一种猪圆环病毒2型毒株、疫苗组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种猪圆环病毒2型新的基因亚型的毒株，该毒株具有良好的、广谱的免疫原性。其制备的疫苗组合物能预防和/或治疗猪圆环病毒2型感染导致的相关疾病，且能对不同地域来源的毒株均具有良好的免疫保护效力。

【技术实现步骤摘要】
一种猪圆环病毒2型毒株、疫苗组合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种毒株、其制备的疫苗组合物、制备方法和应用，属于动物病毒学领域。
技术介绍
猪圆环病毒(Porcinecircoviruses，PCV)是单股环状的DNA病毒，基因组长度约为1.7kb，是最小的动物DNA病毒之一。已经确定有两种类型的PCV，即猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)。PCV1于1974年首次在PK细胞培养物中作为一种污染物鉴定而发现，其对猪只没有致病性。PCV2于1998年首次报道，其在临床条件下能引起猪只的猪圆环病毒相关疾病(Porcinecircovirusassociateddiseases，PCVAD)，主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征，肺炎,猪皮炎和肾病综合征和繁殖障碍，主要表现为呼吸、泌尿、肠道、淋巴、心血管、神经、繁殖系统以及皮肤的功能紊乱，对全世界的生猪养殖造成了重大的经济损失。PCV2主要有两种基因亚型PCV2a和PCV2b，两者基因组长分别为1767和1768个核苷酸，还有一种PCV2c仅在丹麦有过报道。2003年之前PCV2a是主要流行株，之后PCV2b开始出现并迅速扩大范围，2009年又发现新的基因亚型PCV2d。临床上，随着PCV2疫苗的普遍应用，在免疫压力下，PCV2的变异速度加快。近年来，一类介于PCV2b与PCV2d之间的新的基因亚型的毒株开始流行，这类病毒特征是ORF2基因中存在突变或存在不同基因亚型基因之间的重组。由于该新的PCV2基因亚型毒株的流行，且其抗原与现有的基因亚型之间存在差异，而现有的商品化疫苗均以PCV2a或PCV2b为疫苗株来制备的，不能对最新流行的毒株进行完全的保护，因此针对该最新流行的毒株制备新的疫苗，对猪场疾病控制十分重要。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供一种预防和/或治疗新的猪圆环病毒2型感染的疫苗组合物，该疫苗组合物能针对猪圆环病毒2型病毒提供有效的保护，显示出显著的免疫特性。为此，本专利技术的一个目的在于提供一种猪圆环病毒2型毒株，属于现在流行的新的基因亚型，其具有良好的、广谱性的免疫原性。本专利技术的另一个目的在于提供一种预防和/或治疗新的猪圆环病毒2型感染的疫苗组合物，所述疫苗组合物包含免疫量的本专利技术所述的猪圆环病毒2型毒株的抗原以及药学上可接受的载体。本专利技术的另一个目的在于提供一种预防和/或治疗猪圆环病毒2型各基因亚型感染以及它们混合感染的疫苗组合物。本专利技术的另一个目的在于提供一种预防和/或治疗不同地域来源的猪圆环病毒2型各基因亚型感染以及它们混合感染的疫苗组合物。本专利技术的另一个目的是提供一种制备所述疫苗组合物的方法，包括：步骤(1)增殖所述的猪圆环病毒2型毒株；步骤(2)灭活所述步骤(2)增殖的猪圆环病毒2型毒株，加入佐剂，乳化。本专利技术的另一个目的在于提供上述疫苗组合物在制备预防和/或治疗猪圆环病毒2型相关疾病的药物中的应用。专利技术优点：(1)本专利技术毒株具有良好的免疫原性，免疫一次，即能刺激机体快速地产生免疫力，有效保护毒株的攻击，具有很好的保护作用，能以较低的抗原含量达到良好的免疫保护作用，进一步降低生产成本；(2)本专利技术首次采用猪圆环病毒2型新的基因亚型的毒株制备的疫苗组合物，其不仅能针对猪圆环病毒2型新的基因亚型的毒株提供保护，还能对猪圆环病毒2型不同基因亚型的毒株单独感染或混合感染提供预防和/或治疗；(3)本专利技术的疫苗，能针对不同地域来源的猪圆环病毒2型毒株提供完全保护，具有广谱的保护能力。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。“猪圆环病毒2型new基因亚型”是指一种新的PCV2基因亚型，其在ORF2基因中存在突变或存在不同基因亚型之间的重组，具有PCV2b的标签序列，但在遗传进化分析中组成一个独立分支，猪只感染该基因亚型的毒株后出现的临床表征有：持续性高温，食欲减退、精神沉郁、被毛粗乱、消瘦和生长速度减缓，剖检均出现不同程度肺实变、淋巴肿大、肾有坏死点。本专利技术涉及猪圆环病毒2型HH3株(PorcineCircovirustype2，strainHH3)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO.V201726，保藏日期为2017年6月4日，保藏地址：中国武汉·武汉大学。本专利技术的猪圆环病毒2型HH3株属于猪圆环病毒2型new基因亚型，其免疫原性与现有技术中的PCV2基因亚型均存在差异。该毒株具有良好的免疫原性，制备的疫苗能够有效激发免疫保护作用。本专利技术提供的新的猪圆环病毒2型基因组长为1768个核苷酸，具有PCV2b的标签序列，但在遗传进化分析中却组成一个独立分支，ORF2基因中存在突变或存在不同基因亚型之间的重组，是一种新PCV2基因亚型。本专利技术还涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物含有所述免疫量的所述猪圆环病毒2型HH3株抗原以及药学上可接受的载体。本专利技术的疫苗组合物具有良好的免疫原性，免疫一次，即能刺激机体快速地产生免疫效力，有效保护毒株的攻击，实现完全保护。所述猪圆环病毒2型HH3株抗原可以是猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的灭活抗原、减毒全病毒抗原。“培养物”是病毒的不同代次传代培养物，本领域技术人员知晓不同代次之间其基因序列仅可能会发生微小的变异。“疫苗组合物”指含有猪圆环病毒2型免疫原性的药物组合物。该药物组合物可诱发、刺激或增强猪只针对猪圆环病毒2型的免疫反应。