The present invention discloses a cell freeze solution for preparing dry-type tumor cell quality control product and its application. The cell freezing solution was formulated by adding 5%-25% protein to PBS, 3%-15% cell stabilizer A, 1%-10% cell stabilizer B and 0.01%-0.1% bacteriostatic agent. The cell freeze solution of the invention successfully solves the problems existing in the existing cell freeze-drying technology that the cell integrity rate after freeze-drying is extremely low or that the cell membrane structural protein and the active components of the cell contents can not be well preserved. The preparation method of the dry-type tumor cell quality control product of the invention is a quality control product directly prepared by a human tumor cell line containing the structure and content of cell membrane. The quality control product itself is derived from human tumor cells and has the same characteristics as the same kind of tumor cells in clinical liquid biopsy samples. The quality control product prepared by the method is suitable for the quality control of clinical liquid biopsy. It can promote the wide application of clinical liquid biopsy.
【技术实现步骤摘要】
一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用
本专利技术属于生物检测试剂领域；涉及一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用。
技术介绍
“液体活检技术”即从体液(血液、尿或胸腹水)中捕捉自由游走的癌细胞或癌DNA，以获得关于小肿瘤或潜藏肿瘤的信息。这将使医生能够监控癌症患者对治疗的反应，及时发现复发的早期征兆，甚至能早期发现癌变的迹象。现在诸多企业加快了相关技术的研发速度。Qiagen、罗氏、Illumina等成熟的生物技术公司，以及GuardantHealth、FoundationMedicine等初创公司，都在竞相将液体活检技术商业化，并计划在未来几年应用于临床。液体活检临床检验分析过程的质量控制对检验结果的准确性具有重要影响，临床检验质量控制确保了临床检验的准确性和有效性。所以，液体活检临床应用首先要有稳定可靠的质控品，干式细胞质控品相对液态细胞质控品保存效期更长，质量更稳定。肿瘤细胞株作为研究细胞癌变机理、肿瘤转移、肿瘤放疗和化疗敏感性分子基础等生物医学问题的重要材料，在不影响其细胞膜结构、外观形态以及内部主要成分(DNA和蛋白质)的前提下，建立一套肿瘤细胞长期保存的方法有着重要意义，能够解决临床上液体活检项目对肿瘤细胞质控品的强烈需求。目前高效地冷冻干燥肿瘤细胞株面临着许多技术问题。如细胞在降温和复温的过程中极容易受溶液冻结、融化、以及溶液渗透压力变化等因素的作用造成“溶液损伤”或“胞内冰损伤”，从而使得恢复率很低[1]。因此，能保持肿瘤细胞膜的形态与结构及主要内容物活性的肿瘤细胞干式细胞质控品的制备方法是急需解决的问题。专利技术...
【技术保护点】
1.一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液，其特征在于配方为：PBS中加入5％～25％的蛋白，3％～15％细胞稳定剂A，1％～10％细胞稳定剂B及0.01％～0.1％抑菌剂；其中所述的蛋白选自猪、牛、羊的酪蛋白、乳清蛋白或血清白蛋白中的一种或多种；所述的细胞稳定剂A选自猪、牛、羊血清或胎牛血清中的任意一种或多种；所述的细胞稳定剂B选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖中的任意一种或多种。
【技术特征摘要】
1.一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液，其特征在于配方为：PBS中加入5％～25％的蛋白，3％～15％细胞稳定剂A，1％～10％细胞稳定剂B及0.01％～0.1％抑菌剂；其中所述的蛋白选自猪、牛、羊的酪蛋白、乳清蛋白或血清白蛋白中的一种或多种；所述的细胞稳定剂A选自猪、牛、羊血清或胎牛血清中的任意一种或多种；所述的细胞稳定剂B选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖中的任意一种或多种。2.根据权利要求1所述的细胞冷冻液，其特征在于所述的PBS浓度为0.005M～0.1M,pH为6.8～7.5；所述的抑菌剂选自硫柳汞、叠氮钠中的任意一种。3.根据权利要求1～2中任一项所述的细胞冷冻液，其特征在于配方为PBS中加入5％～10％的蛋白，10％～15％细胞稳定剂A，5％～8％细胞稳定剂B及0.01％～0.03％抑菌剂。4.根据权利要求3所述的细胞冷冻液，其特征在于所述的细胞冷冻液配方为0.01M，pH7.0～7.4的PBS中加入5％～10％的BSA，10％～15％FBS，5％～8％海藻糖及0.01％～0.03％硫柳汞。5.权利要求1所述的细胞冷冻液在冷冻干燥肿瘤细胞中的应用。6.权利要求1所述的细胞冷冻液在制备干式肿瘤细胞质控品中的应用。7.一种干式肿瘤细胞质控品的制备方法，包括细胞的准备、细胞的固定和细胞的冷冻干燥；其特征在于所述的细胞冷冻干燥步骤中使用权利要求1所述的细胞冷冻液。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述的细胞固定方法为培养的肿瘤细胞离心去上清，加入5％～50％的有机溶剂25-28℃固定4h～24h；所述的有机溶剂选自：甲醇、甲醛或乙醇。9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于细胞的冷冻干燥条件为：设置温度：区段一:-50℃，区段二:-30℃，区段三:-15℃，区段四:0℃，区段五:20℃；设置时间：区段一:7h，区段二:9h，区段三:9h，区段四:9h，区段五:14h，一共冷冻干燥48h。10.按照权利要求7～9中任一项所述的制备方法制备的干式肿瘤细胞质控品。11.根据权利要求10所述的干式肿瘤细胞质控品，其特征在于所述的肿瘤细胞选自肺部肿瘤细胞、肝胆肿瘤细胞、食管肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胃部肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胰腺肿瘤细胞、甲状腺肿瘤细胞、乳腺肿瘤细胞、卵巢肿瘤细胞、子宫肿瘤细胞、脑部肿瘤细胞、白血病细胞、耳鼻喉肿瘤细胞、膀胱肿瘤细胞、肾脏肿瘤细胞或其他肿瘤细胞。12.根据权利要求11所述的干式肿瘤细胞质控品，其特征在于所述的肺部肿瘤细胞选自：NCI-H1734、SH-543、SH-416、SH-437、SH-498、SH-224、NCI-H2347、NCI-H2126、NCI-H23、SH-289、NCI-H2228、NCI-H1944、NCI-H292[H292]、NCI-H838[H838]、NCI-H1437[H1437]、MSTO-211H、95-D、Calu-1，A549、NCI-H358、NCI-H1299、NCI-H1650[H-1650,H1650]、HCC827、NCI-H1395、NCI-H1975[H-1975,H1975]、LTEP-a-2、SPC-A-1，NCI-H226、SK-MES-1、NCI-H460[H460]、NCI-H661、NCI-H1688、NCI-H446[H446]、QG-56；所述的肝胆肿瘤细胞选自：HepG2、HuH-7、BEL-7402、BEL-74...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈静，潘玥，
申请(专利权)人：江苏科德生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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