用于治疗异常Wnt信号传送的稳定化BCL9肽制造技术

涵盖了用稳定化BCL9肽治疗癌症的方法，其中所述稳定化肽包含BCL9蛋白的HD2结构域的一部分，其包含使用α,α‑二取代氨基酸生成的烃交联剂。

Stabilized BCL9 Peptide for Treatment of Abnormal Wnt Signal Transfer

The method of treating cancer with stabilized BCL9 peptide is covered. The stabilized peptide contains part of the HD2 domain of BCL9 protein, which contains hydrocarbon crosslinkers produced by using alpha, alpha disubstituted amino acids.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗异常Wnt信号传送的稳定化BCL9肽
本国际申请要求2015年10月5日提交的美国临时申请第62/237,489号的优先权，其全部内容通过引用合并于此。本文公开了来源于人B细胞CLL/淋巴瘤9(BCL9)蛋白质及其变体的HD2结构域的多肽，以及它们在诊断、预防和/或治疗疾病或病症中的用途。还公开了生成这种多肽及其变体的方法。
技术介绍
β-连环蛋白是一种多功能蛋白质，对胚胎发育、上皮细胞生长和器官再生等细胞稳态和过程至关重要。然而，异常β-连环蛋白信号传送可以导致转录激活的变化，这可以允许肿瘤生长和发育。β-连环蛋白通常被磷酸化并被靶向以被轴抑制蛋白复合物降解，但是如果存在Wnt信号通路的刺激，则未磷酸化的β-连环蛋白可以积聚。在Wnt信号通路被激活的条件下，β-连环蛋白结合至淋巴增强因子/T细胞因子(LEF/TCF)并被转移到细胞核中以刺激Wnt靶基因的转录(参见Clevers和Nusse，《细胞(Cell)》149：1192-1205(2012))，例如在肿瘤发生中起作用的c-myc和CD44。Wnt/β-连环蛋白通路的异常激活已经显示在多种人类癌症中(参见Thakur和Mishra，《细胞与分子医学杂志(JCellMolMed)》17(4)：449-456(2013))。过度活化的β-连环蛋白信号传送可导致肿瘤内不受控制的细胞增殖，并影响癌细胞的存活。此外，β-连环蛋白可通过增加癌细胞的迁移和侵袭能力来支持肿瘤转移。高达90％的散发性结肠直肠癌病例与Wnt信号传送的组成型激活相关联。BCL9是已知的在哺乳动物细胞中有效的β-连环蛋白介导的转录所需的蛋白质(参见Roche等人，《BMC癌症(BMCCancer)》8：199(2008))。BCL9通过其HD2结构域与β-连环蛋白结合，并且HD2结构域中的突变破坏了BCL9与β-连环蛋白的结合。选择性靶向β-连环蛋白而不影响其他Wnt信号通路的药剂是治疗癌症患者的有吸引力的靶标。已应用了许多抑制β-连环蛋白活性的药剂的开发方法(参见Thakur和Mishra2013)。靶向抑制β-连环蛋白的许多小分子化合物在动物模型中显示出很好的疗效，但需要更多个体化化的和选择性的方法来抑制β-连环蛋白活化。一种选择性调节β-连环蛋白活性的方法是使用包含已知与β-连环蛋白相互作用并调节其功能的蛋白质部分的稳定化肽。作为潜在的治疗剂，稳定化肽与野生型肽相比具有许多优点，包括增加的螺旋含量、蛋白水解稳定性和增加的对靶受体的结合亲和力(参见Kim等人，《自然·实验手册(NatProtocols)》6(6)：761-771(2011)))。一种已对其稳定化肽进行了研究的β-连环蛋白相互作用体是BCL9，其通过其HD2结构域与β-连环蛋白结合。然而，由于合成费用和低收率，试图使用烃连接基团(即，“烃钉”)来生成包含BCL9的HD2结构域的部分的稳定化肽已受到阻碍(参见Kawamoto，药物化学博士论文，密歇根大学(2010))。其他研究人员已开发了稳定化BCL9肽，其中BCL9蛋白的HD2结构域的α-螺旋经由通过闭环复分解(RCM)生成的烃交联剂稳定化(参见US20140113857)。尽管这些稳定化肽在本领域已经取得了一些成功，但仍然需要更能够调节免疫响应并因此在治疗肿瘤中具有改善的体内疗效的稳定化肽。
技术实现思路
本文公开了来源于人B细胞CLL/淋巴瘤9(BCL9)蛋白的HD2结构域的多肽。在一些实施例中，所述多肽具有7-14个氨基酸长度。在各个实施例中，多肽通过一种或多种烃交联剂稳定化，产生可互换地称为“稳定化多肽”或“钉合多肽”的构建体。在各个实施例中，来源于HD2结构域的多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂，并被称为“未钉合多肽”。在一些实施例中，能够经历反应以形成一种或多种烃的多肽包含选自表1的任何序列或其变体。在一些实施例中，表1中列出的Xaa1、Xaa2、Xaa3和/或Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸。在一些实施例中，烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。在一些实施例中，烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间。在一些实施例中，烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间，烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。在一些实施例中，多肽包含一种或多种烃，其包含选自表1的任何序列或其变体。在一些实施例中，Xaa1、Xaa2、Xaa3和/或Xaa4各自是丙氨酸或α,α-二取代丙氨酸，第一烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间，和/或第二烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。在一些实施例中，多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂并且包含LQTLRXaa1IQRXaa2L(SEQIDNO:X)或其变体或由其组成。在一些实施例中，Xaa1和Xaa2各自是α,α-二取代氨基酸。在一些实施例中，多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂并且包含Xaa1LQXaa2LRXaa3IQRXaa4L(SEQIDNO:X)或其变体或由其组成。在一些实施例中，Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸。在一些实施例中，Xaa1和Xaa2各自是α,α-二取代氨基酸，且烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。在一些实施例中，Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸，且烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间。在一些实施例中，多肽包含烃交联剂并且包含LQTLRXaa1IQRXaa2L(SEQIDNO:X)或其变体或由其组成。在一些实施例中，Xaa1和Xaa2各自是丙氨酸，且烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间。在一些其他实施例中，多肽包含烃交联剂并且包含Xaa1LQXaa2LRXaa3IQRXaa4L(SEQIDNO:X)或其变体或由其组成。在某些实施例中，Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是丙氨酸，并且第一烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间，第二烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。在一些实施例中，α,α-二取代氨基酸是α-甲基,α-烯基氨基酸。在一些实施例中，α-甲基,α-烯基氨基酸选自(S)-2-(4'-戊烯基)丙氨酸、(R)-2-(4'-戊烯基)丙氨酸、(S)-2-(7'-辛烯基)丙氨酸和(R)-2-(7'-辛烯基)丙氨酸。在一些实施例中，烃连接基团选自-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-。在一些实施例中，烃交联剂在至少一个末端或两个末端上具有S构型。在一些实施例中，烃交联剂在至少一个末端或两个末端上具有R-构型。在一些实施例中，烃交联剂在一端具有S-构型并且在另一端具有R-构型。在其他实施例中，多肽或变体的N末端和/或C末端被进一步修饰。在一些实施例中，N末端用乙酰基修饰。在一些实施例中，C末端用一个、两个或多个β-丙氨酸单元、2-萘基丙氨酸和/或任选地连接至一个、两个或多个β-丙氨酸单元的2-萘基丙氨酸修饰，并且其中C末端修饰的羧基任选地用NH2基团进一步修饰。在一些实施例中，N末端和/或C末端修饰进一步包含芴基甲氧基羰基(Fmoc)。在一些实施例中，与未钉合野生型人BLC9HD2结构域或野生型人BLC9HD2结构域的片段相比，本文本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有7‑14个氨基酸长度的多肽，其中所述多肽来源于人B细胞CLL/淋巴瘤9(BCL9)的HD2结构域，并且其中：a)所述多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂并且任选地包含至少一种α,α‑二取代氨基酸；和/或b)所述多肽包含一种或多种烃交联剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.05 US 62/237,4891.一种具有7-14个氨基酸长度的多肽，其中所述多肽来源于人B细胞CLL/淋巴瘤9(BCL9)的HD2结构域，并且其中：a)所述多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂并且任选地包含至少一种α,α-二取代氨基酸；和/或b)所述多肽包含一种或多种烃交联剂。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含一种或多种烃交联剂，其中所述多肽包含选自表1的任何序列或其变体，并且其中：a)Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是丙氨酸；b)第一烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间；和/或c)第二烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。3.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂，其中所述多肽包含选自表1的任何序列或其变体，并且其中：a)Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸；b)Xaa1和Xaa2各自是α,α-二取代氨基酸，并且烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间；或c)Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸，且烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间。4.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含一种或多种烃交联剂，其中所述多肽包含LQTLRXaa1IQRXaa2L(SEQIDNO:3)、Xaa1LQXaa2LRXaa3IQRXaa4L(SEQIDNO:4)或其变体，并且其中：a)Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是丙氨酸；b)第一烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间；和/或c)第二烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。5.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂，其中所述多肽包含LQTLRXaa1IQRXaa2L(SEQIDNO:3)、Xaa1LQXaa2LRXaa3IQRXaa4L(SEQIDNO:4)或其变体，并且其中：a)Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸；b)Xaa1和Xaa2各自是α,α-二取代氨基酸，并且烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间；或c)Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸，且烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间。6.根据权利要求1到5中任一项所述的多肽，其中与选自以下的未钉合野生型人BCL9HD2结构域相比，所述多肽具有一种或多种改善的生物学功能：a)抑制BCL9与β-连环蛋白的结合；b)抑制经典的Wnt/β-连环蛋白信号传送；c)减少调节性T细胞存活；d)降低VEGF在肿瘤中的表达；e)增加CD4+T细胞和CD8+T细胞向肿瘤中的浸润；f)增加肿瘤中的辅助性T细胞17(Th17)；g)减少肿瘤中的树突状细胞；h)当给予受试者时，具有大于至少2小时的半衰期(T1/2)；i)诱导有利于免疫反应的肿瘤微环境；和j)抑制肿瘤生长、癌症干细胞增殖和/或肿瘤转移。7.根据权利要求1到6中任一项所述的多肽，其中所述α,α-二取代氨基酸是α-甲基,α-烯基氨基酸。8.根据权利要求7所述的多肽，其中所述α-甲基,α-烯基氨基酸选自(S)-2-(4'-戊烯基)丙氨酸、(R)-2-(4'-戊烯基)丙氨酸、(S)-2-(7'-辛烯基)丙氨酸和(R)-2-(7'-辛烯基)丙氨酸。9.根据权利要求1到8中任一项所述的多肽，其中所述烃交联剂选自-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-。10.根据权利要求9所述的多肽，其中所述烃交联剂在至少一端具有S-构型。11.根据权利要求9所述的多肽，其中所述烃交联剂在至少一端具有R-构型。12.根据权利要求9所述的多肽，其中所述烃交联剂在一端具有S-构型并且在另一端具有R-构型。13.一种包含LQTLRXaa1IQRXaa2L(SEQIDNO:3)、Xaa1LQXaa2LRXaa3IQRXaa4L(SEQIDNO:4)或其变体或由其组成的多肽，其任选地具有10-14个氨基酸长度，其中：a)所述多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂；和/或b)所述多肽包含一种或多种烃交联剂；和其中与选自以下的未钉合野生型人BCL9HD2结构域相比，所述多肽或变体具有一种或多种改善的生物学功能：a)抑制BCL9与β-连环蛋白的结合；b)抑制经典的Wnt/β-连环蛋白信号传送；c)减少调节性T细胞存活；d)降低VEGF在肿瘤中的表达；e)增加CD4+T细胞和CD8+T细胞向肿瘤中的浸润；f)将辅助性T细胞17(Th17)增加到肿瘤中；g)减少肿瘤中的树突状细胞；h)当给予受试者时，具有大于至少2小时的半衰期(T1/2)；i)诱导有利于免疫反应的肿瘤微环境；和j)抑制肿瘤生长、癌症干细胞增殖和/或肿瘤转移。14.根据权利要求13所述的多肽，其中所述多肽具有11或12个氨基酸长度。15.根据权利要求13或14所述的多肽，其中所述多肽包含一个或多个烃连接基团，并且其中：a)Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是丙氨酸；b)第一烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间；和/或c)第二烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间。16.