一种分离自白花蛇舌草中的化合物制造技术

本发明专利技术涉及天然化合物分离领域，具体涉及一种分离自白花蛇舌草中的新型化合物。本发明专利技术从白花蛇舌草水中提取分离得到的化合物diffusoside D并公开其在制备抗子宫内膜炎药物中的应用。本发明专利技术针对白花蛇舌草水提液中30％乙醇洗脱部位进行了系统分离，综合使用硅胶柱色谱、MCI凝胶柱、Sephadex LH‑20凝胶柱色谱、ODS中压液相色谱以及反相半制备HPLC等分离技术，分离过程中得到新型化合物diffusoside D，并且研究过程中发现，化合物diffusoside D具有良好的抗子宫内膜炎活性，应用于制备抗子宫内膜炎的药物具有重要的研究意义。

【技术实现步骤摘要】
一种分离自白花蛇舌草中的新型化合物
本专利技术涉及天然化合物领域，具体涉及一种分离自白花蛇舌草水提取物中的新型化合物及其治疗子宫内膜炎作用。
技术介绍
从中药提取物中开发先导化合物为本领域技术人员常用的研究手段，如多西他赛、紫杉醇、长春新碱、伊立替康等，在临床上取得显著的疗效。白花蛇舌草作为中药抗癌药物的一味常用药，白花蛇舌草的抗肿瘤作用已基本得到验证，如已上市的白花蛇舌草注射液亦作为抗肿瘤辅助用药；关于白花蛇舌草化学成分及其药理活性的研究始于60年代，到目前为止，已从其中分离鉴定了约80余个不同结构类型的化合物，但其确切的抗肿瘤化学成分仍并不清楚，根据文献报道，特别是从白花蛇舌草化学成分的数量、结构及生物活性等方面看，白花蛇舌草化学成分及其药理活性的研究内容较为分散，粗提物活性报道较多，文献对60％乙醇提取部位化学成分研究报道较多，而对水提取部位化学成分研究报道较少。岳俊威硕士论文从水溶性部位仅仅分离鉴定了5个化合物，分别为谷甾醇、去乙酰车叶草酸、D-甘露醇、对香豆酸、车叶草苷；未见其他白花蛇舌草水提取部位化学成分文献报道，这与白花蛇舌草在临床中传统的应用不相辅。而药理活性方面文献报道白花蛇舌草水提物对WEHI-3细胞诱导白血病小鼠有抗白血病活性，能抑制人肝癌HepG2细胞增殖，增强低剂量5-氟尿嘧啶的抑制cdk2-e2f1信号通路的效果，从而增强其抗癌活性。曾永长等报道白花蛇舌草水提物HD-1在体外能明显抑制HepG2、HCT-116细胞的增值，体内能抑制荷瘤小鼠S180肉瘤生长。另有报道白花蛇舌草水提物对白血病K562、CEM细胞的生长具有明显的抑制作用，对多药耐药白血病细胞HL-60/ADR的生长具有极强的抑制作用。从以上研究结果可以看出，研究白花蛇舌草中的化学成分，确认具有抗肿瘤、抗氧化的单体成分对于新型化合物的开发具有重要意义。除此之外，白花蛇舌草中的单体化合物还可能具有与白花蛇舌草不同的功效，现有技术中关于白花蛇舌草中单体成分的分离和药效研究较少，关于白花蛇舌草水提液中化合物的分离就更为空白，开展关于白花蛇舌草提取液中单体物质的分离及活性鉴定，对于活性药物的开发具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术针对白花蛇舌草水提液中30％乙醇洗脱部位进行了系统分离，分离得到新型化合物diffusosideD。该化合物结构如下：针对以上技术问题，本专利技术技术方案如下：本专利技术第一专利技术，提供一种新型化合物，命名为diffusosideD，该化合物结构式如下：本专利技术第二方面，提供上述化合物的分离方法，步骤如下：(1)将白花蛇舌草加水提取，将水提取液通过大孔树脂富集，分别加水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇洗脱，将洗脱液减压浓缩后真空干燥，得到30％乙醇洗脱部位A。(2)将30％乙醇洗脱部位A加入乙酸乙酯-乙醇溶剂系统进行梯度洗脱，依次得到A1-A6六个部分。(3)将上述A6部分经MCIgel柱色谱分离得到A6-1～A6-5五个部分。(4)将上述A6-5部分经SephadexLH-50柱色谱洗脱得到A6-5-1、A6-5-2、A6-5-3三个部分。(5)将上述A6-5-3部分通过ODS中压制备液相及半制备高效液相分离依次得到化合物①-⑧，其中化合物③即为diffusosideD。优选的，步骤(1)中将白花蛇舌草加入纯化水回流提取1-3次，减压浓缩后过D101型大孔树脂柱，分别用水，30％乙醇，50％乙醇，95％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，真空干燥，得30％乙醇洗脱部位A。进一步优选的，白花蛇舌草加水提取两次，第一次2h，第二次1h，将提取液合并减压浓缩至白花蛇舌草五倍量。优选的，步骤(2)将30％乙醇洗脱部位A经乙酸乙酯-乙醇系统进行梯度洗脱，当乙酸乙酯与乙醇体积比为1:1时，得到A6部分。优选的，上述A6部分通过MCIgel柱色谱，通过5％-10％乙腈-水梯度洗脱依次得到A6-1～A6-5五个部分。优选的，上述A6-5部分经SephadexLH-50柱色谱洗脱得到A6-5-1、A6-5-2、A6-5-3三个部分，其中流动相为50％甲醇。优选的，A6-5-3部分通过ODS中压制备液相及半制备高效液相分离依次得到化合物①-⑧，其中ODS中压制备液相洗脱程序为10-40％甲醇，半制备高效液相的流动相为7％乙腈-水，色谱柱为YMC-PackODS-A半制备柱(5μm，250×10mmI.D.)。本专利技术的第三方面，提供药物组合物，该药物组合物由化合物diffusosideD及其他抗抗子宫内膜炎成分组成。本专利技术的第四方面，提供一种药物制剂，该药物制剂由化合物diffusosideD及药学上可接受的辅料制成；优选的，化合物diffusosideD给药剂量为10-50mg/kg。本专利技术的第五方面，提供化合物diffusosideD、上述药物组合物、上述药物制剂在制备抗子宫内膜炎药物中应用。本专利技术的有益效果本专利技术提供了一种分离自白花蛇舌草水提液中的新型化合物diffusosideD，该化合物具有抗子宫内膜炎活性，治疗剂量为10-50mg/kg。本专利技术对diffusosideD的研究为白花蛇舌草单体化合物的开发提供了新的研究方向。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。图1化合物diffusosideD的分离方法流程图；图2化合物diffusosideD的信号峰归属图；图3化合物diffusosideD的13CNMR谱图(DMSO-d6)；图4化合物diffusosideD的1HNMR谱图(DMSO-d6)；图5化合物diffusosideD的HSQC谱图(DMSO-d6)；图6化合物diffusosideD的HMBC谱图(DMSO-d6)；图7化合物diffusosideD的H-HCOSY谱图(DMSO-d6)；图8化合物diffusosideD的ESI-MS谱图(positive)；图9化合物diffusosideD的ESI-MS谱图(negative)。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。正如
技术介绍
所介绍的，现有技术中关于白花蛇舌草水提物中的单体成分分离及活性研究还较为空白，为了解决如上的技术问题，本申请提出了一种分离自白花蛇舌草水提物中的新型化合物及其抗子宫内膜炎作用。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本申请的技术方案。本专利技术中的仪器与材料来源如下：NMR:BRUKER400MHzFTNMR型核磁共振仪Agilent1100LC/MSDTrap离子阱液质联用仪(Agilent公司)LC-10AD高效液相色谱仪，SPD-10A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型化合物，命名为diffusoside D，所述化合物结构式如下：

