一种分离纯化葛根素的方法技术

本发明专利技术提供一种分离纯化葛根素的方法。包括(1)将干燥的葛根原料粉碎，加乙醇提取得葛根粗提液(2)过木质纤维素树脂(3)洗脱液真空浓缩(4)双水相萃取(5)超滤(6)真空干燥得分离纯化的葛根素产品。产品中葛根素含量为40‑50％。本发明专利技术方法采用木质纤维素树脂联合双水相萃取分离纯化葛根素，只用水和乙醇作为媒介不使用其他试剂，可以有效除去杂质纯化葛根素，全部制备过程安全环保。本发明专利技术方法简单，成本低，可操作性强，适合工业化生产，有较大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种分离纯化葛根素的方法
本专利技术涉及中药制备,具体涉及中药有效成分的分离纯化方法，尤其涉及一种分离纯化葛根素的方法。
技术介绍
葛根素(Puerarin)由中药葛根提取的有效成分葛根黄酮的主要成分，是葛根中的主要活性物质。具有退热、镇静和使冠状动脉血流量增加的作用，对垂体后叶素引起的急性心肌出血有保护作用等。临床上用于冠心病心绞痛、高血压。对于葛根素的分离纯化主要方法有：正丁醇萃取法、酸水解法、大孔树脂吸附法等。近年工业上集中于采用各类大孔吸附树脂，如CN201010136218.1专利采用大孔树脂吸附法(AB-8树脂)对葛根总黄酮溶液进行纯化获得葛根素产物。CN102532111采用D101大孔吸附树脂富集纯化葛根素，但大孔树脂在生产中存在有毒致孔剂残留的安全隐患，因此在食品等行业的使用非常谨慎。201610473507.8专利提供了一种双水相萃取-超声波连用分离提纯葛根素，其采用聚乙二醇-无机盐双水相，但该方法需用截留相对分子质量5000的透析膜透析20-26h除去聚乙二醇高分子，耗时长，聚乙二醇用量大、价格高。201110280671.4专利采用无水乙醇-磷酸二氢钾双水相体系分离葛根总黄酮，但单次分离时上相会留有部分盐类杂质，无法除去，且对葛根素的分离效果不明确。木质纤维素是天然可再生木材经过化学处理、机械法加工得到的有机絮状纤维物质，无毒、无味、无污染、无放射性。木质纤维是一种廉价而来源广泛的可再生天然资源，由苯基丙烷单元随机聚合而成，含有羟基(—OH)、甲氧基(—OCH3)、醛基(—CHO)等功能基团，具有良好的吸附性能。木质纤维不溶于水，其比表面积大，混合后会形成三维网状结构。且其特有的结构黏性，会使烘干后的物料均匀稳定的附着于表面。木质纤维常用于过滤，其作为填充剂树脂的应用并不常见，且纤维素再生处理比较方便，利用度高。双水相萃取是依据物质在两相间的选择性分配。当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力(如氢键、离子键)等的存在和环境因素的影响，使其上下相中的浓度不同，分配系数K为物质在两相的浓度比，由于物质的K值不同，则可利用双水相萃取体系对物质进行分离。传统的双水相指高聚物-高聚物双水相体系，两相间的大分子由于界面张力等因素不对称，产生了空间阻隔效应，无法相互渗透。而对于新型体系形成机理，大部分学者认为，高聚物-盐-水体系的形成是盐析作用；普通有机物乙醇、异丙醇类形成的双水相机理是一个盐溶液与有机溶剂争夺水分子形成缔合水合物的结果。因此，研究开发如何利用木质纤维素树脂以及多次双水相体系结合方法进行分离纯化葛根素具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计不带入任何有毒有害试剂，方法简单易行，有效成分提取收率高，安全环保，能规模性生产的分离纯化葛根素的方法。本专利技术提供一种分离纯化葛根素的方法。本专利技术方法采用木质纤维素树脂联合双水相萃取分离纯化葛根素。