求取待测物在对比物中所占比例的方法、程序、存储介质及装置制造方法及图纸

一种利用待测物的测定试剂求取该待测物在对比物中所占比例的方法，其可利用与对比物浓度无关的单一校准曲线(多重校准曲线)，根据吸光度测定值容易地求取待测物在对比物中的所占比例。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】求取待测物在对比物中所占比例的方法、程序、存储介质及装置
本专利技术涉及测定待测物在对比物中所占比例的技术。
技术介绍
在临床检查的样品检验中，通过采集患者的血液、脑脊液、尿液、粪便、组织或细胞等作为待测样品，并对其中的蛋白质、酶、电解质、金属离子、脂类物质、醣类物质、维生素等化学物质进行测定而例如了解器官异常以及细菌或病毒等导致的感染状况。因此，样品检验可用作疾病诊断、确定治疗方案以及获得治疗效果指标的一种手段。为了使作为待测物的样品内各化学物质的测定值相对于基准值的量能够体现出相应待测器官的异常，可将该测定值以浓度表示，单位例如为mg/dL或mol/L。此外，可将酶或维生素以活性值表示，单位为酶单位或国际单位，如IU/L。上述待测物当中的一种为血糖，即葡萄糖。通过血糖检测，可了解糖尿病患者的病理状态(高血糖状态)，其单位例如在日本国内为mg/dL。血糖检查虽然可测得采血当时的正确血糖值，但是其无法测出随时处于变动状态(空腹时基准值为110mg/dL以下，饭后2小时的基准值为140mg/dL以下)的血糖值范围(血糖状态)。也就是说，其无法体现出作为糖尿病疗法的血糖控制效果。因此，为了更好地评价血糖控制效果，可将反映一段时间内血糖状态的蛋白质糖化程度用作指标。具体指标采用HbA1c或糖化白蛋白。首先，对HbA1c进行介绍。Hb(血红蛋白)为红血球中的色蛋白，该蛋白为由两个α亚基和两个β亚基组成的异质四聚体。当红血球在体内循环时，红血球中的Hb可与葡萄糖进行以非酶性方式(即取决于血糖浓度高低的方式)结合，生成糖化Hb，即HbA1。HbA1可根据其β亚基上结合的糖的类型分为若干种类，其中，β亚基的N端上结合葡萄糖的HbA1为HbA1c，用作反映采血后1～2个月时血糖状态的指标。HbA1c测定值采用HbA1c在总Hb中的比例，即HbA1c相对于总Hb的相对量的形式，单位为％。接下来，对糖化白蛋白进行介绍。血液蛋白中的大部分为白蛋白，与血红蛋白的情形相同，白蛋白在体内循环的过程中可与糖结合，形成糖化白蛋白。糖化白蛋白用作反映采血后2～3周时血糖状态的指标，其测定值采用糖化白蛋白在总白蛋白中的比例，即糖化白蛋白相对于总白蛋白的相对量的形式，单位为％。在HbA1c和糖化白蛋白之外，以待测物在对比物中所占比例(相对量)作为测定值的情形还例如为同工酶(如乳酸脱氢酶，该酶为所在组织、细胞或细胞器不同(即来源不同)的同工酶)。此外，将待测物占对比物的比例用作测定值的另一理由为：对比物总量随个人、性别、年龄、所患疾病等的不同而有所波动，因此以待测物浓度，即单位体积内的质量等物理量表示时，不能正确反映病理状态。以HbA1c为例，人体血液中的总Hb浓度，男性为13.1～16.6g/dL，女性为12.1～14.6g/dL。因此，总Hb浓度的基准值在不同性别、不同个人及同一个人内部均存在差异。此外，总Hb浓度还可因致贫血性疾病(缺铁性贫血、再生障碍性贫血等)、红血球增多症、脱水症状等发生较大变动。由于Hb以取决于血糖浓度高低的方式糖化，如果不使用能同时体现出HbA1c浓度与总Hb浓度这两者关系的值，那么即使以HbA1c的浓度表示，也会因总Hb浓度未知而无法正确体现血糖状态。换句话说，即使HbA1c浓度相同，对于总Hb浓度较高的人而言，HbA1c占总Hb的比例较低；而对于总Hb浓度较低的人而言，HbA1c占总Hb的比例较高。在以待测物在对比物中所占比例作为测定值进行求取的方法中，以HbA1c为例，第一种已知方法为HPLC法。在该方法中，直接根据待测物与对比物的峰面积求得HbA1c占总Hb的比例。第二种已知方法(例如，见专利文献1、2、3)为免疫法(凝集法或凝集抑制法)，其中，先分别求得样品中的HbA1c浓度和总Hb浓度，然后求得HbA1c占总Hb的比例。具体而言，首先使样品中的HbA1c和Hb变性，然后进行免疫反应，并根据免疫反应中产生的吸光度变化求得样品中的HbA1c浓度和总Hb浓度，最后再求出HbA1c占总Hb的比例。已知免疫法当中，有凝集法及凝集抑制法。第三种已知方法为酶法(见非专利文献1、2)，其中，先分别求得样品中的HbA1c浓度和总Hb浓度，然后求出HbA1c的占比。具体而言，首先使样品中的HbA1c和Hb变性，然后根据吸光度求得总Hb浓度。随后，针对HbA1c蛋白酶处理中生成的源自β亚基N端的糖化二肽，先以果糖基肽氧化酶，再以过氧化酶施加作用，以使其生成过氧化氢。其后，利用过氧化氢与生色剂之间的生色反应，通过吸光度测定求得HbA1c浓度，最后求出HbA1c占总Hb的比例。