The invention relates to a method for cultivating dimorphic microorganisms. Specifically, the present invention provides a yeast production method that reduces mycelial yeast and increases yeast yeast. The characteristics of the method include: (1) controlling the dissolved oxygen level in the fermentation process to more than 20% in the yeast fermentation step; and/or (2) controlling the ratio of total carbon content to total nitrogen content in the fermentation broth, i.e. C/N ratio, to 2-25 in the fermentation process. Within the range, the content is expressed as a percentage of mass; and/or (3) the fermentation temperature is controlled within the range of 26-30 degrees Celsius. The method of the invention may optionally include steps of multi-stage activation of strains. The method of the invention can effectively reduce the proportion of mycelial yeast and increase the proportion of yeast yeast, which is beneficial to high-density cultivation of yeast yeast.
【技术实现步骤摘要】
一种培养二型性微生物的方法
本专利技术涉及一种培养二型性微生物的方法。
技术介绍
二型性(Dimorphism)是指同一种生物(有时是同一个个体)内出现二种相异性状的现象。菌体二型性是指一种真菌既能生长成酵母状细胞又能生长成菌丝体状细胞的一种现象。解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)是一种研究菌体二型性的模式生物。解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)是一种非常规酵母，属于半子囊菌纲、耶氏酵母菌属，细胞形态可以在酵母型、假菌丝型以及菌丝型之间进行相互转换。解脂耶氏酵母因其独特的生理和代谢方式，且被公认为一种安全的菌种，引起了广大研究者的兴趣。随着该酵母的研究也日益增多，该酵母应用前景也越来越广泛。解脂耶氏酵母的二型性转换受外界环境控制，生长温度、环境中氧的浓度以及pH值等都会影响细胞的菌丝形成能力，但对于解脂耶氏酵母二型性转化的外界环境的控制文献中记录的较少。
技术实现思路
本专利技术对解脂耶氏酵母发酵工艺进行了研究，发现利用控制菌种活性以及外界环境比如pH、溶氧、C/N比(发酵液中碳的总含量与氮的总含量的比值，所述含量以质量百分数计)、...
【技术保护点】
1.一种减少二型性微生物菌丝型细胞、增加酵母型细胞的生产方法，其特征在于，所述方法包括，在所述微生物的发酵步骤中，(1)将发酵过程中的溶氧水平控制在20％以上；和/或(2)将发酵过程中发酵液中的碳的总含量与氮的总含量的比值，即C/N比，控制在2～25、优选5～20、更优选5～15的范围内，其中，所述含量以质量百分比计；和/或(3)将发酵温度控制在26～30℃，优选27.5℃～28.5℃的范围内。
【技术特征摘要】
1.一种减少二型性微生物菌丝型细胞、增加酵母型细胞的生产方法，其特征在于，所述方法包括，在所述微生物的发酵步骤中，(1)将发酵过程中的溶氧水平控制在20％以上；和/或(2)将发酵过程中发酵液中的碳的总含量与氮的总含量的比值，即C/N比，控制在2～25、优选5～20、更优选5～15的范围内，其中，所述含量以质量百分比计；和/或(3)将发酵温度控制在26～30℃，优选27.5℃～28.5℃的范围内。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过增加搅拌速率和/或通气量，或通过以下方式中的一种或两种的组合来将发酵过程中的溶氧水平控制在20％以上：(1)搅拌方式；和(2)进气方式；优选地，通过增大搅拌桨的规格和/或改变搅拌桨形状来改变搅拌方式，从而将发酵过程中的溶氧水平控制在20％以上；优选地，所述改变搅拌桨形状包括将剪切力小的搅拌桨替换成剪切力相对而言提高的搅拌桨，或将六直叶圆盘涡轮式改为六弧叶圆盘涡轮式或六折叶圆盘涡轮式搅拌桨；或通过将单管进气改变为气体分布器进气，从而将发酵过程中的溶氧水平控制在20％以上。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，通过调整发酵过程中流加的碳源和氮源的速度控制发酵液中的C/N比；优选地，所述调整由手动补料、连续补料或反馈控制来实现；其中，所述手动补料包括：检测发酵液中的C/N比，和根据检测结果补料；其中，检测时间间隔为1～8小时；所述连续补料包括：按照菌种的生长情况预先设定好补料速率，由电磁阀自动补料；和所述反馈控制包括：根据在线或离线检测pH、铵离子和/或硝酸根离子的结果来对发酵液中的C/N比进行调整；优选地，补料的方式使发酵罐中的葡萄糖含量控制在0～5％的范围内，例如控制在0.1～0.5％，或者1.0～2.0％，或者2.0～3.0％，或者3.0～4.0％，或者4.0～5.0％的范围内。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述碳源为糖和糖的衍生物、有机酸类、醇类；优选地，所述糖类选自单糖、二糖和多糖或其任意组合，所述单糖选自葡萄糖、果糖和半乳糖或其任意组合，所述二糖选自蔗糖、乳糖和麦芽糖或其任意组合，所述多糖为淀粉；所述有机酸类选自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、和琥珀酸的一种或任意多种的组合；所述醇类选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇等的一种或任意多种的组合；所述氮源选自酵母膏、蛋白胨、硫酸铵、氯化铵、乙酸铵、甲酸铵、丙酸铵、乳酸胺和丁酸铵中的一种或任意多种的组合。5.如权利要求1－4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下一个或多个特征：所述发酵为分批发酵、补料分批发酵或者连续发酵；所述微生物为酵母，选自：解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)、产朊假丝酵母(Candidautilis)、热带假丝酵母(Candidatropicalis)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、球拟酵母(Torulopsisutilis)、拟热带假丝酵母(Candidapseudotropicalis)、季也蒙假丝酵母果生变种(Candidaguilliermondiivar.carpophila)、近平滑假丝酵母(Candidaparapsilosis)、土生假丝酵母(Candidahumicola)、克鲁斯假丝酵母(Candidakrusei)、葡萄牙假丝酵母(Candidalusitaniae)、近平滑假丝酵母(Candidaparapsilosis)、麦芽糖假丝酵母(Candidamaltosa)、解脂假丝酵母解脂变种(Candidalipolyticavar.lipolytica)、马其顿假丝酵母(Candidamacedonie...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡鹏，刘志昱，张新飞，宋瑞，陈奇康，
申请(专利权)人：上海吉态来生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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