山豆根提取物的制备方法及山豆根提取物的应用技术

本发明专利技术公开了一种山豆根提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤一、浸提：将山豆根粗粉与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，浸提后得到浸提液；步骤二、浓缩：将浸提液减压处理至无乙醇味为止，得到浓缩液；步骤三、萃取：浓缩液酸化至pH为3～4，用乙酸乙酯萃取，得到萃取液；步骤四、洗脱：将萃取液减压旋蒸得浸膏，浸膏吸附处理，之后用乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液；步骤五、过滤：洗脱液进行膜分离过滤处理，得到过滤液；步骤六、干燥：过滤液浓缩干燥，得到山豆根提取物。本发明专利技术还公开了山豆根提取物的应用，制备的山豆根提取物对于鼻咽癌细胞CNE‑1和CNE‑2的生长具有非常好的抑制作用，可用于制备抗鼻咽癌药物。

Preparation of Sophora Root Extract and Application of Sophora Root Extract

The invention discloses a preparation method of the extract of Sophora japonica root, which includes the following steps: step 1, extraction: mixing the crude powder of Sophora japonica root with ethanol aqueous solution according to 1g:8-12mL, and obtaining the extract after extraction; step 2, concentration: decompressing the extract until no ethanol flavor, obtaining the concentrated solution; step 3, extraction: acidizing the concentrated solution to pH 3-4, extracting with ethyl acetate. Steps 4, elution: extract was obtained by decompression and spinning, and the extract was adsorbed, then gradient elution was carried out with ethanol aqueous solution to collect the eluent; Step 5, filtration: eluent was filtered by membrane separation to obtain the filtrate; Step 6, drying: filter solution was concentrated and dried to obtain the extract of Sophora japonica root. The invention also discloses the application of the extract of Sophora japonica root. The prepared extract of Sophora japonica root has a very good inhibitory effect on the growth of nasopharyngeal carcinoma cells CNE_1 and CNE_2, and can be used to prepare Anti-Nasopharyngeal cancer drugs.