本专利技术方法包括以下步骤：(1)将干燥的葛根原料粉碎，加8-12倍重量的乙醇，乙醇浓度为60-85％，加热回流1h，共提取2次，将2次提取液离心，取上清液浓缩至干物率15-30％，过滤后的清液为葛根粗提液；(2)过木质纤维素树脂：先将木质纤维素用85％乙醇浸泡后缓慢装玻璃柱，待用；将所述葛根粗提液缓缓加入至木质纤维素中，边加边搅拌，搅拌均匀后置于烘箱内60-80℃温度烘干，烘干后的树脂干法上木质纤维素树脂，用75-85％乙醇溶液洗脱，采用紫外监控，收集250nm高峰洗脱液；(3)洗脱液真空浓缩(温度50-65℃、压力在0.05Mpa-0.08Mpa)至乙醇浓度在20-40％，用乙醇计监控；(4)双水相萃取：在浓缩液中加无机盐，搅拌后静置；在紫外监控下，分别测上相与下相中的250nm吸光值，反复萃取：取上相溶液，继续加无机盐。无机盐用量为上相溶液的10-30％，反复2-3次，取最终上相溶液真空浓缩至无乙醇；下相部分通过400-600D纳米滤膜，透过部分真空浓缩后冷却重结晶，可重复使用无机盐成分；(5)超滤：上相溶液过3000D超滤膜，采用紫外监控，直至截留液中无250nm吸收峰，3000D超滤膜的透过液继续过400-600D纳米滤膜，用电导仪在线监控，直至截留液中电导率小于15，表明盐类杂质全部通过，取400-600D纳米滤膜的截留液，浓缩至浓缩液的干物率在24-26％；(6)真空干燥：经超滤后的浓缩液采用真空干燥(温度50-65℃、压力在0.05Mpa-0.08Mpa)，得分离纯化的葛根素产品。本专利技术方法得到的产品中葛根素含量为40-50％。本专利技术方法所述步骤(1)优选加入10倍重量的70％乙醇提取。步骤(2)乙醇洗脱液的浓度为75-85％，优选80％乙醇进行洗脱，所述纤维素与葛根粗提液的质量比为1:2-3。步骤(4)无机盐选自磷酸氢二钾、硫酸钠或硫酸铵，优选磷酸二氢盐；所述浓缩液与无机盐的比例为6:1-8:1。本专利技术采用的木质纤维素树脂洗脱液是高浓度乙醇，浓缩到一定程度，加入适量的无机盐即可形成双水相体系。静置后葛根素大量存在于上相的醇体系中，但仍有少量的盐存在。多次取上相溶液反复多次，可重新使两相物质平衡，不断提高上相中葛根素的含量，但最终上相中仍然会存在少量带入的盐类杂质。下相部分可通过400-600D纳米滤膜，透过部分浓缩后冷却重结晶，可回收无机盐成分。由于葛根素的分子量为416，用3000D的超滤膜可以除去部分蛋白质等高分子物质，并全部保留葛根素。透过液再进行400-600D纳米滤膜，可除去盐类杂质及小分子低聚糖物质，虽然葛根素在理论上可以部分通过400-600D纳滤膜，但是实际操作中由于葛根素的空间结构、其他物质的存在及膜孔的不均匀性，大量的葛根素被截留下来。纳滤膜截留液浓缩至一定浓度，进行真空干燥，可得到>40％的葛根素。而现有市场上食品使用的葛根提取物大致在10％左右，现有技术很难提高其含量。本专利技术的效果：1.创新性地采用木质纤维素作为吸附材料。木质纤维是一种廉价但来源广泛的可再生天然资源，无毒、无味、无污染、无放射性，耐高温。用水进行再生处理，烘干后即可再次使用，重复利用度高。2.创新性地将木质纤维、双水相萃取及膜过滤系统结合，环环相扣，在只用水和乙醇作为媒介不使用其他试剂的前提下，可以有效除去杂质纯化葛根素，全部制备过程安全环保。3.双水相反复萃取可不断提高葛根素的含量，且超滤工艺可将引入的盐类杂质除去。4.本专利技术简单，可操作性强，适合工业化生产，有较大的应用价值。附图说明：图1：葛根素标准品的HPLC图谱。葛根素标准品购自中检所。图2：实施例1过木质纤维素树脂洗脱液的HPLC图谱。图3：实施例1双水相上相及下相的葛根素紫外图谱。图4：实施例13000D超滤膜及400-600D纳滤膜溶液的葛根素紫外图谱。