一种同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法与应用。该方法包括如下步骤：(1)超声皂化法提取：利用超声皂化法从食用菌样品提取麦角固醇和维生素D2，得到提取液样品；(2)标准液的配制：配制至少三个浓度的麦角固醇和维生素D2混合液作为标准液；(3)测定：将各浓度梯度的标准液通过液相色谱‑串联质谱法测定，以标准液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；然后在相同条件下将提取液样品通过液相色谱‑串联质谱法测定，并将检测结果与标准工作曲线对照，计算出样品中麦角固醇和维生素D2的含量。本发明专利技术的方法具有耗时短，检测限低、适用范围广以及准确的特点，适用于大批量食用菌样品检测。

【技术实现步骤摘要】
一种同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法与应用
本专利技术属于食品质量安全检测领域与农产品分析检验领域，特别涉及一种同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法与应用。
技术介绍
维生素D(VitaminD,VD)是人类和动物不可或缺的一种维生素，是人体生长发育所需的一种类固醇激素，具有调节人体钙和磷代谢。目前，维生素D缺乏是一个普遍性的全球问题，中老年人群中维生素D缺乏和不足人群分别占69.2％和24.4％之多。医学研究表明VD缺乏还是罹患癌症、自发性免疫疾病、传染病、心血管疾病和精神疾病等常见多发疾患的危险因素。食用菌富含多糖、多酚及甾醇等生物活性物质具有较高的食用价值与多种医疗保健功能，素有“山珍”之称，已被广泛认知为代替红色肉类的健康食品，联合国粮农组织和世界卫生组织曾经提出人类最佳的饮食结构是“一荤一素一菇”。研究发现大部分食用菌中维生素含量相对较低，却含有较高的麦角固醇(维生素的合成前体)，其中野生食用菌比栽培食用菌维生素D2的含量要高，紫外照射能够显著提高食用菌中维生素D2含量，是食用菌品质质量的标志之一，因此，获得高维生素D食用菌是研究高维生素功能性食品重要原材料的关键，如何提高食用菌食药价值与出口质量是产业转型升级的迫切需求。常见检测麦角固醇和维生素D2的方法有液相色谱法、气相色谱法。目前文献建立的检测方法多为对单一成分麦角固醇或维生素D2进行检测，由于维生素D2由植物性的麦角固醇经紫外线照射得来，麦角固醇和维生素D2是同分异构体，两者同时存在食用菌或真菌中，不同品种的食用菌或真菌中含量差异较大，从我国现行食用菌有效国家标准33项中发现，其中通用检验、检测标准5项，仅涉及到食用菌灰分、杂质、总糖含量、粗蛋白含量、粗脂肪含量的测定，但同步检测麦角固醇和维生素D2未发现国家标准与专利技术专利，相关研究文献鲜有报导。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法。本专利技术的另一目的在于提供上述同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种同步检测食用菌中麦角固醇与VD2的方法，包括如下步骤：(1)超声皂化法提取：将食用菌样品与碱金属溶液混合均匀，再加入有机溶剂进行超声提取，得到粗提液；利用萃取剂对粗提液进行萃取，旋转蒸发溶剂，最后用无水乙醇溶解并过滤，得到提取液样品；(2)标准液的配制：将麦角固醇和维生素D2标准品配制成至少三个浓度的麦角固醇和维生素D2混合液作为标准液；(3)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定将步骤(2)中的各浓度梯度的标准液通过液相色谱-串联质谱法测定，以标准液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；然后在相同条件下将步骤(1)中得到的提取液样品通过液相色谱-串联质谱法测定，并将检测结果与标准工作曲线对照，计算出样品中麦角固醇和维生素D2的含量；所述的液相色谱-串联质谱法中：在电喷雾质谱、正离子监测模式下，麦角固醇定性和定量离子对为母离子m/z＝379.3、特征子离子m/z＝253.4，维生素D2定性和定量离子对为母离子m/z＝397.4、特征子离子m/z＝271.4。