【技术特征摘要】
1.一种新型化合物，命名为diffusosideD，所述化合物结构式如下：2.权利要求1所述化合物diffusosideD的分离方法，其特征在于，步骤如下：(1)白花蛇舌草加水提取，将水提取液通过大孔树脂富集，分别加水、30％乙醇、50％、95％乙醇洗脱，将洗脱液减压浓缩后真空干燥，得到30％乙醇洗脱部位A；(2)将所述30％乙醇洗脱部位A加入乙酸乙酯-乙醇溶剂系统进行梯度洗脱，依次得到A1-A6六个部分；(3)将所述A6部分经MCIgel柱色谱分离得到A6-1～A6-5五个部分；(4)将所述A6-5部分经SephadexLH-50柱色谱洗脱得到A6-5-1、A6-5-2、A6-5-3三个部分；(5)将所述A6-5-3部分通过ODS中压制备液相及半制备高效液相分离依次得到化合物①-⑧，其中化合物③即为diffusosideD。3.如权利要求2所述的分离方法，其特征在于，步骤(1)中白花蛇舌草干品加入纯化水回流提取1-3次，减压浓缩后过D101型大孔树脂，分别用水，30％乙醇，50％乙醇，95％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，真空干燥，得30％乙醇洗脱部位A；优选的，所述白花蛇舌草干品加水提取两次，第一次2h，第二次1h，将提取液合并减压浓缩至白花蛇舌草干品五倍量。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨培民，马传江，马河，辛义周，曹广尚，王信，贾静，
申请(专利权)人：山东中医药大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东,37