本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及PTEN(phosphatase and tensin homolog)基因的上游开放读码框(uORF,up–stream open reading frame)及其编码多肽的应用。发明专利技术人发现了PTEN的5’UTR存在一个潜在的96个碱基的开放读码框(31aa‑uORF)，可以编码31个氨基酸的短肽(命名为PTEN‑31aa)，其在肿瘤的发生、发展过程中具有重要作用。本发明专利技术为与PTEN表达调控相关的疾病，尤其是神经胶质瘤提供了新的诊断、治疗方法和药物筛选平台。本发明专利技术还提供了一种多肽，用于PTEN表达调控相关的疾病治疗。
【技术实现步骤摘要】
一种PTEN基因的上游开放阅读框31aa-uORF核苷酸及其编码的多肽的应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及PTEN(phosphataseandtensinhomolog)基因的上游开放读码框(uORF,up–streamopenreadingframe)及其编码蛋白的应用。
技术介绍
神经胶质瘤(脑胶质瘤)(Glioma)是一类起源于大脑的肿瘤，通常由胶质细胞病变后产生，是人类中枢神经系统中最常见的一类恶性肿瘤。WHO根据肿瘤的临床病理评价又把胶质瘤分为I-IV期，其中I期纤维型星型母细胞瘤病症最轻，而IV期多形性胶质母细胞瘤病症恶性程度最高，这是最常见应用范围最广的分期(Louisetal.,2007)。CBTRUS统计表明恶性胶质瘤在原发性恶性脑肿瘤中占有高达70％的比例，发病率大约为十万分之五。恶性胶质瘤的临床治愈率非常低，5年存活率仅仅高于胰腺癌和肺癌。在美国每年大约有一万个恶性胶质瘤患者接受治疗，其中大约有一半的病人能活过一年，而这些人中大约只有四分之一的能活过两年。近年来随着新的治疗手段的出现患者的存活期有明显延长(Nakazatoetal.,2008)。因此加强对恶性胶质瘤发病机制的研究，全面了解恶性胶质瘤的发病机理，才能最终寻找出疗效更好的新的治疗方案。恶性胶质瘤的发病机制很复杂，目前尚未明确。但是有研究表明遗传性基因异常如NF(neurofibromatosis，1型和II型)以及TSC(tuberoussclerosiscomplex)基因突变会促进恶性神经胶质瘤的发展(Reussetal.,2009)。当然很多不同的癌基因的异常表达也跟恶性胶质瘤的发展有关(Raderetal.,1993)。DNA修复基因：ERCC1，ERCC2以及XRCC1的遗传性的多态性会增加患胶质瘤的风险。也就是说DNA修复机制的改变或者缺失会促进胶质瘤的生成(Adeletal.,2014)。在胶质瘤中最常见的突变发生在异柠檬酸脱氢酶I和II(isocitratedehydrogenase，IDH1，IDH2)基因上，有高达80％的低危型胶质瘤和中度恶性胶质瘤都在IDH1基因上携带同一个突变(Cohenetal.,2013)。一项对51例脑胶质瘤病人长期取样结果研究表明IDH1基因突变是最早期可以检测到的突变，它发生在P53基因突变和染色体lp/19q联合性缺失之前，所以说IDH1基因突变是突变的最早期助力(Watanabeetal.,2009)。除IDH1和IDH2外，外恶性胶质瘤的发生发展过程中还有很多其它基因突变，例如：1)在其他肿瘤中少见的EGFR(epidermalgrowthfactorreceptor)扩增或者重排在脑胶质瘤中却占有很高的比例(Zadehetal.,2013)；2)在大多数肿瘤中比较常见的P53基因突变在各种类型的胶质瘤中出现的比例都非常高(例如：在低恶性程度的星形胶质瘤肿瘤中出现的比例高达60％)(Zhengetal.,2008)；3)PTEN(phosphataseandtensinhomolog)突变在原发性的胶质母细胞瘤中也达到了约30％(Zhengetal.,2008)；4)1p/19q染色体的杂合缺失(lossofheterozygosity)在不同类型的胶质瘤中出现的概率不同，在少突胶质母细胞瘤中出现的概率高达90％，但是在弥漫性星形细胞瘤中出现的概率却仅为百分之十五(Ducrayetal.,2009)。尽管有不少研究都涉及到恶性胶质瘤的病因，但是具体详细的分子机制仍是未知，值得我们深入探究，从而为临床治疗提供更好的指导。同源性磷酸酶-张力蛋白(PhosphataseandTensinhomolog，PTEN)的编码基因PTEN位于染色体10q23.3，是人类多种肿瘤(如脑癌、乳腺癌、前列腺癌)中最常见的因为缺失或突变而下调的基因之一(Lietal.,1997)。作为一个抑癌基因，PTEN在调控细胞生长、侵袭、凋亡、DNA损伤修复以及肿瘤细胞放化疗抵抗力等方面发挥着重要的作用(Deanetal.,2005；Koul,2008；Mellinghoffetal.,2005；MingandHe,2012；Ortega-MolinaandSerrano,2013)。