lncRNATC8260作为肺癌治疗靶点的应用制造技术

本发明专利技术公开了lncRNA TC8260作为肺癌治疗靶点的应用。lncRNA TC8260作为治疗靶点在制备或筛选治疗肺癌和/或肺癌转移的药物中的应用。lncRNA TC8260或促进lncRNA TC8260表达的物质在制备或筛选治疗肺癌和/或肺癌转移的药物中的应用。lncRNA TC8260在正常人支气管上皮细胞株HBE表达水平显著高于肺癌细胞株。健康对照者肺癌患者血清中lncRNA TC8260的表达水平显著高于肺癌患者血清。通过细胞划痕实验发现下调lncRNA TC8260可促进SPC

【技术实现步骤摘要】
TC8260，但目前尚无其作为肺癌治疗靶标的相关文献报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供lncRNA TC8260作为肺癌治疗靶点的应用。
[0007]本专利技术的另一目的是提供lncRNA TC8260作为肺癌诊断靶点的应用。
[0008]本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
[0009]lncRNA TC8260作为治疗靶点在制备或筛选治疗肺癌和/或肺癌转移的药物中的应用,lncRNA TC8260对应的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
[0010]lncRNA TC8260或促进lncRNA TC8260表达的物质在制备或筛选治疗肺癌和/或肺癌转移的药物中的应用。
[0011]lncRNA TC8260作为检测靶点在制备肺癌辅助诊断试剂中的应用。
[0012]检测lncRNA TC8260表达量的试剂在制备肺癌辅助诊断试剂中的应用。
[0013]作为本专利技术的一种优选，所述的检测lncRNA TC8260表达量的试剂为检测lncRNA TC8260的特异性引物。
[0014]作为本专利技术的进一步优选，所述的检测lncRNA TC8260的特异性引物如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示。
[0015]有益效果：
[0016]本专利技术前期试验发现采用NJ001封闭SP70能够显著抑制肺癌细胞的增殖、侵袭、转移，并能诱导其发生凋亡。因此，本专利技术利用NJ001封闭SP70后的SPC-A1细胞作为实验组，未使用NJ001封闭SP70的SPC-A1细胞作为对照组，筛选出差异表达的LncRNA TC8260。lncRNA TC8260在正常人支气管上皮细胞株HBE表达水平显著高于肺癌细胞株(SPC-A1、A549、H1299、H358、H460、H520)(P<0.05)。健康对照者中lncRNA TC8260的表达水平也显著高于肺癌患者血清(P<0.05)。通过细胞划痕实验对转染了lncRNA TC8260 siRNA及相应control的细胞迁移能力进行观察比较，如图6所示下调lncRNA TC8260可促进SPC-A1细胞迁移。可见lncRNA TC8260作为治疗靶点可以在制备或筛选治疗肺癌和/或肺癌转移的药物中应用。lncRNA TC8260也可以作为检测靶点在制备肺癌辅助诊断试剂中应用。
[0017]与现有的分子治疗靶标，如EGFR、ROS1、PD1等相比，lncRNA TC8260可为不符合治疗入选标准的晚期肺癌患者提供新的治疗策略选择，亦可为个体化靶向治疗无效的肺癌患者提供新的治疗思路，有利于具有潜在治疗价值的新型小分子药物的研发。
附图说明
[0018]图1.SPC-A1与SPC-A1+NJ001差异表达lncRNA聚类图。
[0019]注：SPC-A1+NJ001为NJ001处理24h的SPC-A1细胞。
[0020]图2.lncRNA EN5775、lncRNA TC8260、lncRNA TC9593在SPC-A1+NJ001及SPC-A1中相对表达量。
[0021]图3.lncRNA TC8260在肺癌细胞株及HBE中的相对表达量
[0022]其中1代表HBE，2代表SPC-A1，3代表A549，4代表H1299，5代表H358，6代表H460，7代表H520.