左图为3000D超滤膜截留液和透过液的紫外图谱、右图为400D纳滤膜截留液和透过液的紫外图谱图5：实施例1最终葛根素产品HPLC图谱。具体实施方式以下实施例所用原料与试剂除另有说明外，可以通过市售得到。中药葛根原料为柴葛根，购自陕西，原料符合2015版中国药典标准。实施例一：将干燥的葛根原料粉碎，取100g粉碎的原料，加1L的70％乙醇，加热回流1h本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离纯化葛根素的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将干燥的葛根原料粉碎，加8‑12倍重量的乙醇，乙醇浓度为60‑85％，加热回流1h，共提取2次，将2次提取液离心，取上清液浓缩至干物率15‑30％，过滤后的清液为葛根粗提液；(2)过木质纤维素树脂：先将木质纤维素用85％乙醇浸泡后缓慢装玻璃柱，待用；将所述葛根粗提液缓缓加入至木质纤维素中，边加边搅拌，搅拌均匀后置于烘箱内60‑80℃温度烘干，烘干后的树脂干法上木质纤维素树脂，用75‑85％乙醇溶液洗脱，采用紫外监控，收集250nm高峰洗脱液；(3)洗脱液真空浓缩，温度50‑65℃、压力0.05Mpa‑0.08Mpa至乙醇浓度为20‑40％，用乙醇计监控；(4)双水相萃取：在浓缩液中加无机盐，搅拌后静置；在紫外监控下，分别测上相与下相中的250nm吸光值，反复萃取：取上相溶液，继续加无机盐。无机盐用量为上相溶液的10‑30％，反复2‑3次，取最终上相溶液真空浓缩至无乙醇；下相部分通过400‑600D纳米滤膜，透过部分真空浓缩后冷却重结晶，可重复使用无机盐成分；(5)超滤：上相溶液过3000D超滤膜，采用紫外监控，直至截留液中无250nm吸收峰，3000D超滤膜的透过液继续过400‑600D纳米滤膜，用电导仪在线监控，直至截留液中电导率小于15，表明盐类杂质全部通过，取400‑600D纳米滤膜的截留液，浓缩至浓缩液的干物率在24‑26％；(6)真空干燥：经超滤后的浓缩液采用真空干燥，温度50‑65℃、压力0.05Mpa‑0.08Mpa，得分离纯化的葛根素产品。...

【技术特征摘要】
1.一种分离纯化葛根素的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将干燥的葛根原料粉碎，加8-12倍重量的乙醇，乙醇浓度为60-85％，加热回流1h，共提取2次，将2次提取液离心，取上清液浓缩至干物率15-30％，过滤后的清液为葛根粗提液；(2)过木质纤维素树脂：先将木质纤维素用85％乙醇浸泡后缓慢装玻璃柱，待用；将所述葛根粗提液缓缓加入至木质纤维素中，边加边搅拌，搅拌均匀后置于烘箱内60-80℃温度烘干，烘干后的树脂干法上木质纤维素树脂，用75-85％乙醇溶液洗脱，采用紫外监控，收集250nm高峰洗脱液；(3)洗脱液真空浓缩，温度50-65℃、压力0.05Mpa-0.08Mpa至乙醇浓度为20-40％，用乙醇计监控；(4)双水相萃取：在浓缩液中加无机盐，搅拌后静置；在紫外监控下，分别测上相与下相中的250nm吸光值，反复萃取：取上相溶液，继续加无机盐。无机盐用量为上相溶液的10-30％，反复2-3次，取最终上相溶液真空浓缩至无乙醇；下相部分通过400-600D纳米滤膜，透过部分真空浓缩后冷却重结晶，可重复使用无机盐成分；(5)超滤：上相溶液过3000D超滤膜，采用紫外监控，直至截留液中无250nm吸收峰，300...

【专利技术属性】
技术研发人员：周慧吉，汤健俭，
申请(专利权)人：上海诺德生物实业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31