特异于糖基化的BTLA（B和T淋巴细胞衰减因子）的抗体制造技术

本文提供了相对于未糖基化的BTLA选择性地结合糖基化的BTLA(B和T淋巴细胞衰减因子)的分子，如抗体。还提供了制造和使用这样的分子的方法，包括治疗或诊断癌症的方法。在某些实施方式中，本文提供的抗糖基化BTLA抗体可以免疫特异性地结合糖基化的野生型BTLA(WT)。在某些实施方式中，本文提供的抗糖基化BTLA抗体可以免疫特异性结合一种或更多种BTLA双突变体，其仅保留了BTLA N75、N94或N110处的单个糖基化位点。在某些实施方式中，对于没有保留BTLA的N75、N94或N110‑O糖基化位点的BTLA三突变体，本文提供的抗糖基化BTLA抗体仅显示了背景结合，如果有结合的话。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】特异于糖基化的BTLA(B和T淋巴细胞衰减因子)的抗体1.相关申请的交叉引用本申请要求2015年12月2日提交的美国临时申请系列号No.62/262,293的优先权，通过完全引用将其合并在本文中。2.序列表本申请含有序列表，它已经以ACSII格式电子提交，通过完全引用合并在本文中。该ASCII拷贝于2016年11月30日创建，命名为604556-228009_SL.txt，大小为48,346字节。3.领域本专利技术一般地涉及药物、分子生物学和肿瘤学领域。更具体地，涉及用于治疗癌症的抗体。4.背景人类和其他哺乳动物的免疫系统保护他们对抗感染和疾病。肿瘤细胞或肿瘤浸润性淋巴细胞对共抑制分子的增量调节减弱了抗癌T细胞反应，看起来是肿瘤发挥的逃避免疫应答的机制。目前，多种共抑制分子，包括T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和程序性死亡1(PD-1)已经与癌细胞的免疫逃避关联起来。开发了拮抗性抗体来克服免疫逃避，迄今为止，已经在临床试验中测试了抗CTLA-4和抗PD1抗体，获得了令人鼓舞的结果。然而，通过调节免疫系统来安全有效地治疗疾病的新治疗剂的开发仍然是急需的。本文描述的组合物和方法满足了这些需求，并提供了其他相关的优点。5.概述本文提供的是分离的单克隆抗体，其中所述抗体相对于未糖基化的BTLA选择性地结合糖基化的B和T淋巴细胞衰减因子(attenuator)(“BTLA”)。在某些方面，相对于未糖基化的BTLA，所述抗体选择性地结合在位置N75、N94和/或N110处糖基化的BTLA。在某些实施方式中，相对于未糖基化的BTLA，本文提供的分离的抗体选择性地结合在位置N75、N94、N110或其任何组合处糖基化的人BTLA。在某些实施方式中，所述分离的抗体选择性地结合具有N75糖基化的人BTLA。在某些实施方式中，所述分离的抗体选择性地结合具有N94糖基化的人BTLA。在某些实施方式中，所述分离的抗体选择性地结合具有N110糖基化的人BTLA。在某些实施方式中，所述分离的抗体选择性地结合具有N75和N94糖基化的人BTLA。在某些实施方式中，所述分离的抗体选择性地结合具有N94和N110糖基化的人BTLA。在某些实施方式中，所述分离的抗体选择性地结合具有N75和N110糖基化的人BTLA。在某些实施方式中，所述分离的抗体选择性地结合具有N75、N94和N110糖基化的人BTLA。在某些方面，所述抗体选择性地结合一个或更多个糖基化基序。在某些方面，所述抗体结合包含糖基化基序的糖肽和邻近的肽。在某些方面，所述抗体结合在三维空间中位置靠近一个或更多个糖基化基序的肽序列。在某些方面，所述抗体以小于相对未糖基化的BTLA展现的Kd的一半的Kd结合糖基化的BTLA。在进一步的方面，所述抗体以小于相对未糖基化的BTLA展现的Kd的至少10倍的Kd结合糖基化的BTLA。在某些实施方式中，所述抗体特异性地遮蔽包含BTLA位置N75、N94、N110或其任何组合的BTLA的糖基化基序。在某些实施方式中，所述抗体对糖基化的BTLA的结合在荧光分析中通过相比与未糖基化的BTLA展现的荧光强度更大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、或至少10倍的荧光强度来表明。在某些实施方式中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO：2的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO：4的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO：30的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO：32的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQIDNO：58的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO：60的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体包含(a)重链可变(VH)区，其包含(1)具有选自(i)SEQIDNO：6、34或62，(ii)SEQIDNO：9、37或65，(iii)SEQIDNO：12、40或68，和(iv)SEQIDNO：15、43或71的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有选自(i)SEQIDNO：7、35或63，(ii)SEQIDNO：10、38或66