一种PCR模板用DNA样本提取方法技术

一种PCR模板用DNA样本提取方法,包括如下步骤:鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15‑0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3‑10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5‑10%质量浓度的EDTA‑2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物30‑120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液,用1‑10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释5‑20倍,即得到植物DNA样本。采用本发明专利技术所述PCR模板用DNA样本提取方法，可以快速方便的提取DNA，并降低植物DNA提取过程中的氧化现象，提高DNA提取率。

【技术实现步骤摘要】
一种PCR模板用DNA样本提取方法
本专利技术属于生物
，涉及植物DNA样本提取，具体涉及一种PCR模板用DNA样本提取方法。
技术介绍
DNA即脱氧核糖核酸是分子结构复杂的有机化合物。作为染色体的一个成分而存在于细胞核内。功能为储藏遗传信息。DNA分子巨大，由核苷酸组成。植物DNA的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术,包括CTAB,SDS等多种方法；DNA活性极高，容易被氧化;现有技术中植物提取DNA中，DNA容易被氧化造成脱氧核酸样本变质损坏。PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。
技术实现思路
为克服现有技术存在的技术缺陷，本专利技术公开了一种PCR模板用DNA样本提取方法。本专利技术所述PCR模板用DNA样本提取方法,包括如下步骤:鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15-0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3-10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5-10%质量浓度的EDTA-2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物30-120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液,用1-10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释5-20倍,即得到植物DNA样本。优选的，所述鲜嫩叶片研磨成粉末是在液氮浸泡环境下进行。采用本专利技术所述PCR模板用DNA样本提取方法，可以快速方便的提取DNA，并降低植物DNA提取过程中的氧化现象，提高DNA提取率。具体实施方式下面对本专利技术的具体实施方式作进一步的详细说明。本专利技术所述PCR模板用DNA样本提取方法,包括如下步骤:鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15-0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3-10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5-10%质量浓度的EDTA-2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物30-120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液,用1-10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释5-20倍,即得到植物DNA样本。植物DNA提取检材应选择幼嫩叶片，如选择老叶，老叶中含有大量多糖和酚类杂质，不利于DNA提取。研磨过程可以在液氮浸泡环境下进行，避免研磨过程中的空气氧化，液氮低温也利于带走研磨带来的热量，避免DNA受热变质。研磨完成后，倒入氢氧化钠碱性溶液，氢氧化钠的作用是裂解细胞壁；为防止氧化，氢氧化钠溶液中应加入EDTA-2钠，又名乙二胺四乙酸二钠，EDTA-2钠在破壁过程中具有防氧化作用，并能固化水中的金属离子形成络合物，同时具有弱酸性，可作为缓冲剂控制反应速度，降低反应发热，EDTA-2钠在加热后会迅速挥发，在溶液中残留极小，避免影响后续反应。氢氧化钠反应完成后，以沸水浴加热，一般反应是在一个试管内完成，将试管浸泡在沸水中，沸水浴使反应温度在90-100摄氏度范围内，该温度范围最利于裂解核酸。裂解完成后，摇匀离心使悬浊液分层，提取上清液用Tris－HCl稀释，Tris－HCl即三（羟甲基）氨基甲烷，作用是作为缓冲剂提供缓冲环境，防止上清液中提取的DNA核酸被破坏。具体实施例1取10毫克鲜嫩叶片研磨成粉末并放入试管,试管中加入0.2MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液100微升,所述氢氧化钠溶液中含有5%质量浓度的EDTA-2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物90秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液,用1MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释10倍,即得到植物DNA样本。具体实施例2取10毫克鲜嫩叶片研磨成粉末并放入试管,试管中加入0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液50微升,所述氢氧化钠溶液中含有10%质量浓度的EDTA-2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物30秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液,用1MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释10倍,即得到植物DNA样本。具体实施例3取10毫克鲜嫩叶片，液氮浸泡下研磨成粉末并放入试管,试管中加入0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液100微升,所述氢氧化钠溶液中含有10%质量浓度的EDTA-2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液,用10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释3倍,即得到植物DNA样本。采用本专利技术所述PCR模板用DNA样本提取方法，可以快速方便的提取DNA，并降低植物DNA提取过程中的氧化现象，提高DNA提取率。前文所述的为本专利技术的各个优选实施例，各个优选实施例中的优选实施方式如果不是明显自相矛盾或以某一优选实施方式为前提，各个优选实施方式都可以任意叠加组合使用，所述实施例以及实施例中的具体参数仅是为了清楚表述专利技术人的专利技术验证过程，并非用以限制本专利技术的专利保护范围，本专利技术的专利保护范围仍然以其权利要求书为准，凡是运用本专利技术的说明书内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PCR模板用DNA样本提取方法,其特征在于,包括如下步骤:鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15‑0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3‑10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5‑10%质量浓度的EDTA‑2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液和叶片粉末的混合物 30‑120秒;摇匀后离心使悬浊液分层,取上清液, 用1‑10MOL/升的Tris－HCl将上清液稀释5‑20倍,即得到植物DNA样本。

【技术特征摘要】
1.一种PCR模板用DNA样本提取方法,其特征在于,包括如下步骤:鲜嫩叶片研磨成粉末,叶片容器中加入0.15-0.3MOL/L摩尔浓度的氢氧化钠溶液,溶液质量为叶片质量的3-10倍,所述氢氧化钠溶液中含有5-10%质量浓度的EDTA-2钠;以沸水加热氢氧化钠溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：何梁，
申请(专利权)人：西安秦杰农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61