一种地衣芽孢杆菌发酵工艺及用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂和生物有机肥制造技术

本发明专利技术公开了一种地衣芽孢杆菌发酵工艺及用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂和生物有机肥。在碎蛋壳以及碎报纸屑衬托下，硫酸锰能缓慢释放在培养基中，分布均匀，效果显著，配合相关工艺可明显提高转孢速度，缩短培养时间，节省成本；甜瓜蒂浸出液有毒性，配合相关工艺既可以消除毒性，保证无杂菌，又能将甜瓜蒂含有的葡萄糖、半乳糖、氨基酸等营养成分释放出来，制得的生物有机肥与微生物菌剂含有的地衣芽孢杆菌是生防细菌，能够有效防止黄瓜灰霉病。生物有机肥能够有效促进根系发达，使黄瓜植株健壮，增强抗灰霉病能力；叶面喷施微生物菌剂，能在叶片形成保护层，阻止灰葡萄孢菌的侵染，对黄瓜叶片起到保护作用。

【技术实现步骤摘要】
一种地衣芽孢杆菌发酵工艺及用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂和生物有机肥
本专利技术涉及一种地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)发酵工艺及其防止黄瓜灰霉病的方法，该菌种的保藏号为CGMCC1.813。该菌种是生防细菌，对灰葡萄孢菌有明显的抑制效果。本专利技术以一种地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)为功能性菌，制得生物有机肥及微生物菌剂，对黄瓜灰霉病有防止效果。
技术介绍
灰霉病是黄瓜保护地栽培常年发生的一种病害，近年来发生呈逐年趋重。由于果实常常受到侵扰而引起腐烂，常常称之烂果病，霉烂病。此病由真菌半知菌亚门灰葡萄孢BotrytiscinereaPers.exFr.侵染引起。以菌核在土壤中或以菌丝及分生孢子在病残体上越冬或越夏。翌春条件适宜，菌核萌发，产生菌丝体、孢子梗、分生孢子，分生孢子成熟后随气流、雨水、露水等传播。光照不足、低温和高湿条件下易流行。灰霉病主要危害黄瓜叶片、茎蔓、花及幼果，并且伴有霉味。在湿度大时，该病容易传播，灰霉所到之处即染病。此病治疗传统方法是农药喷淋染病部位，导致农药残留，环境污染，危及到人类健康。并且传统使用大化肥使土壤日益贫瘠，导致黄瓜根部不发达，长势弱，抗病弱。灰霉病重点在于预防，染病必将导致黄瓜产量以及品质下降，影响菜农收入。本专利技术涉及一种以地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)为功能性菌制得的生物有机肥以及微生物菌剂。本专利技术生物有机肥可以促进黄瓜根部发达，增强抗病力；灰霉病主要危害地上部分，本专利技术微生物菌剂能够有效防止茎叶蔓灰霉病的发生。专利
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种地衣芽孢杆菌发酵工艺及其防止黄瓜灰霉病的方法。本专利技术采取的技术方案为：一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)菌种活化，将保存在超低温冰箱里的地衣芽孢杆菌菌管取出，在无菌条件下用接种环接入到斜面，将斜面放在生化培养箱，25℃培养24h；(2)种子液的制备，无菌条件下，用接种环将活化后的菌种接入到装有专用培养基的三角摇瓶里；将三角摇瓶放在空气浴摇床里，控制转速165r/min，34℃培养24h；(3)工业发酵，按照发酵罐体积60％配料，所选原料以及配比如下：将用报纸包有的纯度98％，浓度0.02ppm的硫酸锰塞进完整的鸡蛋壳中，按照原料质量百分比取高温豆饼粉3.2％，玉米粉4.3％，鱼粉0.3％，碳酸钙0.95％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.02％；通入蒸汽，物料灭菌处理，冷却至35℃接种；按罐压0.06Mpa，35℃，1:1.2通风量，转速180r/min进行发酵；在转孢率达30％时，将培养温度降至30℃；转孢率达到85％-90％停止；发酵结束制得发酵菌液。进一步的，所述步骤(1)中菌种活化的斜面制备方法：用三角摇瓶存放蒸馏水，称取营养琼脂完全溶于蒸馏水；将三角摇瓶放在灭菌锅，灭菌；待三角摇瓶冷却至45℃，每只无菌试管加入10ml液体制成斜面。进一步的，所述步骤(2)中种子液专用培养基组分按照质量百分比组成及制备方法如下：葡萄糖1％，淀粉1.5％，酵母粉1.8％，蛋白胨0.2％，碳酸钙0.3％，硫酸镁0.03％，清水补足，用氢氧化钠调PH至7，将培养基放在高压蒸汽灭菌锅，在121℃，0.1mpa条件下，灭菌30min，灭菌结束后，培养基冷却至室温，备用。进一步的，所述发酵菌液用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂，所述微生物菌剂为质量百分比为10％的发酵菌液和质量百分比为90％的甜瓜蒂浸出液混合均匀而成。进一步的，所述微生物菌剂中的甜瓜蒂浸出液的制备方法为：将甜瓜蒂粉碎至80目，按照甜瓜蒂粉与水的质量比为1:50配料至灭菌罐，通入蒸汽，121℃灭菌30min，冷却至室温，通入无菌空气保压备用，取液体即得甜瓜蒂浸出液。进一步的，所述发酵菌液用于制备防止黄瓜灰霉病的生物有机肥，其特征在于，原料各组分按照重量份组成如下：花生壳粉55-60份、草木灰10-15份、牡蛎钙粉8-12份、鱼粉4-6份、金银花3-5份、月季花2-4份、仙人掌5-8份、腐植酸5-10份；发酵菌液的添加量为有机肥总质量的3-5％。进一步的，所述发酵菌液用于制备防止黄瓜灰霉病的生物有机肥的制备方法，具体包括如下步骤：(1)先将金银花、月季花、仙人掌粉碎至40目，后与花生壳粉、草木灰、牡蛎钙粉、鱼粉搅匀；(2)采用水泥地面堆积发酵，发酵温度控制在65-70℃，发酵时间：春秋15天，夏季10天，冬季20天；发酵期间进行补水，翻堆，以及补氧；(3)发酵结束，向物料中加以质量百分比为3-5％发酵菌液，混合均匀。进一步的，所述微生物菌剂含有有效活菌数≥10亿/g，霉菌杂菌数≤3×10^6/g，杂菌率≤10％，PH值为5.0-8.0，其施用方法为：亩用量50g，稀释500倍，地上部分喷施，其用于防止黄瓜灰霉病。进一步的，所述生物有机肥含有有效活菌数≥2亿/g，有机质≥50％，水分≤30％，PH值为6.5-7.5，其用于防止黄瓜灰霉病。本专利技术的有益效果为：1、一种地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)发酵工艺发酵培养基中加有的硫酸锰(浓度0.02ppm)极少，直接加入容易沉底，导致不均匀分布。本专利技术中硫酸锰被鸡蛋壳报纸包裹，鸡蛋壳、报纸被搅拌叶搅碎，在碎蛋壳以及碎报纸屑衬托下，硫酸锰能缓慢释放在培养基中，起到催化作用，避免因量少导致分布不均匀。2、在本专利技术中的发酵工艺条件下，转孢率达到30％时，配合以下工艺：将培养温度降至30℃，可明显提高转孢速度，缩短培养时间，节省成本。3、甜瓜蒂含有葡萄糖，半乳糖，氨基酸等成分，利于功能菌存活，并且对黄瓜根系、茎叶有很好的滋养保护作用。甜瓜蒂有微毒性，采用上述甜瓜蒂浸出液提取方案，既可以消除毒性，保证无杂菌，又能将甜瓜蒂含有的葡萄糖、半乳糖、氨基酸等营养成分释放出来。4、本专利技术制得的生物有机肥与微生物菌剂含有的地衣芽孢杆菌是生防细菌，对灰葡萄孢菌有明显的抑制效果，能够有效防止黄瓜灰霉病。生物有机肥能够有效促进根系发达，使黄瓜植株健壮，增强抗灰霉病能力；叶面喷施微生物菌剂，能在叶片形成保护层，阻止灰葡萄孢菌的侵染，对黄瓜叶片起到保护作用。附图说明图1为采用本专利技术中地衣芽孢杆菌发酵工艺，在17小时时候，转孢率达到90％以上；图2为未采用本专利技术中地衣芽孢杆菌发酵工艺，在17小时时候，转孢率为30％左右。具体实施方式为了使本专利技术目的、技术方案以及优点更加明白，以下结合实施案例、数据进行进一步阐释。实施案例仅用于解释本专利技术，不限定本专利技术。本专利技术实例中所用材料要求如下：花生壳粉：有机质≥80％，水分≤20％，目数≤40目。草木灰：水分≤15％，目数≤50目。牡蛎钙粉：水分≤10％，PH8-9。鱼粉：水分≤10％，蛋白质≥45％。