一种合成肽sp4及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的合成肽sp4。其在抗肿瘤药效试验中作为唯一有效成分，对裸鼠人骨肉瘤MG‑63的肿瘤体积和重量均具有明显抑制作用，具有明显量‑效和时‑效关系。sp4与阳性对照组紫杉醇的相对肿瘤增殖率T/C(％)比较无差异。sp4的安全性在于，静脉注射途径给药其最大耐受剂量为700mg/kgBW。sp4的药效作用靶点明确，在具有体内药效的同时，对肿瘤端粒酶也具有极明显的抑制作用、对肿瘤细胞周期呈现G1期阻滞作用、对肿瘤PD‑L1和CD47的高表达，呈明显抑制作用。本发明专利技术明显涉及sp4的多种用途，尤其在制备一类抗肿瘤药物中的应用。

A synthetic peptide SP4 and its application

The present invention discloses a synthetic peptide SP4 with amino acid sequence such as SEQ ID NO.1. As the only active ingredient in the anti-tumor efficacy test, it has a significant inhibitory effect on the volume and weight of human osteosarcoma MG 63 in nude mice, and has a significant dose-time-effect relationship. There was no difference in the relative tumor proliferation rate T/C (%) between SP4 and paclitaxel in positive control group. The safety of SP4 is that its maximum tolerable dose is 700 mg/kg BW by intravenous route. The pharmacodynamic target of SP4 is clear. It has the pharmacodynamic effect in vivo, and it also has a very obvious inhibition on tumor telomere, a G1 phase blocking effect on the cell cycle, and a significant inhibition on the high expression of PD_L1 and CD47 in tumors. The invention obviously relates to various uses of sp4, especially in the preparation of a class of antineoplastic drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种合成肽sp4及其应用
本专利技术属于生物医药
，涉及一种合成肽sp4(SyntheticPeptide-4)及其应用，尤其是在制备一类抗肿瘤新药中的应用。
技术介绍
癌症正严重威胁着人类的健康和生命，骨肉瘤(osteosarcoma，OS)也称为成骨肉瘤(是一种最常见的原发性骨恶性肿瘤，是高度恶性的间叶组织肿瘤，好发于21岁以下的青少年和儿童，骨肉瘤在局部呈侵袭性生长，生长迅速、恶性度极高、易发生转移、保肢治疗效果差，具有致残率和死亡率高等特点，化疗治疗转移灶非常重要；目前临床上，主要釆用细胞毒类抗肿瘤药物，紫杉醇(Paclitaxel)、顺铂(Cisplatinum)、甲氨碟呤(Methotrexate，MTX)，、阿霉素(Adriamycin，ADM、环磷酰胺(Ifosfamide，IFO)等联合用药，其毒副作用给病人带来极大伤害和痛苦。食管癌(esophaguscancer)是常见消化系统肿瘤之一，也多采用联合化疗，其毒副作用大。多肽类化合物是一类重要的生物活性分子。化学合成肽sp4是釆用多肽固相合成技术合成的小肽，经高效液相色谱(HPLC)纯化、质谱分析鉴定等生物技术处理，为sp4的药物制备、结构确证、质量研究等方面提供了量化资料。到目前为止，现有技术中，未见有类似的化学合成肽及其在抗肿瘤药物中的应用。
技术实现思路
本专利技术公开一种化学合成肽sp4，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，与天然抗肿瘤多肽比较，化学合成可获得高纯度的多肽单体。在现有技术中，未见有类似的化合物。本专利技术还保护所述的合成肽sp4如下(1)至(8)中任一所述的应用：(1)预防和/或治疗肿瘤；(2)抑制肿瘤细胞的增殖和/或生长和/或侵袭；(3)增强抗肿瘤免疫反应；(4)诱导肿瘤细胞分化；(5)制备一类抗肿瘤药物；(6)抑制肿瘤端粒酶活性；(7)调控肿瘤细胞周期；(8)制备调控肿瘤细胞周期类产品。进一步的，上文所述的合成肽sp4的应用(6)中，抑制肿瘤端粒酶活性，是指在作为肿瘤端粒酶抑制肽中的应用。所述合成肽sp4对体外肿瘤细胞株及体内肿瘤组织内的端粒酶活性均具有强的抑制作用。进一步的，上文所述的合成肽sp4的应用(8)中，制备调控肿瘤细胞周期类产品，是指作为肿瘤细胞周期调控类药物中的应用，合成肽sp4具有G1期阻滞作用，可能与抑制端粒酶活性有关。进一步的，上文所述的肿瘤为人骨肉瘤或人食管癌。所述的人食管癌包括食管鳞状上皮和柱状上皮的恶性肿瘤。本专利技术还保护一种生物活性分子产品，它的活性成分为所述的合成肽sp4。进一步的，此产品的唯一有效活性成分为所述的合成肽sp4。尤其是本专利技术实施例中利用所述的合成肽sp4在抗肿瘤药物中作为有效活性成分取得很好的应用。sp4抗肿瘤作用靶点明确，可以采用单一用药的形式使用，即作为唯一有效活性成分，疗效显著。细胞毒类抗肿瘤药物是目前治疗恶性肿瘤的重要手段之一，为了降低细胞毒类抗肿瘤药物的毒性，多采用多种方式的联合用药。本专利技术提出了一种单一用药、疗效显著、靶向肿瘤细胞DNA端粒的端粒酶活性、参与细胞周期调控的非细胞毒类的化学合成肽sp4。对于临床前抗肿瘤有效性研究，除了探索受试物的作用强度和对不同类型肿瘤的敏感性外，还应特别关注受试物与阳性对照药物试验结果的比较。本专利技术首先在体外抗肿瘤活性筛选试验(CCK-8法)中发现sp4与MG-63和Eca-109细胞共培养72h后，sp4对MG-63的抑制率为93.84％，对Eca-109的抑制率是73.58％具有明显的剂量-效应关系；体内试验是评价受试物对特定类型肿瘤细胞杀伤或抑制作用有效性的决定性指标。本专利技术的体内药效试验采用裸鼠皮下人癌异种移植瘤模型，通过隔日测量瘤径的方法，动态观察移植瘤的生长情况。实验结束时称取瘤重。本专利技术发现sp4对裸鼠皮下人骨肉瘤MG-63的异种移植瘤的肿瘤体积和重量均具有明显抑制作用，具有明显剂量-效应和时间-效应关系；相对肿瘤增殖率T/C(％)＝10.27±1.87，、肿瘤生长抑制率为88.31％，经统计学处理表明sp4具有强的抗肿瘤作用。而且sp4与阳性对照组紫杉醇的相对肿瘤增殖率T/C(％)的比较无明显差异(P>0.05)，这是评价受试物sp4是否有必要进入临床试验的重要指标之一。本专利技术的安全性在于采用急性毒性试验的最大耐受剂量检测，给动物静脉注射剂量为700mg/kgBW的sp4后，在24小时内未见毒性反应和死亡，在连续观察的2周内，也未见行为异常和死亡。体内药效试验中，各治疗组荷瘤裸鼠体重增长数据均与对照组无差异(P>0.05)，也均未出现死亡现象，如附图15。sp4的最大耐受剂量检测如表2、3所示。人早幼粒白血病细胞株HL-60在不同浓度sp4作用后，G0/G1期细胞表达量增加，S期细胞表达量减少，G2期细胞表达量减少，呈G1期阻滞，具有剂量-反应关系。在裸鼠皮下人骨肉瘤的异种移植瘤模型中，sp4的中、高剂量组和阳性对照紫杉醇组也均呈现明显G1期阻滞现象。端粒是一种位于染色体末端的特殊结构，端粒能维持细胞分裂。端粒酶能催化端粒DNA复制和延伸，导致癌细胞无限分裂增殖，抗端粒酶活性是抗肿瘤治疗的重要靶点之一，sp4对体外肿瘤细胞株及体内肿瘤组织内的端粒酶活性均具有显著抑制作用、均具有明显的剂量-效应关系。细胞周期是细胞生命活动的基本过程。用流式细胞仪检测细胞周期，发现经sp4处理后细胞被阻滞于G1期，提示sp4可能通过对端粒酶活性的抑制作用参与了对肿瘤细胞周期的调控。抑制端粒酶活性使细胞周期素依赖激酶CDK抑制剂的抑制活性增加。CDK抑制剂与细胞周期素D1竞争性结合CDK4，抑制CDK4活性增加，阻止细胞从G1期进入S期。附图说明图1.A、Bsp4的氨基酸组成；图2.sp4的化学合成过程示意图；图3.sp4色谱结果；图4.sp4质谱结果；图5.sp4的体外药效图；图5Asp4对人食管癌Eca109体外增殖活性的抑制率；图5Bsp4对人骨肉瘤MG63体外增殖活性的抑制率；图6.sp4体内抗肿瘤药效-肿瘤生长曲线；图7.sp4体内抗肿瘤药效-对荷瘤裸鼠肿瘤重量的抑制作用，注：不同浓度sp4后，相比较模型组，每组统计学差异变化。其中，*代表P<0.05；**代表P<0.01；***代表P<0.001；图8.sp4尾静脉给药抗肿瘤药效评价实验的图片结果；图中测量肿瘤体积大小的拍摄条件相同，各组肿瘤体积大小均按比例尺呈现在图8中；图9.sp4体内抗肿瘤药效评价指标-相对肿瘤增殖率T/C(％)；根据国家FDA规定，细胞毒类抗肿瘤药物，裸鼠移植瘤模型药效学评价标准：T/C(％)＞40％为无效；T/C(％)≤40％，并经统计学处理P＜0.05为有效。结果显示：sp4药物，低剂量时，治疗第19天开始表现为有效；中剂量时治疗第15天开始表现为有效；高剂量时，治疗第7天开始表现为有效；图10.sp4与阳性对照紫杉醇的体内抗肿瘤药效比较-sp4和紫杉醇的肿瘤生长曲线比较，两者之间未见明显差异(P>0.05)，纵座标为肿瘤体积、模座标为给药天数；图11.sp4与阳性对照紫杉醇的体内抗肿瘤药效评价指标-相对肿瘤增殖率T/C(％)比较，两者无明显差本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种合成肽sp4，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
2018.07.06 CN 20181073927931.一种合成肽sp4，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.如权利要求1所述的合成肽sp4的如下(1)至(8)中任一所述的应用：(1)预防和/或治疗肿瘤；(2)抑制肿瘤细胞的增殖和/或生长和/或侵袭；(3)增强抗肿瘤免疫反应；(4)诱导肿瘤细胞分化；(5)制备一类抗肿瘤药物；(6)抑制肿瘤端粒酶活性；(7...

【专利技术属性】
技术研发人员：张万琴，李荫田，吉学文，赵丽美，
申请(专利权)人：泰安市启航生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37