，(iii)SEQIDNO：13、41或69，和(iv)SEQIDNO：16、44或72的氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有选自(i)SEQIDNO：8、36或64，(ii)SEQIDNO：11、39或67，(iii)SEQIDNO：14、42或70，和(iv)SEQIDNO：17、45或73的氨基酸序列的VHCDR3；和/或(b)轻链可变(VL)区，其包含(1)具有选自(i)SEQIDNO：18、46或74，(ii)SEQIDNO：21、49或77，(iii)SEQIDNO：24、52或80，和(iv)SEQIDNO：27、55或83的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有选自(i)SEQIDNO：19、47或75，(ii)SEQIDNO：22、50或78，(iii)SEQIDNO：25、53或81，和(iv)SEQIDNO：28、56或84的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有选自(i)SEQIDNO：20、48或76，(ii)SEQIDNO：23、51或79，和(iii)SEQIDNO：26、54或82的氨基酸序列的VLCDR3。在某些实施方式中，所述抗体与命名为STC613的抗体、命名为STC626的抗体或命名为STC635的抗体竞争结合糖基化的BTLA。在某些实施方式中，所述抗体特异性结合BTLA表位，所述BTLA表位包含SEQIDNO：161、162、163、164、165、166、167、168或169的氨基酸序列的五个或更多个连续氨基酸的序列。在某些实施方式中，所述抗体特异性结合BTLA表位，所述表位包含与SEQIDNO：86的BTLA的R12、H16、K51、T57、S82或S86相应的一个或更多个氨基酸。在某些实施方式中，所述抗体以不超过1μM的解离常数(Kd)结合糖基化的BTLA。在某些实施方式中，所述抗体以不超过100nM、不超过10nM或不超过5nM的解离常数(Kd)结合糖基化的BTLA。在某些实施方式中，所述抗体以不超过5nM的解离常数(Kd)结合糖基化的BTLA。在某些实施方式中，所述抗体抑制HVEM与BTLA的结合。在某些实施方式中，所述抗体以不超过1μg/ml的IC50抑制HVEM结合。在某些实施方式中，所述抗体以不超过0.8μg/ml、不超过0.6μg/ml、不超过0.4μg/ml、不超过0.2μg/ml的IC50抑制HVEM结合。在某些实施方式中，所述抗体以不超过0.2μg/ml的IC50抑制HVEM结合。在某些方面，所述抗体是重组的。在某些方面，所述抗体是IgG、IgM、IgA或其抗原结合片段。在其他方面所述抗体是Fab'、F(ab’)2、F(ab’)3、单价scFv、二价scFv、双特异性抗体、双特异性scFv、或单结构域抗体。在某些方面，所述抗体是人类的或人源化抗体。在进一步的方面，所述抗体缀合到成像试剂、化学治疗剂、毒素或放射性核素。在进一步的实施方式中，本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体相对于未糖基化的BTLA选择性结合糖基化的BTLA。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.02 US 62/262,2931.一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体相对于未糖基化的BTLA选择性结合糖基化的BTLA。2.权利要求1的抗体，其中相对于未糖基化的BTLA，所述抗体选择性地结合在位置N75、N94、N110或其任何组合处糖基化的BTLA。3.权利要求1的抗体，其中所述抗体特异性遮蔽BTLA的糖基化基序，所述BTLA的糖基化基序包含BTLA位置N75、N94、N110或其任何组合。4.权利要求1的抗体，其中所述抗体对糖基化的BTLA的结合在荧光分析中通过相比与未糖基化的BTLA展现的荧光强度更大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、或至少10倍的荧光强度来表明。5.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含重可变区和轻链可变区，所述重可变区包含SEQIDNO：2的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO：4的氨基酸序列。6.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含重可变区和轻链可变区，所述重可变区包含SEQIDNO：30的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO：32的氨基酸序列。7.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含重可变区和轻链可变区，所述重可变区包含SEQIDNO：58的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQIDNO：60的氨基酸序列。8.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，包含：(1)具有选自以下的氨基酸序列的VHCDR1：(i)SEQIDNO：6、34或62、(ii)SEQIDN0:9、37或65、(iii)SEQIDNO：12、40或68，和(iv)SEQIDNO：15、43或71；(2)具有选自以下的氨基酸序列的VHCDR2：(i)SEQIDNO：7、35或63，(ii)SEQIDNO：10、38或66,(iii)SEQIDNO：13、41或69，和(iv)SEQIDNO：16、44或72；和(3)具有选自以下的氨基酸序列的VHCDR3：(i)SEQIDNO：8、36或64、(ii)SEQIDNO：11、39或67、(iii)SEQIDNO：14、42或70，和(iv)SEQIDNO：17、45或73；和/或(b)轻链可变(VL)区，包含：(1)具有选自以下的氨基酸序列的VLCDR1：(i)SEQIDNO：18、46或74，(ii)SEQIDNO：21、49或77，(iii)SEQIDNO：24、52或80，和(iv)SEQIDNO：27、55或83；(2)具有选自以下的氨基酸序列的VLCDR2：(i)SEQIDNO：19、47或75，(ii)SEQIDNO：22、50或78，(iii)SEQIDNO：25、53或81，和(iv)SEQIDNO：28、56或84；和(3)具有选自以下的氨基酸序列的VLCDR3：(i)SEQIDNO：20、48或76、(ii)SEQIDNO：23、51或79，和(iii)SEQIDNO：26、54或82。9.权利要求8对抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)区，其包含：(1)具有选自以下的氨基酸序列的VHCDR1：(i)SEQIDNO：6、34或62，(ii)SEQIDNO：9、37或65，(iii)SEQIDNO：12、40或68，和(iv)SEQIDNO：15、43或71；(2)具有选自以下的氨基酸序列的VHCDR2：(i)SEQIDNO：7、35或63，(ii)SEQIDNO：10、38或66，(iii)SEQIDNO：13、41或69，和(iv)SEQIDNO：16、44或72；和(3)具有选自以下的氨基酸序列的VHCDR3：(i)SEQIDNO：8、36或64，(ii)SEQIDNO：11、39或67，(iii)SEQIDNO：14、42或70，和(iv)SEQIDNO：17、45或73。10.权利要求8的抗体，其中所述抗体包含轻链可变(VL)区，其包含：(1)具有选自以下的氨基酸序列的VLCDR1：(i)SEQIDNO：18、46或74，(ii)SEQIDNO：21、49或77，(iii)SEQIDNO：24、52或80，和(iv)SEQIDNO：27、55或83；(2)具有选自以下的氨基酸序列的VLCDR1：(i)SEQIDNO：19、47或75，(ii)SEQIDNO：22、50或78，(iii)SEQIDNO：25、53或81，和(iv)SEQIDNO：28、56或84；和(3)具有选自以下的氨基酸序列的VLCDR3：(i)SEQIDNO：20、48或76，(ii)SEQIDNO：23、51或79，和(iii)SEQIDNO：26、54或82。11.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含SEQIDNO：2、30或58的VH序列，和/或SEQIDNO：4、32或60的VL序列。12.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含来自以下的所有三个重链互补决定区(CDR)和/或所有三个轻链CDR：命名为STC613的抗体，其包含SEQIDNO：2的VH序列和SEQIDNO：4的VL序列；命名为STC626的抗体，其包含SEQIDNO：30的VH序列和SEQIDNO：32的VL序列；或命名为STC635的抗体，其包含SEQIDNO：58的VH序列和SEQIDNO：60的VL序列。13.权利要求12的抗体，其中所述抗体包含来自命名为STC613的抗体的所有三个重链CDR和/或所有三个轻链CDR。14.权利要求12的抗体，其中所述抗体包含来自命名为STC626的抗体的所有三个重链CDR和/或所有三个轻链CDR。15.权利要求12的抗体，其中所述抗体包含来自命名为STC635的抗体的所有三个重链CDR和/或所有三个轻链CDR。16.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含：(a)包含表3、5或7中描述的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3氨基酸序列的重链可变(VH)区；和/或(b)包含表3、5或7中描述的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3氨基酸序列的轻链可变(VL)区。17.权利要求16的抗体，其中所述抗体包含重链可变(VH)区，所述重链可变(VH)区包含表3、5或7中描述的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的氨基酸序列。18.权利要求16的抗体，其中所述抗体包含轻链可变(VL)区，所述轻链可变(VL)区包含表3、5或7中描述的VLCDR、VLCDR2和VLCDR3的氨基酸序列。19.