一种检测植物产生免疫反应的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测植物产生免疫反应的方法，保持现有原核表达产物表达纯化及胼胝质和活性氧观察方法不变，采用稻瘟病菌蛋白基因的原核表达产物，按照5.0mg/ml浓度处理水稻持有不同抗性基因的24个水稻单基因系品种及根组织和叶鞘；24小时后进行DAB染色和苯胺蓝染色，荧光显微镜直接观察胼胝质和活性氧的形成情况，通过胼胝质和活性氧的形成情况判断植物是否产生免疫反应，该方法利用纯化的效应蛋白基因的原核表达产物处理水稻根组织，通过荧光显微镜观察根组织胼胝质和活性氧产生，能直接获得水稻产生免疫反应情况，同时获得能引起多个持有不同抗性基因的水稻单基因系品种和感病品种产生免疫反应的稻瘟病菌蛋白。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物保护和生物
，尤其涉及。
技术介绍
植物自身的先天免疫机制能有效抵御致病微生物的入侵。当感病植物受到病原菌特异小种侵染时，植物自身的免疫机制不能被激活，最终导致病害发生。植物通常通过两套防御机制抵御病原微生物入侵，第一套是通用机制，第二套是抵御病原菌特异小种的机制。植物通用防御机制是病原相关分子模式激发的免疫机制，即PTI (PAMP-triggeredimmunity) 0 PTI是通过寄主胞外表面受体识别病原相关分子模式而激活，是发生在寄主与病原菌互作早期的免疫反应。植物对病原相关分子模式的识别可引发寄主一系列的生理反应，诸如①H+、K+、C1+和Ca2+离子流的产生，其中Ca2+离子流增加是植物免疫反应关键的一步；②活性氧爆发；③从丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)到防御相关基因表达，MAPKs参与了植物防御反应。在PTI过程中，MAPK联级的激活使得WRKY型的转录因子表达，而这类转录因子是植物防御反应的关键调控因子；④胼胝质产生，细胞壁与细胞膜间沉积的胼胝质是PTI响应时的一个典型标志；⑤荷尔蒙，SA、JA和ET是防御反应过程中比较典型的植物荷尔蒙。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测植物产生免疫反应的方法，保持现有原核表达产物表达纯化及胼胝质和活性氧观察方法不变，包括原核表达技术、蛋白纯化技术、DAB染色方法、苯胺蓝染色方法均与常规相同，其特征在于，该方法还包括以下步骤：采用稻瘟病菌蛋白基因的原核表达产物，按照5.0mg/ml浓度处理水稻持有不同抗性基因的24个水稻单基因系品种及根组织和叶鞘；24小时后进行DAB染色和苯胺蓝染色，荧光显微镜直接观察胼胝质和活性氧的形成情况，通过胼胝质和活性氧的形成情况判断植物是否产生免疫反应。

【技术特征摘要】
1.一种检测植物产生免疫反应的方法，保持现有原核表达产物表达纯化及胼胝质和活性氧观察方法不变，包括原核表达技术、蛋白纯化技术、DAB染色方法、苯胺蓝染色方法均与常规相同，其特征在于，该方法还包括以下步骤 采用稻瘟病菌蛋白基因的原核表达产物，按照5. Omg/ml浓度处理水稻持有不同抗性基因的24个水稻单基因系品种及根组织和叶鞘； 24小时后进行DAB染色和苯胺蓝染色，荧光显微镜直...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨静，李成云，刘林，朱有勇，徐畅，施竹凤，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
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