冰冻切片包埋剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种冰冻切片包埋剂及其制备方法和应用，涉及临床学应用技术领域，本发明专利技术提供的冰冻切片包埋剂，包括蔗糖、增稠剂、稳定剂、塑化剂、助溶剂、抗菌剂和水。通过各特定组分和配比之间的协同配合，使得本发明专利技术提供的冰冻切片包埋剂稳定性强，具有不破坏生物组织、冻结速度快、切片无皱折、韧性较好的优点，且各组分均无毒副作用，使得本发明专利技术提供的冰冻切片包埋剂安全、有效、无毒、无污染。此外，其成本低廉，可工业化生产，满足了国内市场的需求。本发明专利技术提供的上述冰冻切片包埋剂的制备方法，包括将配方量的原料混合均匀。该方法工艺简单，操作简便，可节约大量的人力物力，便于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
冰冻切片包埋剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及临床学应用
，尤其是涉及一种冰冻切片包埋剂及其制备方法和应用。
技术介绍
随着人类以及其它物种基因组测序的逐步完成，现代生物学的研究已经进入了后基因组时代——功能基因组时代。近年来，随着免疫组化实验的开展，冰冻切片被广泛应用于生物各个领域，临床医师在手术过程中通过冰冻切片可以对手术方案的诊断性进行病理学检查，冰冻切片在这个过程中起着十分重要的作用，而包埋剂是切片质量的关键。冰冻切片具有操作简便、快捷、环境污染小、组织抗原损伤小等特点，在抗原的保存上有其不可取代的优势，而且对类脂、脂肪等成分的保存效果很好，更能完好的保存大部分的抗原活性及各种酶类，同时对有机溶剂或热温度耐受差的细胞表面抗原和水解酶的保存就更好，这就使得冰冻切片在科学研究及临床诊断方面得到广泛应用。冰冻切片是较难掌握实验技术之一，高质量的冰冻切片对确保科研实验结果以及临床诊断的科学性、准确性以及可靠性及其重要。冰冻切片是在恒低温条件下，组织通过速冻达到一定硬度后再进行切片的一种方法。通过包埋剂对组织进行包埋，再进行切片，实现了冰冻切片的连续切片，以此为组织形态学、发育生物学和医学影像学等基础医学研究提供一定的技术支持。在科研实验的免疫组织化学染色中，能较好地保存细胞抗原的活性，在操作上减少了对组织固定、脱水、透明、包埋等中间环节。目前组织样品的制样方法主要有三类，一类是石蜡切片，一类是冰冻切片，一类是固定冰冻切片。冰冻切片样品的基本流程是将新鲜样品直接用液氮速冻，进行冰冻切片，染色然后进行下游的分子生物学研究。该方法的优点是能保持好的RNA质量，缺点是组织结构的形貌保持较差，形态辨认困难。OCT，作为一种普遍使用的冰冻切片包埋剂，可广泛应用于免疫组化实验室。但目前使用的OCT多依赖国外进口，它们不但价格昂贵，且真伪难辨，限制着冰冻切片技术在国内实验室的广泛运用。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种冰冻切片包埋剂，以缓解现有技术中存在的速冻后直接切片组织结构的形貌保持较差，形态辨认困难，且现有的OCT价格昂贵的技术问题。本专利技术的第二个目的在于提供上述冰冻切片包埋剂的制备方法，该方法工艺简单，操作简便，可节约大量的人力物力，便于工业化生产，且制备得到的冰冻切片包埋剂具有不破坏生物组织、冻结速度快、切片无皱折、韧性较好的优点。本专利技术的第三个目的在于提供上述冰冻切片包埋剂或应用上述制备方法制备得到的冰冻切片包埋剂在处理冰冻切片中的应用。本专利技术提供的冰冻切片包埋剂，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.1-1.0份、增稠剂0.1-1.0份、稳定剂5-20份、塑化剂0.1-2份、助溶剂1-10份、抗菌剂0.1-1份和水80-120份。进一步地，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.2-0.8份、增稠剂0.2-0.8份、稳定剂8-18份、塑化剂0.2-1.8份、助溶剂2-8份、抗菌剂0.2-0.8份和水90-110份；优选地，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.3-0.7份、增稠剂0.3-0.7份、稳定剂9-15份、塑化剂0.5-1.5份、助溶剂3-6份、抗菌剂0.4-0.7份和水95-105份。进一步地，所述增稠剂选自甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟乙基纤维素中的一种或多种。进一步地，所述稳定剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮或丙烯酸共聚物中的一种或多种。进一步地，所述塑化剂选自丙三醇、丙二醇或邻苯二甲酸酯中的一种或多种。进一步地，所述助溶剂选自聚乙二醇-400、吐温或水杨酸钠中的一种或多种。进一步地，所述抗菌剂选自苯甲酸钠、咪唑或羟苯乙酯中的一种或多种。本专利技术还提供了上述的冰冻切片包埋剂的制备方法，所述制备方法包括：将配方量的蔗糖、增稠剂、稳定剂、塑化剂、助溶剂、抗菌剂和水混合均匀，得到所述冰冻切片包埋剂。