一种HPV16 L1抗体的ELISA检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种HPV16L1抗体的ELISA检测试剂盒。本发明专利技术的ELISA试剂盒包括：酶标板、辣根过氧化酶标记的二抗；其中酶标板包被有HPV16L1重组蛋白；以及酶标板包括具有石墨烯导电层的酶标板主体、用于控制所述石墨烯导电层温度的控温装置及与控温装置电性连接的电源装置。本发明专利技术的试剂盒用于抗体的效价检测时，石墨烯导电层加热酶标板及板中试剂，可省去恒温箱孵育过程，简化了ELISA的实验操作。同时，酶标板的反应孔中包被有HPV16L1重组蛋白，适用于检测HPV16L1抗体，具有即取即用的优点，无需另外制备HPV16L1重组蛋白，大大降低了检测成本、缩短了检测HPV16L1抗体所需时间。

An ELISA Kit for Detecting HPV16 L1 Antibody

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to an ELISA detection kit for HPV16L1 antibody. The ELISA kit of the present invention includes: an enzyme-labeled plate and a horseradish peroxidase-labeled secondary antibody, in which the enzyme-labeled plate is coated with HPV16L1 recombinant protein, and the enzyme-labeled plate includes an enzyme-labeled plate body with a graphene conductive layer, a temperature control device for controlling the temperature of the graphene conductive layer and a power supply device electrically connected with the temperature control device. \u3002 When the kit of the invention is used for the titer detection of antibodies, the graphene conductive layer heating the enzyme label plate and the reagent in the plate can omit the incubation process of the thermostat and simplify the experimental operation of ELISA. At the same time, HPV16L1 recombinant protein is embedded in the reaction pore of the enzyme label plate, which is suitable for the detection of HPV16L1 antibody. It has the advantage of being ready to use. No additional preparation of HPV16L1 recombinant protein is needed, which greatly reduces the cost of detection and shortens the time required for the detection of HPV16L1 antibody.

【技术实现步骤摘要】
一种HPV16L1抗体的ELISA检测试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种HPV16L1抗体的ELISA检测试剂盒。
技术介绍
宫颈癌占女性妇科恶性肿瘤的第二位，现已成为威胁女性健康的重要疾患，中国每年死于宫颈癌的人数将近5万，宫颈癌的病因研究一直为国内外学者所重视，研究发现引起宫颈癌的关键是HPV的感染。HPV属于乳头瘤病毒科乳头瘤病毒属，是球形、双链环状DNA病毒。HPV主要通过直接或间接接触污染物品或通过性传播感染人类。HPV的感染有宿主特异性和组织特异性，只能感染人类的皮肤和粘膜受损的基底细胞。HPV经损伤的宫颈粘膜首先感染基底细胞层，病毒以少量游离DNA状态潜伏在基底细胞内，以实现免疫逃逸。当基底细胞不断分化、成熟、向粘膜表层迁移，HPV病毒就大量增殖。随着粘膜表层上皮细胞的凋亡，病毒颗粒大量释放到上皮表面，作为新的感染源可进一步加重感染。长期HPV持续感染导致宿主细胞相关基因表达发生变化，可逐渐发展为宫颈癌。HPV至今已鉴定明确的大约有100多个亚型，根据其致病和预后不同又可分为高危型HPV(HR-HPV)和低危型HPV(LR-HPV)，其中HR-HPV15种，包括HR-HPV16、18、31、33、35、39、45、5l、52、56、53、58型等，感染后可引起癌前病变和宫颈癌。其中HPV16和HPV18是最主要的流行株。HPVL1壳蛋白是人乳头瘤病毒的主要结构蛋白,是病毒感染细胞和细胞免疫反应攻击病毒的主要靶位，且该蛋白较为保守。因此已有一些针对L1蛋白开发预防/治疗HPV感染的抗体的研究。得到HPV16L1抗体后，需要通过ELISA对其效价进行检测，而目前尚无针对HPV16L1抗体的ELISA检测试剂盒。检测过程中需要用到抗原，而一些HPV16L1抗体制备时，使用核酸疫苗免疫获得的HPV16L1抗体，造成ELISA检测抗体时还需要另外制备出HPV16L1抗原，耗时长、操作复杂、成本高，造成极大浪费。因此开发一种针对HPV16L1抗体的ELISA检测试剂盒，具有即取即用的优点，无需另外制备HPV16L1重组蛋白，大大降低了检测成本、缩短了检测HPV16L1抗体所需时间。
技术实现思路
HPV16L1壳蛋白是人乳头瘤病毒的主要结构蛋白,是病毒感染细胞和细胞免疫反应攻击病毒的主要靶位，且该蛋白较为保守。因此已有一些针对L1蛋白开发预防/治疗HPV感染的抗体的研究。得到HPV16L1抗体后，需要通过ELISA对其效价进行检测，而目前尚无针对HPV16L1抗体的ELISA检测试剂盒。有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于HPV16L1抗体检测的ELISA试剂盒，其能够自加热，无需恒温箱多次孵育，操作简单，且具有即取即用的优点，节省时间、降低成本。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种用于HPV16L1抗体检测的ELISA试剂盒，其包括：酶标板、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗；所述酶标板包被有HPV16L1重组蛋白；所述酶标板包括具有石墨烯导电层的酶标板主体、用于控制所述石墨烯导电层温度的控温装置及与控温装置电性连接的电源装置；所述控温装置包括温度检测模块和控制模块；所述温度检测模块用于检测石墨烯层的实时温度数据，并将所述实时温度数据传递至所述控制模块；所述控制模块用于设置对温度的控制指令，以及接收所述温度检测模块的实时温度数据，并根据所述控制指令和所述实时温度数据提取相应的控制命令，所述控制命令用于控制所述石墨烯导电层加热或者停止加热，以使所述实时温度数据与所述控制指令对应的温度数据相匹配。HPV16L1壳蛋白非常保守，不同菌株的L1蛋白具有较多相同的抗原表位，基于以上考虑，本专利技术的重组HPVL1蛋白含全长的HPV16L1蛋白序列。作为优选的方案，上述HPV16L1重组蛋白为大肠杆菌表达的HPV16L1重组蛋白，其氨基酸序列包括HPV16L1蛋白的全长氨基酸序列。可加热酶标板的工作原理：当设置温度后控温装置的控制模块发出指令对石墨烯导电层加热，石墨烯导电层发热升温，并将热量传导至试剂盒主体，使酶标板主体内温度升高，进一步传热至酶标板反应孔，对其进行加热。作为优选的方案，所述温度检测模块包括温度传感器，所述温度传感器至少设置于酶标板主体的内壁中的一处。作为优选的方案，所述酶标板的孔底与所述酶标板的壁底发生接触。两者发生接触时，直接加热和空气传热同时存在：酶标板内壁的石墨烯导电层升温后可对酶标板孔底加热，进而传热至孔内试剂，对孔内试剂加热；同时，石墨烯导电层加热板内空气后，酶标板反应孔与空气接触的部分被加热。作为优选的方案，所述酶标板还具有板盖。作为优选的方案，上述酶标板为可拆卸酶标板，包含多个包被有所述HPV16L1重组蛋白的酶标条。进一步，上述酶标板为96孔酶标板，上述包被有所述HPV16L1重组蛋白的酶标条为12孔酶标条或8孔酶标条。作为优选的方案，上述试剂盒还包含样品稀释缓冲液，其制备：BSA1g,NaCl0.8g，KH2PO40.02g，Na2HPO4.12H2O0.29g，KCl0.02g，Proclin3000.01g，加双蒸水至100ml，调至pH7.4。本专利技术改由新型无毒的Proclin300作为防腐剂替代了传统的剧毒叠氮钠。作为优选的方案，上述试剂盒还包含TMB底物液和终止液；所述TMB底物液为单组份显色液；所述底物液：TMB20mg，无水乙醇10ml，加双蒸水至100ml；所述终止液为2mol/LH2SO4的水溶液。本专利技术的试剂盒使用单组份显色液，使用时无需再使用双组份(即：A液，B液，操作更繁琐)，单组份的显色液只需加一次即可，且灵敏度更高、特异性更好、显色后期(终止之后)结果保持时间更长，便于有充分时间记录及分析结果。