一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法技术

本申请公开了一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，包括以下步骤：A、mPlum基因表达盒的获得；B、水稻MSP1基因表达盒的获得；C、小麦致死基因Ki的扩增；D、小麦花粉特异性启动子Pg47的扩增；E、各基因表达元件的连接。所述步骤E、各基因表达元件的连接，进一步包括：第一步，将mPlum基因表达元件连接到pCAMBIA1301载体上；第二步，将完整的水稻MSP1基因引入第一步中已经引入mPlum基因表达元件的pCAMBIA1301载体上。本发明专利技术F1代杂合体在自交结实过程中遵循孟德尔分离定律，产生的后代既有能保持三连锁基因的杂合体，又有无育性的不育系。

【技术实现步骤摘要】
一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法
本专利技术涉及分子生物学核酸化学
，特别涉及一种水稻遗传工程不育系的制备方法。
技术介绍
水稻是是世界上近一半的人口的主食，除可食用外，还可以酿酒、制糖和作为工业原料，人类对水稻的需求很大。多年来的生产实践表明，杂交水稻一般可比常规稻增产20％以上，因此杂交水稻彰显着巨大的增产潜力。杂交水稻的发展依赖于杂交水稻不育系的培育。我国杂交水稻的研究始于上个世纪60年代，70年代开始大规模被种植。第一代杂交水稻是以核质互作雄性不育系为遗传工具的三系法，第二代杂交水稻是以光温敏雄性不育系为遗传工具的两系法，“三系法”和“两系法”杂交育种技术对粮食增产贡献巨大，但也存在问题。三系法中可利用的具有优良形状的父母本有限，配组不自由，野败保持系频率较低。生产上现有的不育系间遗传差异小，杂交种育性稳定性不够，抵御逆境能力较差。而“两系法”中光温敏雄性不育系的育性受外界温度控制，易导致光温敏不育系自交结实，制种失败。因此开发新一代不育系对杂交水稻的发展至关重要。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于，提供了一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：A、mPlum基因表达盒的获得；B、小麦致死基因Ki的扩增；C、水稻MSP1盒的获得；D、小麦花粉特异性启动子Pg47的扩增；E、各基因表达元件的连接。

【技术特征摘要】
1.一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：A、mPlum基因表达盒的获得；B、小麦致死基因Ki的扩增；C、水稻MSP1盒的获得；D、小麦花粉特异性启动子Pg47的扩增；E、各基因表达元件的连接。2.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤C、水稻MSP1盒的获得，进一步的包括：提取水稻植株的基因组DNA，以基因组DNA为模板，以F3/R3为上下游引物进行完整MSP1基因表达盒的扩增，扩增过程中分别在上游引物和下游引物中引入SmaI和SalI酶切位点，其扩增的水稻MSP1基因包含其上游的启动子和下游的终止子，同时包含所有的外显子和内含子。3.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤A、mPlum基因表达盒的获得，进一步包括：以含有mPlum基因完整表达盒的质粒为模板，以F1/R1为上下游引物进行扩增，扩增过程中分别在上下游引物中引入AcsI和KpnI位点，同时在下游引物引入的KpnI位点前面加入Msel酶切位点。4.根据权利要求1所述一种基于MSP1基因的转基因水稻不育系的培育方法，其特征在于：所述步骤B、小麦致死基因Ki的扩增，进一步包括：以小麦基因组DNA为模板，以F2/R2为上下游引物进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：米铁柱，张国栋，刘佳音，徐春莹，葛序娟，王克响，
申请(专利权)人：青岛袁策集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37