【技术实现步骤摘要】
山豆根提取物的制备方法及山豆根提取物的应用
本专利技术涉及药物提取
，具体是一种山豆根提取物的制备方法及山豆根提取物的应用。
技术介绍
在我国鼻咽癌已经成为耳鼻咽喉恶性肿瘤的主要癌种和病死因素，在中国南部两广地区(如广东、广西等)尤其高发，发病率由南向北递减。发病率在20岁以上的人群中随着年龄增长递增，在45～60岁左右达到峰值。鼻咽癌的病因可能与遗传、环境和EB病毒感染等因素有关，目前比较有效的治疗手段提倡调强放疗。未来随着我国人口老龄化不断加重，鼻咽癌的发病、死亡水平可能还将不断上升，而由此带来的癌症负担也将持续增长，防控形势严峻，而目前有效治疗鼻咽癌的药物十分紧缺。山豆根，为豆科植物越南槐的干燥根和根茎，其苦，寒；有毒。有清热解毒，消肿利咽之功效，常用于火毒蕴结，乳蛾喉痹，咽喉肿痛，齿龈肿痛，口舌生疮。研究表明，山豆根主要含生物碱、黄酮及多糖类等成分，目前从山豆根分离得到生物碱类成分有20多种，以苦参碱、氧化苦参碱为主。已有动物实验表明，山豆根提取物对在体肿瘤生长有较好的抑制作用，其水提物能抑制多种肿瘤生长。现有技术的提取方法得到的山豆根提取物对于抗鼻咽癌肿瘤的抑制率低，效果差。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种山豆根提取物的制备方法及山豆根提取物的应用，制备的山豆根提取物对于鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2的生长具有非常好的抑制作用，可用于治疗鼻咽癌。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种山豆根提取物的制备方法，包括以下步骤：步骤一、提取：将山豆根粉碎后过筛得山豆根粗粉，将山豆根粗粉与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，浸提3～6天后得到第一浸提液，并将浸提过程中产生的滤渣与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，再次浸提3～6天后得到第二浸提液，合并第一浸提液和第二浸提液得到浸提液，其中，乙醇水溶液的体积分数为50％～80％；步骤二、浓缩：将浸提液减压处理至无乙醇味为止，得到浓缩液；步骤三、萃取：浓缩液酸化至pH为3～4，用乙酸乙酯萃取，萃取时浓缩液与乙酸乙酯的体积比为1:1～3，得到萃取液；步骤四、洗脱：将萃取液减压旋蒸得浸膏，浸膏用5～8倍重量的纯净水溶解后过大孔树脂柱进行吸附处理，吸附完成后用乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液中乙醇的含量为5％～95％；步骤五、过滤：向洗脱液中加入8～10倍体积的纯净水在8～10MPa的压力下进行膜分离过滤处理，得到过滤液；步骤六、干燥：过滤液采用反渗透膜或纳滤膜在8～10MPa的压力下浓缩干燥，得到山豆根提取物。优选的是，步骤一中的提取还可以通过以下过程进行：将山豆根粉碎后过筛得山豆根粗粉，将山豆根粗粉与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，加热至60～80℃，提取1～1.5小时，得到第一浸提液，并收集提取过程中的滤渣再与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，加热至60～80℃，提取1～1.5小时，得到第二浸提液，合并第一浸提液和第二浸提液得到浸提液，其中，乙醇水溶液的体积分数为50％～80％。优选的是，步骤二中浓缩时的温度为40～70℃，压力为0.1～0.8MPa。优选的是，步骤三中萃取具体为：浓缩液与乙酸乙酯按照体积比为1:1～3混合，搅拌均匀，静置分层，取乙酸乙酯层液体，得萃取液I，再将剩余的水相液体与乙酸乙酯按照体积比为1:1～3混合，搅拌均匀，静置分层，再取乙酸乙酯层液体，得萃取液II，萃取液II，再将剩余的水相液体与乙酸乙酯按照体积比为1:1～3混合，搅拌均匀，静置分层，再取乙酸乙酯层液体，得萃取液III，合并萃取液I、萃取液II、萃取液III，得到萃取液。优选的是，步骤四中大孔树脂柱的径高比为1:8～12，吸附完成后，先用3～10倍大孔树脂柱体积的纯净水洗脱，弃去水洗液，再用8～10倍大孔树脂柱体积的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，其中，乙醇水溶液的体积分数依次为20％、40％、60％、80％、95％。优选的是，步骤五中过滤时采用微孔滤膜过滤器进行膜分离过滤处理，微孔滤膜过滤器的孔径为500D或1KD或5KD或10KD。优选的是，步骤四中的洗脱操作可以替换为离心操作，具体为：向步骤三得到的萃取液中加入体积分数为50～65％的乙醇水溶液，混合离心、过滤后，得到离心液，再将离心液进行步骤五中的过滤操作。所述的山豆根提取物的制备方法得到的抗鼻咽癌提取物。所述的制备方法制备的山豆根提取物在抗鼻咽癌药物中的应用。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术制备的山豆根提取物对于鼻咽癌CNE-1细胞株具有较强的抑制生长作用，其于54.50μg/ml作用CNE-1细胞48小时后，到达了半数抑制生长的效果；对于鼻咽癌CNE-2细胞株具有较强的抑制生长作用，其于38.10μg/ml作用CNE-2细胞48小时后，到达了半数抑制生长的效果。本专利技术制备的山豆根提取物对于鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2的生长具有非常好的抑制作用，当加入的山豆根提取物的浓度达到100μg/ml时，48小时后，对于鼻咽癌细胞CNE-1的抑制率高达86.95％，对于鼻咽癌细胞CNE-2的抑制率高达96.13％，本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。<实施例1>步骤一、提取：将山豆根粉碎后过筛得山豆根粗粉，将山豆根粗粉与乙醇水溶液按照1g:8mL混合，浸提3天后得到第一浸提液，并将浸提过程中产生的滤渣与乙醇水溶液按照1g:8mL混合，再次浸提3天后得到第二浸提液，合并第一浸提液和第二浸提液得到浸提液，其中，乙醇水溶液的体积分数为50％；步骤二、浓缩：将浸提液置于提取浓缩罐中减压处理至无乙醇味为止，得到浓缩液；步骤二中浓缩时的温度为40℃，压力为0.1MPa。步骤三、萃取：浓缩液用盐酸酸化至pH为3～4，用乙酸乙酯萃取，萃取时浓缩液与乙酸乙酯的体积比为1:1，得到萃取液；步骤三中萃取具体为：浓缩液与乙酸乙酯按照体积比为1:1混合，搅拌均匀，静置分层，取乙酸乙酯层液体，得萃取液I，再将剩余的水相液体与乙酸乙酯按照体积比为1:1混合，搅拌均匀，静置分层，再取乙酸乙酯层液体，得萃取液II，再将剩余的水相液体与乙酸乙酯按照体积比为1:1混合，搅拌均匀，静置分层，再取乙酸乙酯层液体，得萃取液III，合并萃取液I、萃取液II、萃取液III，得到萃取液。步骤四、洗脱：将萃取液减压旋蒸得浸膏，浸膏用5倍重量的纯净水溶解后过大孔树脂柱进行吸附处理，吸附完成后用乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液中乙醇的含量为5％；步骤四中大孔树脂柱的径高比为1:8，吸附完成后，先用3倍大孔树脂柱体积的纯净水洗脱，弃去水洗液，再用8倍大孔树脂柱体积的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，其中，乙醇水溶液的体积分数依次为20％、40％、60％、80％、95％。步骤五、过滤：向洗脱液中加入8倍体积的纯净水置于微孔滤膜过滤器中，在8MPa的压力下进行膜分离过滤处理，得到过滤液；步骤五中微孔滤膜过滤器的孔径为500D或1KD或5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.山豆根提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、提取：将山豆根粉碎后过筛得山豆根粗粉，将山豆根粗粉与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，浸提3～6天后得到第一浸提液，并将浸提过程中产生的滤渣与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，再次浸提3～6天后得到第二浸提液，合并第一浸提液和第二浸提液得到浸提液，其中，乙醇水溶液的体积分数为50％～80％；步骤二、浓缩：将浸提液减压处理至无乙醇味为止，得到浓缩液；步骤三、萃取：浓缩液酸化至pH为3～4，用乙酸乙酯萃取，萃取时浓缩液与乙酸乙酯的体积比为1:1～3，得到萃取液；步骤四、洗脱：将萃取液减压旋蒸得浸膏，浸膏用5～8倍重量的纯净水溶解后过大孔树脂柱进行吸附处理，吸附完成后用乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液中乙醇的含量为5％～95％；步骤五、过滤：向洗脱液中加入8～10倍体积的纯净水在8～40MPa的压力下进行膜分离过滤处理，得到过滤液；步骤六、干燥：过滤液采用反渗透膜或纳滤膜在8～40MPa的压力下浓缩，得到山豆根提取物。