作为优选的方案，上述试剂盒还包含5倍浓度、10倍浓度或更高浓度的PBST溶液。作为优选的方案，上述石墨烯导电层位于所述酶标板主体的内表面。作为优选的方案，上述ELISA试剂盒用于鸡HPVL1抗体检测时，所述辣根过氧化酶标记的二抗为辣根过氧化酶标记的抗鸡抗体。例如，辣根过氧化酶标记的羊抗鸡抗体。作为优选的方案，上述试剂盒还包含阴性对照和阳性对照，所述阴性对照为蒸馏水或PBS溶液，所述阳性对照为HPV16L1抗体。上述辣根过氧化酶标记的二抗为浓缩液，使用时需要先稀释。并于稀释后的半小时内使用。本专利技术的试剂盒可于2-8摄氏度保存6个月，-20摄氏度保存12个月。其中辣根过氧化酶标记的二抗的浓缩液仅保存于4摄氏度。本专利技术的目的之二在于提供一种上述ELISA试剂盒用于检测HPV16L1抗体的方法，其省去恒温箱的多次孵育过程，操作简单。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：目的一的ELISA试剂盒用于检测HPV16L1抗体的方法，包括以下步骤：1)将所述ELISA试剂盒接通电源，设置所述控温装置的控制温度为37℃；设置空白组、阴性对照组和实验组；2)加样品：设置合理的浓度梯度，用PBS溶液稀释待检样品，将稀释后的待检样品加入所述酶标板的实验组反应孔中，阴性对照组加PBS溶液，保温反应60-90min后，PBST溶液洗涤；3)加二抗：向所述阴性对照组和实验组的反应孔中加入所述辣根过氧化酶标记的二抗，保温反应30-60min后，PBST溶液洗涤；4)显色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于HPV16 L1抗体检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：酶标板、辣根过氧化酶标记的二抗；所述酶标板的反应孔包被有HPV16 L1重组蛋白；所述酶标板包括具有石墨烯导电层的酶标板主体、用于控制所述石墨烯导电层温度的控温装置及与控温装置电性连接的电源装置；所述控温装置包括温度检测模块和控制模块；所述温度检测模块用于检测石墨烯层的实时温度数据，并将所述实时温度数据传递至所述控制模块；所述控制模块用于设置对温度的控制指令，以及接收所述温度检测模块的实时温度数据，并根据所述控制指令和所述实时温度数据提取相应的控制命令，所述控制命令用于控制所述石墨烯导电层加热或者停止加热，以使所述实时温度数据与所述控制指令对应的温度数据相匹配；所述HPV16 L1重组蛋白包括HPV16 L1蛋白的全长序列。

【技术特征摘要】
1.一种用于HPV16L1抗体检测的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：酶标板、辣根过氧化酶标记的二抗；所述酶标板的反应孔包被有HPV16L1重组蛋白；所述酶标板包括具有石墨烯导电层的酶标板主体、用于控制所述石墨烯导电层温度的控温装置及与控温装置电性连接的电源装置；所述控温装置包括温度检测模块和控制模块；所述温度检测模块用于检测石墨烯层的实时温度数据，并将所述实时温度数据传递至所述控制模块；所述控制模块用于设置对温度的控制指令，以及接收所述温度检测模块的实时温度数据，并根据所述控制指令和所述实时温度数据提取相应的控制命令，所述控制命令用于控制所述石墨烯导电层加热或者停止加热，以使所述实时温度数据与所述控制指令对应的温度数据相匹配；所述HPV16L1重组蛋白包括HPV16L1蛋白的全长序列。2.根据权利要求1所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述HPV16L1重组蛋白为大肠杆菌表达的HPV16L1重组蛋白。3.根据权利要求1所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标板为可拆卸酶标板，包含多个包被有所述HPV16L1重组蛋白的酶标条。4.根据权利要求1所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔酶标板。5.根据权利要求1所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含样品稀释缓冲液；所述样品样品稀释缓冲液的制备：BSA1g,NaCl0.8g，KH2PO40.02g，Na2HPO4.12H2O0.29g，KCl0.02g，Proclin3000.01g，加双蒸水至100ml，调至pH7.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶敏，魏勇，姚静，
申请(专利权)人：重庆巴而思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50