进一步地，先将稳定剂加入水中加热溶解，待温度降至80-90℃时，依次加入配方量的蔗糖、增稠剂、塑化剂、助溶剂和抗菌剂，水浴加热溶解后，至室温备用；优选地，水浴温度为30-40℃；优选地，在混合均匀后还包括脱气的步骤。另外，本专利技术还提供了上述的冰冻切片包埋剂或应用上述的制备方法制备得到的冰冻切片包埋剂在处理冰冻切片中的应用。本专利技术提供的冰冻切片包埋剂，包括蔗糖、增稠剂、稳定剂、塑化剂、助溶剂、抗菌剂和水。其中，高浓度的蔗糖溶液是一种脱水剂，可以吸收OCT中的多余水分，起到防止目标组织吸潮的作用；增稠剂能够改善和增加本专利技术提供的冰冻切片包埋剂的粘稠度，并同时保持冰冻切片包埋剂的稳定性；稳定剂能增加本专利技术提供的冰冻切片包埋剂的稳定性能，它可以减慢反应，保持化学平衡，防止光、热分解或氧化分解等作用；塑化剂可以使本专利技术提供的冰冻切片包埋剂柔韧性增强，容易后期切片处理；助溶剂可以增加本专利技术提供的冰冻切片包埋剂中各组分在溶剂中的溶解度，提高各组分之间的相容性；抗菌剂能够有效防止冰冻切片包埋剂或应用该冰冻切片包埋剂处理后的切片变质。上述各组分相容性良好，通过各特定组分和配比之间的协同配合，使得本专利技术提供的冰冻切片包埋剂稳定性强，具有不破坏生物组织、冻结速度快、切片无皱折、韧性较好的优点，且各组分均无毒副作用，使得本专利技术提供的冰冻切片包埋剂安全、有效、无毒、无污染。此外，其成本低廉，可工业化生产，满足了国内市场的需求。本专利技术提供的上述冰冻切片包埋剂的制备方法，包括将配方量的蔗糖、增稠剂、稳定剂、塑化剂、助溶剂、抗菌剂和水混合均匀，得到所述冰冻切片包埋剂。该方法工艺简单，操作简便，可节约大量的人力物力，便于工业化生产，且制备得到的冰冻切片包埋剂具有不破坏生物组织、冻结速度快、切片无皱折、韧性较好的优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实验例2提供的应用对比例8提供的冰冻切片包埋剂包埋样本的DAPI染色结果图；图2为本专利技术实验例2提供的应用实施例8提供的冰冻切片包埋剂包埋样本的DAPI染色结果图；图3为本专利技术实验例2提供的应用对比例8提供的冰冻切片包埋剂包埋样本的HE染色结果图；图4为本专利技术实验例2提供的应用实施例8提供的冰冻切片包埋剂包埋样本的HE染色结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供了一种冰冻切片包埋剂，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.1-1.0份、增稠剂0.1-1.0份、稳定剂5-20份、塑化剂0.1-2份、助溶剂1-10份、抗菌剂0.1-1份和水80-120份。本专利技术提供的冰冻切片包埋剂，各组分相容性良好，通过各特定组分和配比之间的协同配合，使得本专利技术提供的冰冻切片包埋剂稳定性强，具有不破坏生物组织、冻结速度快、切片无皱折、韧性较好的优本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冰冻切片包埋剂，其特征在于，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.1‑1.0份、增稠剂0.1‑1.0份、稳定剂5‑20份、塑化剂0.1‑2份、助溶剂1‑10份、抗菌剂0.1‑1份和水80‑120份。

【技术特征摘要】
1.一种冰冻切片包埋剂，其特征在于，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.1-1.0份、增稠剂0.1-1.0份、稳定剂5-20份、塑化剂0.1-2份、助溶剂1-10份、抗菌剂0.1-1份和水80-120份。2.根据权利要求1所述的冰冻切片包埋剂，其特征在于，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.2-0.8份、增稠剂0.2-0.8份、稳定剂8-18份、塑化剂0.2-1.8份、助溶剂2-8份、抗菌剂0.2-0.8份和水90-110份；优选地，所述冰冻切片包埋剂包括如下重量份的组分：蔗糖0.3-0.7份、增稠剂0.3-0.7份、稳定剂9-15份、塑化剂0.5-1.5份、助溶剂3-6份、抗菌剂0.4-0.7份和水95-105份。3.根据权利要求1所述的冰冻切片包埋剂，其特征在于，所述增稠剂选自甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟乙基纤维素中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的冰冻切片包埋剂，其特征在于，所述稳定剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮或丙烯酸共聚物中的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：李乐林，付康，
申请(专利权)人：生工生物工程上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31