一种粪产碱杆菌的新用途制造技术

本发明专利技术公开了一种粪产碱杆菌的新用途，属于生物医药技术领域。即，一种粪产碱杆菌在头孢菌素C发酵菌株发酵培养中提高所产头孢菌素C效价和产量的用途。本发明专利技术为头孢菌素C高产菌株的培养提供了新方法，通过本发明专利技术获得的高产菌株遗传性状稳定，在大生产的使用上和初始菌株相比，不会增加额外的生产工序，但头孢菌素C产量得到明显提高，杂质的种类和数量显著降低，本发明专利技术有效提高了头孢菌素C生产菌株的生产能力，节能环保，适于广泛推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种粪产碱杆菌的新用途
本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种粪产碱杆菌的新用途。
技术介绍
粪产碱杆菌是一种具有多种变异性的菌体，其菌体带有基因可制造一些酵素，所以他在生物工程中应用很广泛。此菌中的许多种类可产生一些非天然的氨基酸，故在制药工业上应用也很广泛。有些种类被发现具有分解作为杀虫剂或除草剂的二氯苯氧基乙酸的能力。另外，粪产碱杆菌可以应用于废水处理中的活性污泥法中，利用该菌分解废水中的有机物。但此前从未应用于菌株培养方面。头孢菌素类抗生素属β-内酰胺类抗生素，在临床抗病原微生物感染方面起到重要的作用，自上世纪60年代应用于临床以来得到广泛的应用，是临床主要抗感染药物，而头孢菌素C是头孢类抗生素的主要骨架。由于头孢菌素C的生产属于传统发酵工业，废水废渣的排放量和能耗较大，对环保处理造成很大的压力，随着国家对环保要求的逐步提高，以及生产成本的压力，提高发酵液单位体积产量是重要选项，而提高发酵液单位体积产量的关键是提高菌种的生产能力，诸如化学诱变、物理诱变和原生质体融合等，以及代谢控制选育、基因工程改造等方法，是已知常用的选育方法。目前，化学诱变、物理诱变和原生质体融合等高产菌株选育方法存在正负突变、选育方向性不确定、选育周期长、选育效率低等问题。代谢控制选育、菌种基因工程改造方法则方法复杂、所需设备多、且须知晓目标产物合成途径或阐明产物合成基因功能序列等问题。因此，为了提高竞争力，必须要降低生产成本，提高头孢菌素C发酵效价和头孢菌素C的收率。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种粪产碱杆菌的新用途。本专利技术的技术方案为：一种粪产碱杆菌在头孢菌素C发酵菌株发酵培养中提高所产头孢菌素C效价和产量的用途。作为优选方案，所述头孢菌素C发酵菌株为顶头孢霉菌。作为优选方案，所述粪产碱杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保存编号为：CICC10981；保藏日期为2014年8月29日。一种粪产碱杆菌在头孢菌素C发酵菌株培养方面的应用方法，将粪产碱杆菌菌种放入培养基中活化，将其加入顶头孢霉菌发酵瓶中进行胁迫培养，迫使顶头孢霉菌朝着多产头孢菌素C的方向发生基因突变，以此筛选获得头孢菌素C高产菌株。粪产碱杆菌对顶头孢霉菌的胁迫培养过程为：1）按牛肉膏0.2%、蛋白胨0.6%、酵母膏0.4%的成分配比，制成斜面培养基，取粪产碱杆菌菌种深冷管斜面活化，活化斜面加10ml保护液；2）取顶头孢霉菌G-17-89菌株深冷管500ml茄瓶斜面活化，培养基：麦芽糖4%、干酪素1%、麦芽粉2.4%、琼脂粉1.7%、自然PH。斜面生长好的种子埋深冷管，接种瓶，28℃，培养3d；3）取种子液0.25ml接装有25ml发酵培养基的250ml发酵瓶，发酵培养基：淀粉3%、全脂豆粉4%、玉米浆4%、(NH4)2CO31.0%、蛋氨酸0.74%、MgSO40.32%、CaCO31%、豆油5%、FeSO4·7H2O0.01%、CuSO4·H2O0.002%、MgSO4·H2O0.0032%、ZnSO4·7H2O0.02%；4）取0.05ml粪产碱杆菌活化液加入步骤3）的发酵瓶；5）发酵瓶在25℃下，摇床培养至143h，取0.25ml发酵液做种子再接发酵瓶，同时测143h发酵液效价，依次连续接四次发酵瓶并测每次发酵瓶效价；6）对第四次发酵液进行平板单菌落分离，挑选出效价高的单菌落；以此菌株进行下一轮粪产碱杆菌胁迫选育；7）胁迫选育高产菌株进行遗传稳定性实验。本专利技术的有益效果为：1、本专利技术公开了粪产碱杆菌的一个新用途，即，头孢菌素C发酵菌株发酵培养中提高头孢菌素C产量和效价的用途。