现有技术文献专利文献专利文献1第2596322号日本专利专利文献2第3550614号日本专利专利文献3第5465008号日本专利非专利文献非专利文献1ClinChem.51，A246，2005非专利文献2生物工学志，第92卷，第2期，62～68，2014。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题然而，上述第一种方法存在测定装置规模较大且价格高昂的问题，以及作为耗材的色谱柱价格昂贵的问题。另外，上述第二和第三种方法均需先以复杂的计算式从吸光度测定值中求得HbA1c浓度。这意味着，在测定时需要将试剂和样品的比例(体积比)保持恒定。具体而言，在用于求取HbA1c占总Hb的比例的实际测定中，由于需要在样品预处理(溶血处理、稀释处理或变性处理)及测定过程中至少进行两次以上的试剂与样品混合步骤，因此容易导致试剂和样品体积发生变化，从而不可避免地导致所测HbA1c浓度和总Hb浓度以及HbA1c占总Hb的比例的可靠性降低。即使假设采用上述第二和第三种方法当中的免疫法或酶法的反应体系不受试剂与样品体积比问题的影响，当直接根据吸光度测定值求取HbA1c占总Hb的比例时，如上所述，由于每种样品之间的总Hb浓度存在差异，因此需要针对所有总Hb浓度绘制无数的校准曲线，这在实际操作中并不可行。鉴于上述问题，本专利技术的目的在于提供一种求取待测物在对比物中所占比例的技术，尤其在对比物浓度随样品的不同而存在差异时，根据吸光度测定值，直接求取待测物在对比物中所占比例的技术。用于解决上述问题的技术方案根据本专利技术的一个方面，提供一种利用待测物的测定试剂求取该待测物在对比物中所占比例的方法，包括如下步骤：令具有不同对比物浓度的各待测物稀释系列与所述测定试剂发生反应，求得所述各待测物稀释系列因该反应而产生的吸光度变化量，根据该吸光度变化量获得多条校准曲线，求得可使该多条校准曲线收敛为一条校准曲线的针对各对比物浓度的浓度系数，在该求取过程中获得：待测物在对比物中所占比例(％)＝X/(浓度系数×对比物浓度)(1)；以及求得表示针对各对比物浓度的浓度系数与对比物浓度之间关系的回归方程。求得所述吸光度变化量的步骤包括：令含有待测物的样品与所述测定试剂发生反应，求得因该反应而产生的单个特征波长下吸光度的增大或减小的变化量；或者令含有待测物的样品与所述测定试剂发生反应，求得因该反应而产生的两个特征波长下吸光度的增大或减小的变化量，该变化量为在吸光度发生增大或减小的第一波长下的第一吸光度与在吸光度发生增大或减小的第二波长下的第二吸光度之间的差值或比值。所述测定试剂为采用免疫法当中的凝集法或凝集抑制法或采用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用针对待测物的测定试剂求取该待测物在对比物中所占比例的方法，其特征在于，包括如下步骤：令具有不同对比物浓度的各待测物的稀释系列与所述测定试剂发生反应，求得各所述待测物的稀释系列因所述反应而产生的吸光度变化量，根据所述吸光度变化量获得多条校准曲线，求得可使所述多条校准曲线收敛为一条校准曲线的针对每一对比物浓度的浓度系数，在所述求取过程中获得：待测物在对比物中所占比例(％)＝X/(浓度系数×对比物浓度)(1)；以及求得表示针对每一对比物浓度的浓度系数与该对比物浓度之间关系的回归方程。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.13 JP 2016-0966811.一种利用针对待测物的测定试剂求取该待测物在对比物中所占比例的方法，其特征在于，包括如下步骤：令具有不同对比物浓度的各待测物的稀释系列与所述测定试剂发生反应，求得各所述待测物的稀释系列因所述反应而产生的吸光度变化量，根据所述吸光度变化量获得多条校准曲线，求得可使所述多条校准曲线收敛为一条校准曲线的针对每一对比物浓度的浓度系数，在所述求取过程中获得：待测物在对比物中所占比例(％)＝X/(浓度系数×对比物浓度)(1)；以及求得表示针对每一对比物浓度的浓度系数与该对比物浓度之间关系的回归方程。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，求得所述吸光度变化量的步骤包括：令含有待测物的样品与所述测定试剂发生反应，求得因所述反应而产生的单个特征波长下吸光度的增大或减小的变化量；或者令含有待测物的样品与所述测定试剂发生反应，求得因所述反应而产生的两个特征波长下吸光度的增大或减小的变化量，该变化量为在吸光度发生增大或减小的第一波长下的第一吸光度与在吸光度发生增大或减小的第二波长下的...

【专利技术属性】
技术研发人员：安藤沙智子，吉野学，
申请(专利权)人：荣研化学株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP