一种花生微管骨架免疫抗体标记方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学技术领域，特别涉及一种花生微管骨架免疫抗体标记方法，包括切取花生组织样本浸泡在微管固定液中进行固定；冷冻切片后依次用甲醇、NaBH4溶液、甘氨酸溶液浸泡浸泡去除非特异性荧光；封闭液浸泡后依次用α微管蛋白一抗工作液、FITC标记的二抗工作液孵育；加抗荧光淬灭剂后封片保存。本发明专利技术率先建立了花生组织水平上的微管骨架免疫标记方法，简单便捷，适用范围广，能准确清洗的观测到花生微管骨架，结果可靠稳定。

【技术实现步骤摘要】
一种花生微管骨架免疫抗体标记方法
本专利技术属于细胞生物学
，特别涉及一种花生微管骨架免疫抗体标记方法。
技术介绍
花生(ArachishypogaeaL.)是我国重要的油料作物之一，其总产居国内油料作物首位，是国产植物油的第二大来源，因此大力发展花生产业具有重要的经济意义和社会意义。目前，花生研究的重点是高产优质抗病品种的培育和配套栽培技术的研发。其中，花生分子生物学理论基础研究和生物技术研究取得了一定的进展，主要集中在花生品质和抗性的遗传改良、利用分子标记技术进行遗传作图构建以及花生重要基因的筛选上。同时，花生二倍体野生种全基因组测序也已经完成。微管是由α/β微管蛋白形成的异源二聚体重复聚合而形成的管状结构，是所有真核生物必不可少的结构。微管还存在一些附属蛋白质或其他物质。微管骨架以及附属的微管结合蛋白不仅维持细胞形状，保持细胞内部结构的有序性，而且也参与细胞运动、细胞伸长与分裂、物质运输、能量转换、信息传递、基因表达和细胞分化等生命活动。目前，农作物微管骨架的研究对象主要集中在个别材料的花粉粒等单个细胞上。组织水平上研究微管骨架的变化的报道极少。而在花生组织水平上对微管进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种花生微管骨架免疫抗体标记方法，其特征在于，包括如下步骤：材料固定：切取花生组织样本浸泡在微管固定液中，室温6～8h，得固定组织样本；其中，微管固定液为PEM混合液，其中含50mmol/L的哌嗪‑1,4‑二乙磺酸、5mmol/L的乙二醇二乙醚二胺四乙酸、5mmol/L的MgSO4以及质量浓度分别为0.3％的戊二醛、4％的多聚甲醛、0.01％的TritonX‑100及10％的二甲基亚枫；冷冻切片：在－35～－25℃下将固定组织样本制成切片；非特异性荧光的去除：包括如下步骤，S11，用－22～－18℃的甲醇浸泡切片12～18min，然后用漂洗液冲洗切片8～12min；S12，将S11中冲洗后...

【技术特征摘要】
1.一种花生微管骨架免疫抗体标记方法，其特征在于，包括如下步骤：材料固定：切取花生组织样本浸泡在微管固定液中，室温6～8h，得固定组织样本；其中，微管固定液为PEM混合液，其中含50mmol/L的哌嗪-1,4-二乙磺酸、5mmol/L的乙二醇二乙醚二胺四乙酸、5mmol/L的MgSO4以及质量浓度分别为0.3％的戊二醛、4％的多聚甲醛、0.01％的TritonX-100及10％的二甲基亚枫；冷冻切片：在－35～－25℃下将固定组织样本制成切片；非特异性荧光的去除：包括如下步骤，S11，用－22～－18℃的甲醇浸泡切片12～18min，然后用漂洗液冲洗切片8～12min；S12，将S11中冲洗后的切片用1mg/mL的NaBH4溶液浸泡25～35min，然后用漂洗液冲洗切片8～12min；S13，将S12中冲洗后的切片用50mmol/L的甘氨酸溶液浸泡25～35min，然后用漂洗液冲洗切片8～12min；免疫抗体标记并制片：包括如下步骤，S21，将S13中冲洗后的切片用封闭液浸泡25～35min，然后取出切片用α微管蛋白一抗工作液在25～35℃下孵育1.5～2.5h，再用漂洗液漂洗3次，每次6～10mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：张新友，韩锁义，李艺，董文召，苗利娟，杜培，臧秀旺，汤丰收，黄冰艳，郑峥，
申请(专利权)人：河南省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：河南,41