一种提取橡胶树叶片总DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，涉及植物提取技术领域，在细胞核裂解前用提取缓冲液对样品进行预处理，使细胞质中的大部分多糖和多酚类物质溶解在提取缓冲液中，通过低速离心使之与含有总DNA的样品分离；提取缓冲液中用葡萄糖作稳定剂，以保持渗透性；提取缓冲液中用高浓度的聚乙烯吡咯烷酮结合多酚类物质；提取缓冲液中用高浓度巯基乙醇作抗氧化剂；裂解液中提供高浓度的氯化钠环境，使CTAB与DNA的复合物能充分溶解。

A Method for Extracting Total DNA from Rubber Leaves

The invention discloses a method for extracting total DNA from rubber leaves, which relates to the field of plant extraction technology. Samples are pretreated with extracting buffer before nucleus lysis, most polysaccharides and polyphenols in cytoplasm are dissolved in extracting buffer, and separated from samples containing total DNA by low-speed centrifugation; and glucose is used as stabilizer in extracting buffer. Maintaining permeability; combining polyphenols with high concentration of polyvinylpyrrolidone in extraction buffer; using high concentration of mercaptoethanol as antioxidant in extraction buffer; providing high concentration of sodium chloride environment in pyrolysis solution to fully dissolve CTAB-DNA complex.

【技术实现步骤摘要】
一种提取橡胶树叶片总DNA的方法
本专利技术涉及植物提取
，具体涉及一种提取橡胶树叶片总DNA的方法。
技术介绍
橡胶树体内不仅富含胶乳，而且有大量的多酚及多糖类次生物质。在提取DNA时，多糖很难与DNA分离，而酚类物质在研磨时易氧化，并与蛋白质和核酸发生不可逆的结合，形成胶状物，这种含有DNA的胶状物对其进行PCR或酶切分析不利。虽然提取橡胶树中DNA有多种方法，但这些方法均需用氯化铯超速离心，而且产物经常呈褐色的胶状物。要提取高质量的DNA，就得克服多酚及多糖类物质的干扰。因此，亟需一种适合于提取橡胶树中高质量DNA的方法。
技术实现思路
针对现有技术中存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，所得DNA没有蛋白质、酚类及小分子的污染，适合于分子生物学研究。为达到以上目的，本专利技术采取的技术方案是：一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，包括以下步骤：取橡胶树叶片，放在液氮中研成粉末后转入离心管中，在离心管中加入提取缓冲液，低温离心；弃去上清液，沉淀中加入55～75℃预热的裂解液，于55～75℃水浴中保温；加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，于室温下离心本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：取橡胶树叶片，放在液氮中研成粉末后转入离心管中，在离心管中加入预冷的提取缓冲液，低温离心；弃去上清液，沉淀中加入55～75℃预热的裂解液，于55～75℃水浴中保温；加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，于室温下离心；上清液转至另一新管中，加入异丙醇，于室温下离心；以乙醇洗沉淀，沉淀风干后，加入TE缓冲液，溶于微量离心管中，加入核糖核酸酶，于室温下保温；加入等体积的氯仿∶异戊醇混合液，低温离心；弃去上清液，加入醋酸钠，混匀后加入无水乙醇，翻转混匀，于‑15℃～‑25℃中静置；低温离心，用乙醇洗沉淀，沉淀风干后，将沉淀溶于TE缓冲液中，...

【技术特征摘要】
1.一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：取橡胶树叶片，放在液氮中研成粉末后转入离心管中，在离心管中加入预冷的提取缓冲液，低温离心；弃去上清液，沉淀中加入55～75℃预热的裂解液，于55～75℃水浴中保温；加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇混合液，于室温下离心；上清液转至另一新管中，加入异丙醇，于室温下离心；以乙醇洗沉淀，沉淀风干后，加入TE缓冲液，溶于微量离心管中，加入核糖核酸酶，于室温下保温；加入等体积的氯仿∶异戊醇混合液，低温离心；弃去上清液，加入醋酸钠，混匀后加入无水乙醇，翻转混匀，于-15℃～-25℃中静置；低温离心，用乙醇洗沉淀，沉淀风干后，将沉淀溶于TE缓冲液中，于-15℃～-25℃下保存。2.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：橡胶树叶片与提取缓冲液比例为1∶5～1∶7。3.如权利要求1所述的一种提取橡胶树叶片总DNA的方法，其特征在于：所述提取缓冲液为0.45M的葡萄糖、0.1mM的Tris-HCl、5mM的EDTA、2％质量浓度的聚乙烯吡咯烷酮和2％物质浓度的β-巯基乙醇。4.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄关青，李冬青，
申请(专利权)人：海南青峰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：海南,46