步骤(1)中所述的食用菌包括新鲜食用菌(食用菌鲜样)、干食用菌(食用菌干样)以及食用菌加工产品；优选为平菇、鲍鱼菇、白玉菇、木耳、银耳、香菇、竹荪、茶树菇等；更优选为香菇干粉。步骤(1)中所述的碱金属溶液优选为KOH溶液或NaOH溶液；更优选浓度为20％(w/v)的KOH溶液。步骤(1)中所述的碱金属的用量优选为按每克(g)按干重计的食用菌配比8g碱金属计算。步骤(1)中所述的异丙醇的用量优选为按每克(g)按干重计的食用菌配比20mL异丙醇计算。步骤(1)中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇和异丙醇中的至少一种。步骤(1)中所述的超声提取的条件优选为功率500W、频率40KHz。步骤(1)中所述的超声提取的时间优选为1h。步骤(1)中所述的萃取剂优选为石油醚，或含有抗氧化剂的石油醚。所述的抗氧化剂优选为二丁基羟基甲苯(BHT)。所述的含有抗氧化剂的石油醚中抗氧化剂的浓度优选为5×10-4g/L。步骤(1)中所述的萃取的次数优选为2次。步骤(1)中所述的萃取优选为通过如下步骤实现：将萃取剂和粗提液混合，振荡后静置，取上层萃取液；下层水相再次加入萃取剂进行萃取，取上层萃取液；合并两次得到的上层萃取液，并用水洗至中性。所述的静置的时间优选为10min。步骤(1)中所述的过滤为采用0.45μm的过滤膜过滤。步骤(2)中所述的标准液中麦角固醇的浓度范围为0.40～3.60mg/L，维生素D2的浓度范围为0.22～2.20mg/L。步骤(2)中所述的标准液中麦角固醇的浓度/维生素D2的浓度配对如下：0.40mg/L/0.22mg/L、1.20mg/L/0.66mg/L、2.40mg/L/1.10mg/L、3.00mg/L/1.54mg/L、3.60mg/L/2.20mg/L。步骤(3)中所述的液相色谱-串联质谱法中液相色谱所用到的色谱柱包括C8色谱柱和C18色谱柱；优选为C8色谱柱。所述的C8色谱柱优选为AgilentZORBARSBC8色谱柱。步骤(3)中所述的液相色谱-串联质谱法中液相色谱的洗脱条件优选为：流动相：A为甲醇，B为水；梯度条件：0～2min10％A、90％B，2～3min100％A，3～5min90％A、10％B；流速：2.5mL/min。步骤(3)中所述的液相色谱-串联质谱法中液相色谱的检测波长优选为270nm。步骤(3)中所述的液相色谱-串联质谱法中的质谱的条件优选为：离子源：电喷雾正离子模式(ESI+)；监测方式：多反应检测；气帘气(CUR)压力：137.9kPa；雾化气(GS1)压力：310.3kPa；辅助气(GS2)压力:413.7kPa；离子源喷射电压(IS):5500V；离子源温度(TEM):500℃；离子源喷雾流速:5L/min；麦角固醇定性和定量离子对分别为母离子m/z＝379.3，特征子离子m/z＝253.4；维生素D2定性和定量离子对分别为：母离子m/z＝397.4，特征子离子m/z＝271.4；麦角固醇和维生素D2的碰撞能量分别为22eV、18eV；麦角固醇和维生素D2的源内碎裂电压均为100eV。所述的同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法在食品检测领域中的应用。所述的食品包括食用菌鲜样、食用菌干样以及食用菌加工产品。所述的食用菌包括平菇、鲍鱼菇、白玉菇、木耳、银耳、香菇、竹荪、茶树菇等。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：1、本专利技术的检测方法适用于平菇、鲍鱼菇、白玉菇、木耳、银耳、香菇、竹荪、茶树菇等食用菌鲜样、干样和加工产品中麦角固醇与维生素D2的的检测，具有耗时短，适用范围广以及准确的特点，可适用于大批量食用菌样品检测。可为食用菌新有效成分的检测提供技术方法，并为食用菌样品的添加剂分析及健康价值评估提供准确的分析方法。