“灭活抗原”，也称作失活疫苗，指的是用作抗原以产生免疫力的灭活病毒的混悬液。灭活疫苗的例子包括全病毒疫苗和裂解型疫苗。使用已知方法可以很容易地产生灭活疫苗。例如，通过用甲醛溶液处理病毒可获得全病毒灭活疫苗。裂解型疫苗可在用醚处理后由病毒包膜制备得到。“减毒全病毒抗原”指的是以毒力已经减弱但仍可在宿主体内或细胞上复制的病毒。本专利技术所用的术语“减毒”用于指以使病原丧失致病性、但保持免疫原性的方式对基因进行突变来人工降低病原体毒性。通常，通过UV辐射、化学处理或体外连续高阶继代培养实现减毒。或者是人工的基因改变，例如将已知序列中的特定核苷酸缺失以使毒力减弱。作为本专利技术的一种实施方式，所述猪圆环病毒2型HH3株抗原为猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的全病毒灭活抗原。作为本专利技术的一种实施方式，所述猪圆环病毒2型HH3株抗原为猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的裂解型抗原。病毒的不同代次传代培养物基因序列仅可能会发生微小的变异，能保证同样的免疫原性，其制备的灭活疫苗能具有相似的免疫效力。作为本专利技术的一种实施方式，所述猪圆环病毒2型HH3株培养物为≥1代次的培养物。作为本专利技术的一种优选实施方式，所述猪圆环病毒2型HH3株培养物为≥5代次的培养物。作为本专利技术的一种更优选实施方式，所述猪圆环病毒2型HH3株培养物为5～48代次的培养物。本专利技术的组合物的成分或组分的量优选地是治疗有效量。所述治疗有效量是指在组合物施用的宿主中发挥它们的免疫学作用而不导致过度副作用所必需量。所用的成分和待施用的组合物的精确的量将根据多种因素如治疗的疾病的类型，待治疗的动物的类型和年龄，施用的方式，以及组合物中的其它成分而变化。作为本专利技术的一种实施方式，所述猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前≥105.0TCID50/ml。本专利技术的疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.猪圆环病毒2型HH3株(Porcine Circovirus type 2，strain HH3)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO.V201726，保藏日期为2017年6月4日，保藏地址：中国武汉·武汉大学。

【技术特征摘要】
1.猪圆环病毒2型HH3株(PorcineCircovirustype2，strainHH3)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO.V201726，保藏日期为2017年6月4日，保藏地址：中国武汉·武汉大学。2.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物含有免疫量的权利要求1所述的猪圆环病毒2型HH3株抗原以及药学上可接受的载体。3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述猪圆环病毒2型HH3株抗原为猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的全病毒灭活抗原。4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其中，所述猪圆环病毒2型HH3株培养物为≥1代次的培养物；优选地，所述猪圆环病毒2型HH3株培养物为≥5代次的培养物；更优选地，所述猪圆环病毒2型HH3株培养物为5～48代次的培养物。5.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其中，所述猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前≥105.0TCID50/ml；优选地，所述猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前105.0～107.0TCID50/ml；更优选地，所述猪圆环病毒2型HH3株或其培养物的灭活全病毒抗原含量为灭活前106.0TCID50/ml。6.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述药学上可接受的载体为佐剂，所述佐剂包括白油、德雷克油，以及动物油、植物油或矿物油；或氢氧化铝、磷酸铝及金属盐；或MontanideTMGel、卡波姆、角鲨烷或角鲨烯、ISA206佐剂、皂苷、油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂；优选地，所述佐剂为MontanideTMGel；所述佐剂含量为5～20V/V％；更优选地，所述佐剂含量为10V/V％。7.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物还含有由免疫量的以下抗原组成的组中的一种或多种：猪瘟病毒抗原、猪伪狂犬病病毒抗原、猪流感病毒抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原、猪细小病毒抗原、猪乙型脑炎病毒抗原、副猪嗜血杆菌抗原、猪链球菌抗原、猪波氏杆菌抗原、猪传染性胸膜肺炎抗原、猪多杀性巴氏杆菌抗原、猪霍乱沙门氏菌抗原、猪肺炎支原体抗原、猪鼻支原体抗原；优选地，所述疫苗组合物还含有由免疫量的以下抗原组成的组中的一种或多种：猪瘟病毒减毒抗原、猪伪狂犬病病毒减毒抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒减毒抗原、猪细小病毒灭活抗原、副猪嗜血杆菌灭活抗原、猪肺炎支原体灭活抗原；优选地，所述疫苗组合物还含有由免疫量的以下抗原组成的组中的一种或多种：猪瘟病毒减毒抗原、猪伪狂犬病病...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，姚亚丽，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41