腐植酸：有机质≥90％，水分≤20％。地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)：为冷干菌种，系市购产品，保藏并购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其保藏编号为CGMCC1.813。一种地衣芽孢杆菌的具体发酵工艺包括如下步骤：(1)菌种活化，将保存在超低温冰箱里的地衣芽孢杆菌菌管取出，在无菌条件下用接种环接入到斜面，将本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)菌种活化，将保存在超低温冰箱里的地衣芽孢杆菌菌管取出，在无菌条件下用接种环接入到斜面，将斜面放在生化培养箱，25℃培养24h；(2)种子液的制备，无菌条件下，用接种环将活化后的菌种接入到装有专用培养基的三角摇瓶里；将三角摇瓶放在空气浴摇床里，控制转速165r/min，34℃培养24h；(3)工业发酵，按照发酵罐体积60％配料，所选原料以及配比如下：将用报纸包有的纯度98％，浓度0.02ppm的硫酸锰塞进完整的鸡蛋壳中，按照原料质量百分比取高温豆饼粉3.2％，玉米粉4.3％，鱼粉0.3％，碳酸钙0.95％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.02％；通入蒸汽，物料灭菌处理，冷却至35℃接种；按罐压0.06Mpa，35℃，1:1.2通风量，转速180r/min进行发酵；在转孢率达30％时，将培养温度降至30℃；转孢率达到85％‑90％停止；发酵结束制得发酵菌液。

【技术特征摘要】
1.一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)菌种活化，将保存在超低温冰箱里的地衣芽孢杆菌菌管取出，在无菌条件下用接种环接入到斜面，将斜面放在生化培养箱，25℃培养24h；(2)种子液的制备，无菌条件下，用接种环将活化后的菌种接入到装有专用培养基的三角摇瓶里；将三角摇瓶放在空气浴摇床里，控制转速165r/min，34℃培养24h；(3)工业发酵，按照发酵罐体积60％配料，所选原料以及配比如下：将用报纸包有的纯度98％，浓度0.02ppm的硫酸锰塞进完整的鸡蛋壳中，按照原料质量百分比取高温豆饼粉3.2％，玉米粉4.3％，鱼粉0.3％，碳酸钙0.95％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.02％；通入蒸汽，物料灭菌处理，冷却至35℃接种；按罐压0.06Mpa，35℃，1:1.2通风量，转速180r/min进行发酵；在转孢率达30％时，将培养温度降至30℃；转孢率达到85％-90％停止；发酵结束制得发酵菌液。2.根据权利要求1所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述步骤(1)中菌种活化的斜面制备方法：用三角摇瓶存放蒸馏水，称取营养琼脂完全溶于蒸馏水；将三角摇瓶放在灭菌锅，灭菌；待三角摇瓶冷却至45℃，每只无菌试管加入10ml液体制成斜面。3.根据权利要求1所述，一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述步骤(2)中种子液专用培养基组分按照质量百分比组成及制备方法如下：葡萄糖1％，淀粉1.5％，酵母粉1.8％，蛋白胨0.2％，碳酸钙0.3％，硫酸镁0.03％，清水补足，用氢氧化钠调PH至7，将培养基放在高压蒸汽灭菌锅，在121℃，0.1mpa条件下，灭菌30min，灭菌结束后，培养基冷却至室温，备用。4.根据权利要求1所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述发酵菌液用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张峰，宋杰，黄志明，孙春龙，代庆海，王丽宁，王凌云，
申请(专利权)人：青岛力力惠生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37