一种基于免疫印迹法检测古代毛织品残片的方法技术

本发明专利技术涉及文物检测领域，公开了一种基于免疫印迹法检测古代毛织品残片的方法，本发明专利技术先制备了碳量子点标记的羊毛二抗，之后用金属盐法和还原法提取现代羊毛和古代毛织品残片，进行SDS‑PAGE凝胶电泳，用碳量子点溶液进行染色，观察电泳图像。将得到的蛋白条带转移到聚偏氟乙烯膜上，经羊毛一抗和碳量子点标记的二抗孵育后，可在凝胶成像系统中观察到免疫条带，鉴定古代毛织品。本发明专利技术中化学试剂用量少，反应温和、环保无害；在对古代毛织品进行检测时，具有样品用量少、灵敏、准确、直观等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种基于免疫印迹法检测古代毛织品残片的方法
本专利技术涉及文物检测领域，尤其涉及一种基于免疫印迹法检测古代毛织品残片的方法。
技术介绍
中国历史悠久，从中国早期的墓葬中出土有大量的羊毛制品，其数量，还是织造之精美程度都让人叹为观止。研究这些出土的毛织品，对于了解古代毛织品的起源和少数民族服饰、民族间文化交流有着举足轻重的作用。在古代毛织品遗存中，羊毛遗存主要表现为毛织品残片，这类遗存长期埋藏在地下环境中，受到水、热、氧气、微生物等环境因素的影响，羊毛角蛋白会发生变性和老化降解。而出土后因环境条件的剧烈变化，进一步加速了纤维的老化，因此，不难想象，在漫长的历史长河中，当年埋入墓葬或者遗址中的毛织品早已经失去原有的形貌，降解成肽段或者氨基酸，肉眼无法识别，且年代越早的证据越难寻觅，给羊毛类文物的鉴定和保护研究带来了很大的困难。目前，普通的分析检测技术，如傅里叶红外光谱，拉曼光谱，X-衍射分析等，在遇到这种残留物分析时，往往束手无策，国内外对于古代毛织品的鉴定，大多数还停留在对纤维形态的分析上，所得出的鉴定结果也没有十足的准确性；因此，寻找一种更为科学的手段来鉴定古代毛织品是非常必要的。专本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于免疫印迹法检测古代毛织品残片的方法，其特征在于包括以下步骤：1）碳量子点的制备：将水和十二烷基苯磺酸钠加入到正戊烷中，制得油相溶液；加入生物质焦油水溶液、正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，振荡得到反相微乳液；加入十二胺，超声，马弗炉中保温，冷却，破乳，离心，制得碳量子点溶液；然后取一半经透析纯化、冷冻干燥，得到碳量子点；2）碳量子点标记羊毛角蛋白二抗的制备：将碳量子点、碳化二亚胺和二抗加入到9‑11mmol/L的磷酸缓冲盐溶液中，在室温条件下搅拌2‑3 h后，用磷酸缓冲盐溶液对溶液进行多次洗涤离心，得到碳量子点标记羊毛角蛋白二抗；3）用酒石酸将0.03‑0.06 mol/L的酒石酸钠溶液的...

【技术特征摘要】
1.一种基于免疫印迹法检测古代毛织品残片的方法，其特征在于包括以下步骤：1）碳量子点的制备：将水和十二烷基苯磺酸钠加入到正戊烷中，制得油相溶液；加入生物质焦油水溶液、正丙醇和十二烷基苯磺酸钠，振荡得到反相微乳液；加入十二胺，超声，马弗炉中保温，冷却，破乳，离心，制得碳量子点溶液；然后取一半经透析纯化、冷冻干燥，得到碳量子点；2）碳量子点标记羊毛角蛋白二抗的制备：将碳量子点、碳化二亚胺和二抗加入到9-11mmol/L的磷酸缓冲盐溶液中，在室温条件下搅拌2-3h后，用磷酸缓冲盐溶液对溶液进行多次洗涤离心，得到碳量子点标记羊毛角蛋白二抗；3）用酒石酸将0.03-0.06mol/L的酒石酸钠溶液的pH调为2.5-2.8，将此溶液与350-450μl步骤1）剩余的碳量子点溶液混合均匀，制得碳量子点染胶溶液；4）分别称取古代毛织品样品和现代羊毛样品，用去离子水清洗，烘干；分别浸在pH=1.5-2.5的HBr溶液中1-2h，用去离子水搓洗，烘干；以1：15-25的浴比加入含有0.05-0.15mol/L的LiBr和0.02-0.04mol/L的十二烷基硫酸钠的溶液中浸没，调节pH为8-11，超声，放入微波反应器辐射水解6-8min；5）从反应器中取出，将两个样品分别倒入三口烧瓶，将三口烧瓶放在恒温水浴锅中，调节水浴温度70-90℃，通氮气10-20分钟，缓缓加入10-25ml的2.5-3.5mol/L三(2-羧乙基)膦溶液，通氮气搅拌，使羊毛溶解，真空抽滤，去除未溶羊毛及杂质；6）分别加入20-35g硫酸铵，搅拌均匀，调节滤液pH，离心8-15min，将下层溶液在2-6℃条件下用透析袋透析50-60h；低温真空浓缩至原体积的1/4-1/2，得到羊毛角蛋白提取液A、B；7)SDS-PAGE凝胶电泳：取羊毛角蛋白提取液A、B于2*样品缓冲液按1∶0.8-1.2比例混合，水浴加热于93-97℃下加热1.5-2.5min，使蛋白质变性；冷却至室温后，分别取羊毛角蛋白提取液各10-20μl加入凝胶点样孔，进行SDS-PAGE凝胶电泳；浸入步骤3）所得碳量子点染胶溶液，以低速在摇床上振荡2.5-3.5h，观察样品的电泳图像；8）电转移：将电泳后的胶平铺在经甲醇和电转缓冲液处理过的聚偏氟乙烯膜上，夹在滤纸和海绵中间组装成转运夹层，放入湿式转膜装置中，恒流转膜；9）膜成像：电转移完成后，取出聚偏氟乙烯膜，放入凝胶成像系统中成像，观察蛋白条带转移情况；10）封闭：取出聚偏氟乙烯膜，用10-20mL的三乙醇胺缓冲盐水溶液洗膜4-6min，用封闭液在室温条件下处理50-70min；11）免疫处理：用抗体稀释液以950-1050:1的体积比稀释一抗，将膜浸没在一抗稀释液中，室温条件下摇床孵育1~2h；取出膜后用TBST液洗膜，之后浸入8-12mL稀释的碳量子点标记羊毛角蛋白二抗中室温条件下孵育1-2h；12）发光显色：直接将免疫处理后的膜在凝胶成像系统中成像，利用碳量子点在紫外光照射下发射荧光的性能，得到免疫印迹图像；如果两样品都得荧光条带，说明古代毛织品残片属于羊毛；如果只有现代羊毛具有荧光条带，说明古代毛织品残片不属于羊毛。2.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秉，王钟元，胡铭周，周莲，彭志勤，胡智文，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33