[0023]图4.lncRNA TC8260在肺癌患者血清中表达下调。
[0024]图5.lncRNA TC8260干扰片段的干扰效率
[0025]图6.划痕实验检测lncRNA TC8260 siRNA对SPC-A1细胞迁移能力的影响
具体实施方式
[0026]实施例1
[0027]为了筛选差异表达lncRNA，我们采用晶芯lncRNA微阵列芯片获得lncRNA表达谱。
[0028](1)细胞处理：选取处于对数生长期的SPC-A1细胞，消化收集制成单细胞悬液，6孔细胞培养板每孔铺板细胞量2
×
105个，培养过夜，吸弃培养上清，并用温浴的Hank
’
s液500μl每孔清洗细胞一遍。SP70封闭组每孔加入单抗NJ001溶液，终浓度为300ng/μl；对照组每孔加入500μl培养液，每组设3个平行孔。干预后培养36h后，弃尽6孔板中的细胞培养液，直接在培养板中加入1ml MZ裂解液裂解细胞，用MZ裂解液吹打细胞数次，对细胞进行消化、裂解。待细胞完全裂解后收集细胞悬液于无RNA酶的Eppendorf管中，漩涡振荡器振荡混匀后，直接用于下一步的RNA提取或置于-80℃冰箱冷冻保存。
[0029](2)RNA提取：使用miRcute miRNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)，按操作手册提取上述已加MZ裂解液的细胞悬液RNA。
[0030](3)RNA浓度及纯度测定：采用Nanodrop 2000超微量分光光度计(美国赛默飞)测定RNA样本A260/A280比值，在1.8～2.0之间，表示RNA纯度高，可用于后续实验。
[0031](4)基因芯片检测：基因表达谱芯片检测以待检测样品的总RNA为起始，通过质检后，反转录合成一链获得单链cDNA，再通过合成双链获得双链cDNA，而后在体外转录得到生物素标记的反义RNA(antisense RNA，aRNA)。使用磁珠纯化aRNA，除去盐、酶等杂质，片段处理，与芯片上的探针杂交。经水洗染色后，在芯片上扫描图像获得原始数据，最后进行数据分析。
[0032]通过lncRNA表达谱芯片检测，发现在SPC-A1+NJ001组与SPC-A1组间存在83个表达差异的lncRNA(图1)。
[0033]实施例2
[0034]通过实时荧光定量PCR的方法检测了封闭SP70的SPC-A1细胞中lncRNAEN5775、lncRNA TC8260、lncRNATC9593的表达水平，并将未封闭SP70的SPC-A1作为对照组。
[0035](1)逆转录反应：
[0036]20μl体系：RNA(调整至100μg-500μg)与4μl 5
×
PrimeScript RT Master Mix混匀，并用RNase-free水补齐至总体积20μl；逆转录条件为37℃15min，85℃5s和4℃∞；-20℃保存备用。
[0037](2)实时荧光定量PCR(Real-time PCR)：
[0038]PCR引物：以cDNA第一链为模板，以β-actin为内参照，扩增lncRNA EN5775、lncRNA TC8260、lncRNA TC9593。
[0039]用ddH2O将引物溶解至终浓度为100μmol/L，-20℃保存备用，工作浓度为10μmol/ml。引物序列见表1。
[0040]表1 PCR引物序列
[0041][0042]反应体系(20μl)：2...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.lncRNA TC8260作为治疗靶点在制备或筛选治疗肺癌和/或肺癌转移的药物中的应用,lncRNA TC8260对应的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示。2.lncRNA TC8260或促进lncRNA TC8260表达的物质在制备或筛选治疗肺癌和/或肺癌转移的药物中的应用。3.lncRNA TC8260作为检测靶点在制备肺癌辅助诊断试剂中的应用。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘世扬，徐娟，顾春荣，徐建，金岳心子，张世昌，王芳，
申请(专利权)人：江苏科德生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：