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：6、34或62的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有SEQIDNO：7、35或63的氨基酸序列的VHCDR2，和(3)具有SEQIDNO：8、36或64的氨基酸序列的VHCDR3；以及(b)轻链可变(VL)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：18、46或74的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO：19、47或75的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有SEQIDNO：20、48和76的氨基酸序列的VLCDR3。20.权利要求19的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：6的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有SEQIDNO：7的氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO：8的氨基酸序列的VHCDR2；和(b)轻链可变(VL)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：18的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO：19的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有SEQIDNO：20的氨基酸序列的VLCDR3。21.权利要求19的抗体，期中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：34的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有SEQIDNO：35的氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO：36的氨基酸序列的VHCDR3；和(b)轻链可变(VL)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：46的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO：47的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有SEQIDNO：76的氨基酸序列的VLCDR3。22.权利要求19的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：62的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有SEQIDNO：63的氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO：64的氨基酸序列的VHCDR3；和(b)轻链可变(VL)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：74的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO：75的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有SEQIDNO：76的氨基酸序列的VLCDR3。23.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：9、37或65的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有SEQIDNO：10、38或63的氨基酸序列的VHCDR2，和(3)具有SEQIDNO：11、39或67的氨基酸序列的VHCDR3；以及(b)轻链可变(VL)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：21、49或77的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO：22、50或78的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有SEQIDNO：23、51和79的氨基酸序列的VLCDR3。24.权利要求23的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：9的氨基酸序列的VHCDR1；(2)具有SEQIDNO：10的氨基酸序列的VHCDR2；和(3)具有SEQIDNO：11的氨基酸序列的VHCDR3；和(b)轻链可变(VL)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：21的氨基酸序列的VLCDR1；(2)具有SEQIDNO：22的氨基酸序列的VLCDR2；和(3)具有SEQIDNO：23的氨基酸序列的VLCDR3。25.权利要求23的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变(VH)区，其包含：(1)具有SEQIDNO：3...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·成汉·柳，以斯拉·明·哲·钟，金龙洙，安德鲁·H·帕克，
申请(专利权)人：斯特赛恩斯公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR