一种洛度沙胺氨丁三醇有关物质的HPLC分析检测方法技术

本发明专利技术属于分析方法技术领域，具体公开了一种洛度沙胺氨丁三醇有关物质检测的高效液相色谱分析法，分离并检测洛度沙胺氨丁三醇原料药或制剂中6个杂质。本发明专利技术方法首次在流动相中创造性地加入胺类物质，彻底解决了主峰与杂质峰、杂质峰与辅料峰之间的分离难题，操作简单、灵敏度高。大大提高了现有方法的专属性，为含洛度沙胺氨丁三醇制剂的安全性的研究提供了更为有效的依据。

A method for determination of lodoxamide and aminobutriol related substances by high performance liquid chromatography

The invention belongs to the technical field of analytical methods, and specifically discloses a high performance liquid chromatography method for the determination of related substances of lodoxamide tromethamine, which separates and detects six impurities in lodoxamide tromethamine raw drug or preparation. The method inventively adds amines into the mobile phase for the first time, completely solves the separation problem between the main peak and the impurity peak, the impurity peak and the auxiliary peak, and has simple operation and high sensitivity. The specificity of the existing methods has been greatly improved, which provides a more effective basis for the safety study of lodoxamide-containing tromethamine preparations.

【技术实现步骤摘要】
一种洛度沙胺氨丁三醇有关物质的HPLC分析检测方法
本专利技术涉及分析方法
，具体涉及一种洛度沙胺氨丁三醇有关物质检测的高效液相色谱分析法，分离并检测洛度沙胺氨丁三醇原料药或制剂中6个杂质。
技术介绍
洛度沙胺氨丁三醇，其化学结构式为：主要用于眼科疾病局部治疗，如春季卡他性角膜炎、卡他性结膜炎等。由洛度沙胺氨丁三醇制得的滴眼液已经在中国批准上市，商品名为本申请专利技术人在对洛度沙胺氨丁三醇原料药进行研究的过程中发现，其存在6个可能由工艺过程、起始物料或降解反应引入的杂质，杂质信息如下表A所示。表A洛度沙胺氨丁三醇杂质信息表然而，关于洛度沙胺氨丁三醇有关物质的研究鲜有报道。目前美国药典、英国药典、日本药局方和2015年中国药典中均未收载洛度沙胺氨丁三醇原料及制剂的质量标准。洛度沙胺滴眼液原研制剂厂家的进口注册标准JX19980121中亦未对有关物质进行研究。经调研，仅洛度沙胺氨丁三醇原料药标准YBH20722004和洛度沙胺滴眼液进口注册标准YBH19932004对洛度沙胺滴眼液中的有关物质进行了研究，两者采用的方法相同。本申请专利技术人研究发现采用洛度沙胺氨丁三醇原料药标准YBH20722004中的方法并不能对上述6种已知杂质实现基线分离，在该方法基础上对色谱参数进行调整后，6种已知杂质仍不能实现基线分离。同时该方法条件下，杂质A出峰较快，与洛度沙胺滴眼液中辅料依地酸二钠、柠檬酸钠、柠檬酸(公布的原研处方中辅料包括依地酸二钠、苯扎氯铵、甘露醇、柠檬酸、柠檬酸钠、羟丙甲纤维素、四丁酚醛)重叠在一起，干扰杂质A的测定。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种同时检测洛度沙胺氨丁三醇原料药或制剂中6种已知杂质的高效液相色谱检测方法。所述方法包括：反相色谱柱的填充剂为烷基键合硅胶；以胺类物质的水溶液-有机溶剂为流动相，所述有机溶剂为甲醇和/或乙腈；采用梯度洗脱，流速为0.8ml/min～1.2ml/min；柱温为25～45℃；检测波长为240～250nm；所述的反相色谱柱的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，优选为十八烷基硅烷键合硅胶。所述的反相色谱柱的规格为250×4.6mm，5μm。所述的胺类物质为二乙胺和/或三乙胺，优选为三乙胺。所述三乙胺的水溶液pH为5.0～8.0，优选为6.0～7.0，更优为6.8。所述pH调节剂为磷酸、醋酸和甲酸，优选为磷酸。所述三乙胺的水溶液中三乙胺的浓度为0.05v/v％-0.2v/v％，优选为0.1v/v％。所述的有机溶剂优选为甲醇。所述的梯度洗脱程序为：与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果如下：本专利技术的洛度沙胺氨丁三醇原料药及制剂的有关物质检测方法，经检索，为首次在流动相中创造性地加入胺类物质物质，彻底解决了主峰与杂质峰、杂质峰与辅料峰之间的分离难题，操作简单、灵敏度高。附图说明图1为实施例1中混合对照品色谱图；图2为实施例2中混合对照品色谱图；图3为实施例2中依地酸二钠色谱图；图4为实施例3中混合对照品色谱图；图5为实施例4中混合对照品色谱图。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面进一步披露一些非限制性实施例对本专利技术作进一步的详细说明。实施例中所用杂质A～E杂质对照品和洛度沙胺氨丁三醇对照品均由申请人根据现有技术自制，杂质F由武汉开诺医药科技有限公司提供，杂质F可以通过商业化途径获得，其他均为常规试剂。