一种兰花基因转化方法技术

本发明专利技术公开了一种兰花基因转化方法，该方法以兰花的芽或茎段作为外植体进行原球茎诱导，直至原球茎的直径长至0.2～0.5cm；将得到的原球茎进行预培养后浸泡于OD600＝0.4～0.6的农杆菌溶液中侵染，再转移至共培养基中避光培养；将共培养后的原球茎多余的农杆菌去除后，转移至增殖培养基上进行培养，得到抗性原球茎；将抗性原球茎转移至芽诱导培养基上进行培养，直至得到5～6cm高的墨绿色小苗进行炼苗移栽。所述的兰花基因转化方法具有操作简便、转化周期短、转化效率高、成本较低的优点，尤其适合兰花体内基因功能验证。为获得抗病/抗逆/提前开花，改变花色/花型和叶色的竹叶兰以及其他兰科植物奠定基础。

A Method of Orchid Gene Transformation

The invention discloses an orchid gene transformation method, in which the bud or stem segment of orchid is used as explant for protocorm induction until the diameter of protocorm reaches 0.2-0.5 cm; the obtained protocorm is pre-cultured and immersed in the OD600=0.4-0.6 Agrobacterium solution for infection, and then transferred to the co-culture medium for avoiding light culture; and surplus Agrobacterium tumefaciens after co-culture are transferred to the co-culture medium. After removal, the resistant protocorms were transferred to multiplication medium for culture, and then transferred to bud induction medium for culture until 5-6 cm high dark green seedlings were obtained for seedling transplantation. The orchid gene transformation method has the advantages of simple operation, short transformation cycle, high transformation efficiency and low cost, and is especially suitable for in vivo gene function verification of orchids. It lays a foundation for obtaining disease resistance/stress resistance/early flowering, changing flower color/flower pattern and leaf color of Bamboo Leaf Orchid and other orchid plants.

【技术实现步骤摘要】
一种兰花基因转化方法
本专利技术涉及生物工程领域中进行基因转化的方法，特别涉及一种兰花基因转化方法。
技术介绍
兰科植物(俗称兰花)是单子叶植物第一大科，有801属近3000种。多数兰花种类具有很高的观赏和药用价值，因此兰花在花卉产业中占有举足轻重的地位。目前全球兰花年销售额已超70亿美元，成为重要的新型产业。而追求新奇特是花卉产业最大的特色，也是推动产业发展的重要因素。然而多数兰花品种生长缓慢，种子成熟所需时间较长，采用传统杂交育种方法周期长，且子代性状难以预期，需要投入较高成本。与传统育种方法相比，转基因技术优势明显：(1)能突破远缘杂交瓶颈，实现物种间基因的交流，为兰花品种改良提供了新的可能；(2)能定向改变生物性状，育种更具预测性；(3)缩短育种时间。随着现代分子生物学技术迅速发展，近几年兰花转基因研究进展很快，主要在蝴蝶兰、石斛兰、蕙兰、文心兰等兰花中建立了遗传转化方法包括基因枪法、农杆菌转化法、花粉管通道法、子房注射法等。其中，农杆菌介导法具有可行性强，操作简单，成本低，重复性好等特点，但还存在转化周期过长，转化效率低等不足，目前报道的兰花转基因方法从遗传转化到获得转基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种兰花基因转化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)原球茎诱导：以兰花的芽或茎作为外植体进行原球茎诱导，直至原球茎长至直径0.2～0.5cm；(2)共培养：将步骤(1)得到的原球茎进行预培养，然后浸泡于OD600＝0.4～0.6的农杆菌溶液中侵染，侵染完成后将原球茎转移至共培养基中避光培养，所述的共培养基每升含有花宝一号3g、6‑BA 2.0mg、NAA 0.2mg、AS 200μmol，余量为水；(3)原球茎筛选：将步骤(2)共培养后的原球茎洗涤除菌，去除多余农杆菌后，转移至增殖培养基上进行培养，得到抗性原球茎；所述的增殖培养基每升含有花宝一号3g、6‑BA 3.0mg、NAA 0.3...

【技术特征摘要】
1.一种兰花基因转化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)原球茎诱导：以兰花的芽或茎作为外植体进行原球茎诱导，直至原球茎长至直径0.2～0.5cm；(2)共培养：将步骤(1)得到的原球茎进行预培养，然后浸泡于OD600＝0.4～0.6的农杆菌溶液中侵染，侵染完成后将原球茎转移至共培养基中避光培养，所述的共培养基每升含有花宝一号3g、6-BA2.0mg、NAA0.2mg、AS200μmol，余量为水；(3)原球茎筛选：将步骤(2)共培养后的原球茎洗涤除菌，去除多余农杆菌后，转移至增殖培养基上进行培养，得到抗性原球茎；所述的增殖培养基每升含有花宝一号3g、6-BA3.0mg、NAA0.3mg、潮霉素5mg，头孢霉素500mg，余量为水；(4)将步骤(3)得到的抗性原球茎转移至芽诱导培养基上进行培养，直至得到5～6cm高的小苗，然后进行炼苗移栽，所述的芽诱导培养基每升含有花宝一号3g、NAA0.5mg、潮霉素5mg，头孢霉素500mg，余量为水。2.根据权利要求1所述的兰花基因转化方法，其特征在于，所述的以兰花的芽或茎为外植体进行原球茎诱导具体为：将兰花的芽或茎接种于培养基中，避光培养，直至在芽切口处或茎节处可以看到浅绿色的小原球茎，然后转移到正常光周期条件下培养，直至原球茎的直径长至0.2～0.5cm，所述的培养基每升含有花宝一号3g、NAA0.2mg、6-BA0....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨凤玺，金建鹏，朱根发，郭阿瑾，
申请(专利权)人：广东省农业科学院环境园艺研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44