2、本专利技术为头孢菌素C高产菌株的培养提供了新方法，通过本专利技术获得的高产菌株遗传性状稳定，在大生产的使用上和初始菌株相比，不会增加额外的生产工序，但头孢菌素C产量得到明显提高，杂质的种类和数量显著降低，本专利技术有效提高了头孢菌素C生产菌株的生产能力，节能环保，适于广泛推广应用。具体实施方式实施例1菌种来源：顶头孢霉菌G-17-89，购自位于北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼的中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CICC40514。粪产碱杆菌，购自位于北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼的中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CICC10981。粪产碱杆菌的新用途：粪产碱杆菌对顶头孢霉菌G-17-89（CICC40514）的胁迫培养：1）按牛肉膏0.2%、蛋白胨0.6%、酵母膏0.4%的成分配比，制成斜面培养基，取粪产碱杆菌（中国工业微生物菌种保藏管理中心，保存编号为：CICC10981）菌种深冷管斜面活化，活化斜面加10ml保护液；2）取顶头孢霉菌G-17-89菌株深冷管500ml茄瓶斜面活化，培养基：麦芽糖4%、干酪素1%、麦芽粉2.4%、琼脂粉1.7%、自然PH；斜面生长好的种子埋深冷管，接种瓶，培养基：麦芽粉2.4%、胰蛋白胨1.0%、酵母粉2.7%、豆油0.5%、碳酸铵0.5%、PH调制7.20；28℃，培养3d；3）取种子液0.25ml接装有25ml发酵培养基的250ml发酵瓶，发酵培养基：淀粉3%、全脂豆粉4%、玉米浆4%、(NH4)2CO31.0%、蛋氨酸0.74%、MgSO40.32%、CaCO31%、豆油5%、FeSO4·7H2O0.01%、CuSO4·H2O0.002%、MgSO4·H2O0.0032%、ZnSO4·7H2O0.02%；4）取0.05ml粪产碱杆菌活化液接种至步骤3）的发酵瓶；5）发酵瓶在25℃下，摇床培养至143h时，取0.25ml发酵液做种子液再接发酵瓶，同时测143h发酵液效价，依次连续接四次发酵瓶并测每次发酵瓶的效价；6）对第四次的发酵液进行平板单菌落分离，挑选效价最高的G-17-89-163单菌落传斜面；7）对上述第4项斜面生长好的种子埋深冷管；8）用第5项深冷管种子重复2-8项的操作，依此类推。实验结果如表1、表2所示。表1四次胁迫发酵数据统计由上表可知，随着粪产碱杆菌胁迫次数的增多，顶头孢霉菌G-17-89菌株为了对抗敏感菌粪产碱杆菌的威胁产生的头孢菌素C逐渐增多，说明本专利技术的设计是可行有效的。表2第四次发酵瓶分离菌株效价统计由上表可知，筛选出一株突变菌株G-17-89-163，与初始菌株相比，G-17-89-163头孢菌素C产量提高了14.0%，具有明显差异。实施例2：顶头孢霉菌突变菌株G-17-89-163头孢菌素C遗传稳定性实验培养基：1）斜面培养基：麦芽糖4%、干酪素1%、麦芽粉2.4%、琼脂粉1.7%、自然PH。2）种子液培养基：麦芽粉2.4%、胰蛋白胨1.0%、酵母粉2.7%、豆油0.5%、碳酸铵0.5%。3）发酵培养基：淀粉3%、全脂豆粉4%、玉米浆4%、(NH4)2CO31.0%、蛋氨酸0.74%、MgSO40.32%、CaCO31%、豆油5%、FeSO4·7H2O0.01%、CuSO4·H2O0.002%MgSO4·H2O0.0032%、ZnSO4·7H2O0.02%。实验过程：1）按上述培养基配方配制后121℃灭菌30min，备用；2）将突变菌株G-17-89-163接种到斜面培养基上，进行传代培养，连续传六代，培养好的菌株放4℃冰箱保存；3）把培养好的斜面接本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种粪产碱杆菌在头孢菌素C发酵菌株发酵培养中提高所产头孢菌素C效价和产量的用途。

【技术特征摘要】
1.一种粪产碱杆菌在头孢菌素C发酵菌株发酵培养中提高所产头孢菌素C效价和产量的用途。2.如权利要求1所述用途，其特征在于：所述头孢菌素C发酵菌株为顶头孢霉菌。...

【专利技术属性】
技术研发人员：周汝德，董庆茹，李振森，董超，齐步祥，
申请(专利权)人：菏泽睿智科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37