PTEN表达的缺失被认为是胶质瘤发展中的早期事件，而PTEN突变发生在60％的GBM中，是其最常见的基因改变(Biancoetal.,2003；Srividyaetal.,2011)。PTEN的主要功能是PI3K/Akt通路的负调控因子。与PI3K作用相反，PTEN通过去磷酸化将PIP3转变为PI-4,5-P2，通过降低Akt的活化而抑制下游所有由Akt调控的信号通路(Trotmanetal.,2006)。过往研究显示，在胶质瘤中，PI3K/Akt通路的活化直接影响胶质瘤的恶性程度，并在GBM的发展恶化过程中起关键作用(Rodriguezetal.,2011；Sonodaetal.,2001)。尽管过往研究显示抑癌基因PTEN在胶质瘤中具备重要的调控作用，但具体机制依然不明确，因此发现PTEN在胶质瘤中的所有活性变异体并探索其抑癌机制对于揭示胶质瘤的发生发展过程具有重要的意义。目前胶质瘤治疗的标准方案是规范化诊疗，以手术治疗为主，手术治疗的原则是在尽可能保护肿瘤周围正常脑组织的原则下尽量最大限度的切除肿瘤，以达到降低患者术后复发和转移的概率、大大提高患者的生存率和生存质量的目的。当然除手术治疗外，结合多学科治疗，尤其是化疗、免疫、中药的等辅助手段对脑胶质瘤的治疗越来越受到关注。目前化疗治疗胶质瘤临床一线药物是烷基类化合物替莫唑胺(Temozolomid，TMZ)，具体原理为在生理PH条件下TMZ经快速非酶催化转变成活性化合物MTIC，MTIC可以将鸟嘌呤的06和N2位点烷基化从而发挥细胞毒性作用。但是患者对TMZ的敏感度取决于MGMT甲基转移酶的表达量，它们之间呈负相关，所以限制TMZ在临床的广泛应用。胶质瘤的免疫治疗方面可以从这几个方面下手：脑胶质瘤免疫抑制(如针对CDLA-4蛋白的抗体可以提高脑胶质瘤模型鼠的存活率，还有很多其他的靶向免疫调节蛋白的抗体正在临床试验中)、脑胶质瘤疫苗(临床试验中，例如ATL-DC疫苗治疗脑胶质瘤患者，32位受试者中有28位表现出免疫应答，大大提高临床治疗效果)。中药治疗胶质瘤目前还停留于整体治疗的阶段，通过调理集体的阴阳、气血、脏腑功能的平衡，从而在整体水平控制胶质瘤的发展与转移、减少复发、提高患者的生存期和生活质量。还有一些中药化合物单体在临床前的细胞实验上也显示了很好的抗胶质瘤活性，中药的质量标准化、安全性和毒性问题不解决，将大大限制其应用于临床治疗。上游开放读码框(uORF,up-streamopenreadingframe)是一类位于mRNA5`非翻译区的开放读码框。uORF可以调控真核生物基因表达(Lovettetal.,1996)。通常来说上游开放读码框的翻译都会抑制其相应母本基因的表达(Vilelaetal.,2003)。在细菌中，上游开放读码框也叫作先导肽，是在研究调控参与氨基酸合成或者转移的基因时首次发现的(Lovettetal.,1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸片段31aa‑uORF或其编码的多肽PTEN‑31aa；优选地，所述的31aa‑uORF具有SEQ ID NO：1所述的核苷酸序列；所述的PTEN‑31aa具有SEQ ID NO：2所述的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种核酸片段31aa-uORF或其编码的多肽PTEN-31aa；优选地，所述的31aa-uORF具有SEQIDNO：1所述的核苷酸序列；所述的PTEN-31aa具有SEQIDNO：2所述的氨基酸序列。2.PTEN基因的上游开放阅读框31aa-uORF核苷酸序列、或与其编码同等氨基酸序列的核苷酸序列、或其编码的多肽PTEN-31aa在制备治疗/预防肿瘤的药物中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的31aa-uORF核苷酸序列如SEQIDNO：1；所述的PTEN-31aa具有SEQIDNO：2所述的氨基酸序列。4.31aa-uORF核苷酸序列或其编码的多肽PETN-31aa的检测试剂在制备用于肿瘤诊断和/或预后判断的试剂中的应用；优选地，所述的31aa-uORF核苷酸序列如SEQIDNO：1；所述的PTEN-31aa具有SEQIDNO：2所述的氨基酸序列；优选地，所述的肿瘤诊断和/或预后判断的试剂包括：用于检测31aa-uORF的探针，或扩增31aa-uORF的引物，或者抗PTTN-31aa蛋白的抗体。5.一种用于治疗/预防肿瘤的药物组合物，该药物组合物含有：31aa-uORF核苷酸序列、或与其编码同等氨基酸序列的核苷酸序列、或其编码的多肽PETN-31aa；优选地，所述的31aa-uORF核苷酸序列如SEQIDNO：1；所...
【专利技术属性】
技术研发人员：张弩，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。