2、本专利技术中经方法学考察，麦角固醇和维生素D2的平均加标回收率范围为86.7％～102.4％，相对标准偏差分别为1.02％～4.13％。采用液质联用法和高压液相色谱法对采集的样品分别检测，两种检测方法的实验结果并无显本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同步检测食用菌中麦角固醇与VD2的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)超声皂化法提取：将食用菌样品与碱金属溶液混合均匀，再加入有机溶剂进行超声提取，得到粗提液；利用萃取剂对粗提液进行萃取，旋转蒸发溶剂，最后用无水乙醇溶解并过滤，得到提取液样品；(2)标准液的配制：将麦角固醇和维生素D2标准品配制成至少三个浓度的麦角固醇和维生素D2混合液作为标准液；(3)液相色谱‑串联质谱法测定将步骤(2)中的各浓度梯度的标准液通过液相色谱‑串联质谱法测定，以标准液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；然后在相同条件下将步骤(1)中得到的提取液样品通过液相色谱‑串联质谱法测定，并将检测结果与标准工作曲线对照，计算出样品中麦角固醇和维生素D2的含量；所述的液相色谱‑串联质谱法中：在电喷雾质谱、正离子监测模式下，麦角固醇定性和定量离子对为母离子m/z＝379.3、特征子离子m/z＝253.4，维生素D2定性和定量离子对为母离子m/z＝397.4、特征子离子m/z＝271.4。

【技术特征摘要】
1.一种同步检测食用菌中麦角固醇与VD2的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)超声皂化法提取：将食用菌样品与碱金属溶液混合均匀，再加入有机溶剂进行超声提取，得到粗提液；利用萃取剂对粗提液进行萃取，旋转蒸发溶剂，最后用无水乙醇溶解并过滤，得到提取液样品；(2)标准液的配制：将麦角固醇和维生素D2标准品配制成至少三个浓度的麦角固醇和维生素D2混合液作为标准液；(3)液相色谱-串联质谱法测定将步骤(2)中的各浓度梯度的标准液通过液相色谱-串联质谱法测定，以标准液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；然后在相同条件下将步骤(1)中得到的提取液样品通过液相色谱-串联质谱法测定，并将检测结果与标准工作曲线对照，计算出样品中麦角固醇和维生素D2的含量；所述的液相色谱-串联质谱法中：在电喷雾质谱、正离子监测模式下，麦角固醇定性和定量离子对为母离子m/z＝379.3、特征子离子m/z＝253.4，维生素D2定性和定量离子对为母离子m/z＝397.4、特征子离子m/z＝271.4。2.根据权利要求1所述的同步检测食用菌中麦角固醇与VD2的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的液相色谱-串联质谱法中的质谱的条件为：离子源：电喷雾正离子模式；监测方式：多反应检测；气帘气压力：137.9kPa；雾化气压力：310.3kPa；辅助气压力:413.7kPa；离子源喷射电压:5500V；离子源温度:500℃；离子源喷雾流速:5L/min；麦角固醇定性和定量离子对分别为母离子m/z＝379.3，特征子离子m/z＝253.4；维生素D2定性和定量离子对分别为：母离子m/z＝397.4，特征子离子m/z＝271.4；麦角固醇和维生素D2的碰撞能量分别为22eV、18eV；麦角固醇和维生素D2的源内碎裂电压均为100eV。3.根据权利要求1所述的同步检测食用菌中麦角固醇与VD2的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的液相色谱-串联质谱法中的液相色谱的条件为：色谱柱为C8色谱柱；洗脱条件为：流动相：A为甲醇，B为水；梯度条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐明芳，黎明，沈林燕，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44