洛度沙胺氨丁三醇的制备工艺流程如下所示，本申请专利技术人制备了三批洛度沙胺氨丁三醇原料药，批号分别为20160501、20160502、20160503。在上述合成过程中，杂质A、B、C、D、E均在第一步反应中产生，杂质F为起始原料。杂质A～E的制备过程如下：取20g洛度沙胺氨丁三醇原料药和200ml纯化水投入500ml三口瓶中，室温搅拌溶解，固体溶解后加入氨丁三醇调节pH至12～13，调节完毕，升温至50℃反应3h，反应完毕后减压浓缩至干，固体用20ml95wt％乙醇打浆30min，抽滤，烘干，采用制备色谱分离得到杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E对照品。杂质A～F和洛度沙胺氨丁三醇的结构确证信息如下表B-C所示。表B洛度沙胺氨丁三醇结构分解示意表表C杂质A～F和洛度沙胺氨丁三醇结构确证信息实施例1方法1该方法是在洛度沙胺氨丁三醇原料药标准YBH20722004的基础上调整了流动相比例色谱条件：Waterse2695高效液相色谱仪，色谱柱为Kromasil100-5C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)，流动相为0.025mol/l磷酸二氢钾溶液(氨水调pH至6.8)-甲醇，流速1.0ml/min，检测波长244nm，进样量20μl，梯度洗脱如下表1所示：表1样品配制：取杂质A～F、洛度沙胺氨丁三醇对照品各适量，分别加20％(v/v)甲醇配制成各对照品浓度约0.5mg/ml的单一溶液，在本实施例色谱条件下进样分析，记录色谱图，用于后续混合杂质对照品的色谱峰定位。另取杂质A～F、洛度沙胺氨丁三醇对照品适量混合，加20％(v/v)甲醇溶解，配制成每1ml含各杂质约20μg，含洛度沙胺氨丁三醇约0.5mg的溶液，作为混合杂质溶液，在本实施例色谱条件下进样分析，记录色谱图，结果见下表2和附图1。表2杂质定位信息表试验结果表明杂质C与杂质D未能实现基线分离。实施例2方法2色谱条件：Waterse2695高效液相色谱仪，色谱柱为Kromasil100-5C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)，流动相为磷酸盐缓冲液[取磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)5.7g与磷酸二氢钠(NaHPO4.2H2O)1.43g加水溶解成2000ml,此溶液的pH值为7.0]-甲醇(9:1)，流速1.0ml/min，检测波长244nm，进样量20μl。样品配制：取杂质A～F、洛度沙胺氨丁三醇对照品适量，分别加20％(v/v)甲醇配制约0.5mg/ml的单一对照品溶液，在本实施例色谱条件下进样分析，记录色谱图。取杂质A～F、洛度沙胺氨丁三醇对照品适量混合，加20％(v/v)甲醇溶解，配制成每1ml含各杂质约20μg，含洛度沙胺氨丁三醇约0.5mg的溶液，作为混合杂质溶液，在本实施例色谱条件下进样分析，记录色谱图，结果见下表3和附图2；洛度沙胺滴眼液原研制剂说明书中明确写明辅料依地酸二钠用量为0.01％(w/v，g/mL)，为进一步考察方法的专属性，实验中取依地酸二钠适量，加20％(v/v)甲醇溶解配制成每1ml含依地酸二钠约0.05mg的溶液，在本实施例色谱条件下进样分析，记录色谱图，结果见下表3和附图3。表3杂质定位信息表色谱峰保留时间(min)分离度依地酸二钠2.633/杂质A2.579/杂质B33.48816.44杂质C5.6333.18杂质D4.9129.43杂质E11.5836.70杂质F43.5617.86洛度沙胺氨丁三醇17.98911.02试验结果表明杂质A～F和洛度沙胺氨丁三醇均能实现基线分离，但洛度沙胺滴眼液中的辅料依地酸二钠与杂质A均在死时间附近出峰，依地酸二钠干扰杂质A的测定。实施例3方法3色谱条件：Waterse2695高效液相色谱仪，色谱柱为Kromasil100-5C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种洛度沙胺氨丁三醇原料药或制剂中杂质的高效液相色谱检测方法，其特征在于，色谱条件为：反相色谱柱，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶；以胺类物质的水溶液‑有机溶剂为流动相，所述有机溶剂为甲醇和/或乙腈；采用梯度洗脱，流速为0.8ml/min～1.2ml/min；柱温为25～45℃；检测波长为240～250nm；所述的胺类物质为二乙胺和/或三乙胺；所述胺类物质的水溶液pH为6.0～7.0，胺类物质的水溶液中所含pH调节剂为磷酸、醋酸或甲酸；所述胺类物质的水溶液中胺类物质的浓度为0.05v/v％‑0.2v/v％。

【技术特征摘要】
1.一种洛度沙胺氨丁三醇原料药或制剂中杂质的高效液相色谱检测方法，其特征在于，色谱条件为：反相色谱柱，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶；以胺类物质的水溶液-有机溶剂为流动相，所述有机溶剂为甲醇和/或乙腈；采用梯度洗脱，流速为0.8ml/min～1.2ml/min；柱温为25～45℃；检测波长为240～250nm；所述的胺类物质为二乙胺和/或三乙胺；所述胺类物质的水溶液pH为6.0～7.0，胺类物质的水溶液中所含pH调节剂为磷酸、醋酸或甲酸；所述胺类物质的水溶液中胺类物质的浓度为0.05v/v％-0.2v/v％。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测方法，其特征在于：进样量20μl。3.根据权利要求1所述的高效液...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹玲玲，谢树伟，徐旻明，陈蔚江，
申请(专利权)人：武汉先路医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42