新型甜味剂。D-型氨基酸还可用于食品调味剂、保鲜剂、防腐本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种D‑氨基酸的制备方法，其特征在于，以D‑氨基酰化酶和N‑乙酰氨基酸消旋酶为酶催化剂，N‑乙酰氨基酸为底物原料。

【技术特征摘要】
1.一种D-氨基酸的制备方法，其特征在于，以D-氨基酰化酶和N-乙酰氨基酸消旋酶为酶催化剂，N-乙酰氨基酸为底物原料。2.根据权利要求1所述一种D-氨基酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1、重组菌构建：克隆N-乙酰-D-氨基酰化酶基因，基因连入pET系列载体或pKK223-3载体，转化至BL21(DE3)宿主菌，构建D酰化酶重组菌（NLase）；克隆N-乙酰-氨基酸消旋酶基因，基因连入pET系列载体或pKK223-3载体，转化至BL21(DE3)宿主菌，构建N-乙酰氨基酸消旋酶重组菌（NAAR）；2、重组菌发酵；3、固定化酶制备；4、固定化酶转化联合膜分离；5、产品结晶。3.根据权利要求1所述一种D-氨基酸的制备方法，其特征在于，N-乙酰-D-氨基酰化酶基因来源于Alcaligenesdenitrificans或Aspergillusoryzae或Defluvibacter或Hypomycesmycophilus或Methylobacteriummesophilicum或Sebekia或Stenotrophomonasmaltophilia或Streptomyces或Trichodermasp.。4.根据权利要求1所述一种D-氨基酸的制备方法，其特征在于，N-乙酰-氨基酸消旋酶基因来源于SebekiaBenihana或Amycolatopsisorientalissubspecieslurida或Amycolatopsisazurea或Deinococcusradiodurans或Geobacilluskaustophilus或Defluvibacter或Alcaligenesxylosoxydanssubsp.xylosoxydans。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴黎诚，郭小雷，章权，
申请(专利权)人：浙江正硕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33