根据权利要求13或14所述的多肽，其中所述多肽能够经历反应以形成一种或多种烃交联剂，并且其中：a)Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸；b)Xaa1和Xaa2各自是α,α-二取代氨基酸，且烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间；或c)Xaa3和Xaa4各自是α,α-二取代氨基酸，且烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间。17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述α,α-二取代氨基酸是α-甲基,α-烯基氨基酸。18.根据权利要求17所述的多肽，其中所述α,α-二取代氨基酸选自(S)-2-(4'-戊烯基)丙氨酸、(R)-2-(4'-戊烯基)丙氨酸、(S)-2-(7'-辛烯基)丙氨酸和(R)-2-(7'-辛烯基)丙氨酸。19.根据权利要求13到18中任一项所述的多肽，其中所述烃交联剂选自-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-。20.根据权利要求19所述的多肽，其中所述烃交联剂在至少一端具有S-构型。21.根据权利要求19所述的多肽，其中所述烃交联剂在至少一端具有R-构型。22.根据权利要求19所述的多肽，其中所述烃交联剂在一端具有S-构型并且在另一端具有R-构型。23.根据权利要求1到22中任一项所述的多肽，其中：a)所述多肽由LQTLRXaa1IQRXaa2L(SEQIDNO:3)的氨基酸序列组成；b)Xaa1和Xaa2各自是丙氨酸；c)烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间；d)所述烃交联剂是-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-；和/或e)所述烃交联剂在两端具有S-构型。24.根据权利要求1到22中任一项所述的多肽，其中：a)所述多肽由Xaa1LQXaa2LRXaa3IQRXaa4L(SEQIDNO:4)的氨基酸序列组成；b)Xaa1、Xaa2、Xaa3和Xaa4各自是丙氨酸；c)第一烃交联剂存在于Xaa1和Xaa2之间；d)第二烃交联剂存在于Xaa3和Xaa4之间；e)所述第一烃交联剂是-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-；f)所述第二烃交联剂是-CH2-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-CH2-；g)所述第一烃交联剂在一端具有S-构型并且在另一端具有R-构型；和/或h)所述第二烃交联剂在两端具有S-构型。25.根据权利要求1到24中任一项所述的多肽，其中所述多肽的N末端和/或C末端被进一步修饰。26.根据权利要求25所述的多肽，其中所述N末端用乙酰基修饰。27.根据权利要求25或26所述的多肽，其中所述C末端用两个β-丙氨酸单元、2-萘基丙氨酸或连接至两个β-丙氨酸单元的2-萘基丙氨酸修饰，其中所述C末端修饰的羧基用NH2进一步修饰。28.根据权利要求23所述的多肽，其中所述多肽的N末端用乙酰基修饰，并且其中所述多肽的C末端用2-萘基丙氨酸修饰，其中2-萘基丙氨酸的羧基用NH2进一步修饰。29.根据权利要求24所述的多肽，其中所述多肽的N末端用乙酰基修饰，并且其中所述多肽的C末端用连接至两个β-丙氨酸单元的2-萘基丙氨酸修饰，其中所述第二β-丙氨酸单元的羧基用NH2进一步修饰。30.根据权利要求1到29中任一项所述的多肽，其中所述多肽以盐形式或晶体存在。31.根据权利要求30所述的多肽，其中所述盐形式为三氟乙酸盐、乙酸盐或盐酸盐。32.一种组合物，其包含根据权利要求1到31中任一项所述的多肽。33.一种药物组合物，其包含根据权利要求1到32中任一项所述的多肽和药学上可接受的载体。34.根据权利要求33所述的药物组合物，其中所述药物组合物进一步包含至少一种其他药剂。35.根据权利要求34所述的药物组合物，其中所述至少一种其他药剂选自由以下组成的群组：检查点抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂、化疗剂和VEGFR抑制剂。36.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA4抗体。37.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述检查点抑制剂靶向刺激检查点分子，所述刺激检查点分子选自由以下组成的群组：CD27、CD40、OX40、GITR和CD137。38.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述检查点抑制剂靶向抑制性检查点分子，所述抑制性检查点分子选自由以下组成的群组：A2AR、B7-H3、B7-H4、B和T淋巴细胞衰减子(BTLA)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)、淋巴细胞活化基因-3(LAG3)、T细胞免疫球蛋白结构域和黏蛋白结构域3(TIM-3)、VISTA(C10orf54)和T细胞活化的V结构域Ig抑制子。39.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述EGFR...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱棣，
申请(专利权)人：温特瑞克斯制药有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US