【技术特征摘要】
1.山豆根提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、提取：将山豆根粉碎后过筛得山豆根粗粉，将山豆根粗粉与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，浸提3～6天后得到第一浸提液，并将浸提过程中产生的滤渣与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，再次浸提3～6天后得到第二浸提液，合并第一浸提液和第二浸提液得到浸提液，其中，乙醇水溶液的体积分数为50％～80％；步骤二、浓缩：将浸提液减压处理至无乙醇味为止，得到浓缩液；步骤三、萃取：浓缩液酸化至pH为3～4，用乙酸乙酯萃取，萃取时浓缩液与乙酸乙酯的体积比为1:1～3，得到萃取液；步骤四、洗脱：将萃取液减压旋蒸得浸膏，浸膏用5～8倍重量的纯净水溶解后过大孔树脂柱进行吸附处理，吸附完成后用乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液中乙醇的含量为5％～95％；步骤五、过滤：向洗脱液中加入8～10倍体积的纯净水在8～40MPa的压力下进行膜分离过滤处理，得到过滤液；步骤六、干燥：过滤液采用反渗透膜或纳滤膜在8～40MPa的压力下浓缩，得到山豆根提取物。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤一中的提取还可以通过以下过程进行：将山豆根粉碎后过筛得山豆根粗粉，将山豆根粗粉与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，加热至60～80℃，提取1～1.5小时，得到第一浸提液，并收集提取过程中的滤渣再与乙醇水溶液按照1g:8～12mL混合，加热至60～80℃，提取1～1.5小时，得到第二浸提液，合并第一浸提液和第二浸提液得到浸提液，其中，乙醇水溶液的体积分数为50％～80％。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：缪剑华，宋志军，周小雷，王硕，姚彩云，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西,45