【技术实现步骤摘要】
一种类风湿因子抗原的制备、检测试剂盒及制备方法
本专利技术涉及生物试剂，具体涉及检测试剂盒，尤其涉及一种高特异性多聚变性IgG(类风湿因子抗原)的制备、以及一种线性范围宽、灵敏度高、制备成本低的类风湿因子胶乳免疫比浊检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
类风湿因子(RheumatoidFactor，RF)是一种以变性IgG为靶抗原的自身免疫性抗体，最初被发现于类风湿性关节炎患者的血清中。其本质是一种免疫球蛋白，主要为19S的IgM型类风湿因子，也有7S的IgG型和IgA型，而IgE型和IgD型的类风湿因子则较为少见。类风湿因子可识别变性IgGFc片段的CH2、CH3部分，无种属特异性，当两者形成免疫复合物时可激活补体，引起组织损伤。RF主要存在于类风湿性关节炎患者及某些自身免疫性疾病患者血清和关节液内，阳性率高达80％，某些免疫性疾病如系统性红斑狼疮、皮肌炎、干燥综合症等也常见RF阳性。部分健康老年人亦可见轻度阳性，阳性率5％。而正常人体内基本没有或含量很低，RF阳性率仅为2％。因此，类风湿因子被普遍认为是诊断类风湿性关节炎患者的重要指标之一，快速高效准确地检测RF...
【技术保护点】
1.一种类风湿因子抗原的制备方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：将IgG溶液与变性缓冲液在4℃平衡混合；IgG分子与变性剂充分作用后，于55℃～65℃的恒温水浴中热聚反应30～60min，得到多聚的变性IgG；使用透析缓冲液过滤除去杂质；用储存缓冲液稀释至浓度为5～30mg/mL并保存。
【技术特征摘要】
1.一种类风湿因子抗原的制备方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：将IgG溶液与变性缓冲液在4℃平衡混合；IgG分子与变性剂充分作用后，于55℃～65℃的恒温水浴中热聚反应30～60min，得到多聚的变性IgG；使用透析缓冲液过滤除去杂质；用储存缓冲液稀释至浓度为5～30mg/mL并保存。2.根据权利要求1所述的一种类风湿因子抗原的制备方法，其特征在于：所述变性缓冲液由下列配比成分组成：20mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris)、5～8mol/L尿素或2～3mol/L盐酸胍、10～15mmol/Lβ-巯基乙醇、0.5～2g/L叠氮化钠、纯化水，pH值为8.0；所述透析时采用的透析设备包括但不限于透析袋、中空纤维柱或超滤杯；所述透析缓冲液为20～100mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS)，含0.5～2g/L叠氮化钠，pH值为7.4；所述储存缓冲液由下列配比成分组成：20～100mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS)、100～200mML-精氨酸、30～60g/L海藻糖、0.5～2g/L叠氮化钠、纯化水，pH值为7.4。3.一种检测试剂盒，其特征在于，由试剂R1和试剂R2按体积比为4:1组成，所述试剂R2含有如权利要求1或2中任一项所述方法制备得到的类风湿因子抗原。4.根据权利要求3所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1由下列配比的成分组成：20～100mmol/L缓冲液、2～10g/L稳定剂、1～20g/L电解质、10～50g/L增敏剂、1～10g/L表面活性剂、0.5～2g/L防腐剂、以及纯化水，pH值为5.5～8.0。5.根据权利要求4所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，缓冲液选自磷酸盐缓冲液(PBS)、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液(MES)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液(HEPES)、3-(N-吗啉基)丙磺酸缓冲液(Mops)或三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris)、硼酸盐缓冲液中的任意一种，更优选为磷酸盐缓冲液，缓冲液pH值为5.5～8.0；所述稳定剂选自但不限于牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠或甘氨酸中的一种或多种；所述电解质为氯化钠或氯化钾中的一种或两种；所述增敏剂选自但不限于聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000或聚乙二醇20000，优选为聚乙二醇20000；所述表面活性剂选自但不限于吐温20、吐温80、曲拉通X-100、曲拉通X-405、聚乙二醇辛基苯基醚、乙二胺聚氧丙烯聚氧乙烯醚中的一种或多种；所述防腐剂为选自叠氮化钠、亚硝酸钠、N-甲基-异噻唑酮、N'-亚甲基-双[N'-(3-羟甲基-2,5-二酮-4-咪唑烷基)]脲或2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮的混合溶液中的一种或几种；所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭雅莉，景晟，孙卫兵，
申请(专利权)人：上海复星长征医学科学有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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