本发明专利技术提供了一种鉴定细菌的探针及其鉴定方法和应用，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO 1‑32所示；本发明专利技术巧妙地设计了32条特异性的DNA荧光探针，采用氧化石墨烯纳米片进行荧光淬灭反应，模式识别软件进行数据处理，优化反应条件及步骤，最终建立一套鉴定细菌的完整体系，各步骤各条件协同增效，所述方法操作简便快速，提高了鉴定效率和准确性，具有广阔的应用前景和市场价值。
【技术实现步骤摘要】
一种鉴定细菌的探针及其鉴定方法和应用
本专利技术涉及
，尤其涉及一种鉴定细菌的探针及其鉴定方法和应用。
技术介绍
细菌鉴定在医学和工业方面具有重要意义。在医学上，要治愈被细菌感染的病人，医生需要首先知道病人是被何种细菌感染以及该细菌对何种抗生素敏感，才能选择合适的药物将其杀死。在工业上，许多产品都必须经过细菌检测才能销售，这一点在食品工业上尤其严格。当前，常用的细菌鉴定方法有很多局限性，如需要较长的培养时间、专业的实验人员、昂贵的仪器等。石墨烯纳米片是由单层原子平面结构石墨烯堆垛而成的物质，具有独特的量子效应，在各种溶剂中具备优异的分散性能，具有突出的环境友好性和生物相容性，易于进行表面功能修饰，成为近来研究热点。利用石墨烯进行生物及化学检测的报道屡见不鲜。CN105460922A公开了一种部分还原氧化石墨烯荧光共振能量转移纳米探针及其制备方法，通过氧化石墨烯在碱性溶液中的室温控制还原制备部分还原氧化石墨烯，绿色环保，重现性好，但过程复杂，耗时耗力。CN106086173A公开了一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，在纳米金颗粒表面修饰能特异性识别目标细菌的核酸适配子，在稀土上转换荧光颗粒表面修饰与适配子互补配对的cDNA，从而导致荧光淬灭，灵敏度高，特异性好，但操作过程需要专业人员的操作，检测菌种单一，适用范围窄。因此，提供一种操作简便、快速，对实验人员的专业性要求低，鉴定效率高，成本低的细菌检测方法具有重要意义和广阔的市场前景。
技术实现思路
针对现有技术的不足及实际的需求，本专利技术提供一种鉴定细菌的探针及其鉴定方法和应用，本专利技术巧妙地设计了八条特异性的DNA荧光探针，采用氧化石墨烯纳米片进行荧光淬灭反应，模式识别软件进行数据处理，优化反应条件及步骤，建立一套鉴定细菌的完整体系，各步骤条件协同增效，最终提高了鉴定效率和准确性，具有广阔的应用前景和市场价值。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种鉴定细菌的探针，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.1-SEQIDNo.32所示。本专利技术中，专利技术人为改进现有技术中鉴定细菌的复杂方法，巧妙地设计了三十二条特异性的DNA探针，所述探针与菌株DNA之间存在易识别和统计分析的差异性的匹配率，能够提高细菌鉴定的准确度和效率。所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.1-SEQIDNo.32所示，具体序列如下：SEQIDNo.1为CCCCCCCCCCCCCCC，命名为P0；SEQIDNo.2为CCCCCCCCCCCCTTT，命名为P1；SEQIDNo.3为CCCCCCCCCTTTCCC，命名为P2；SEQIDNo.4为CCCCCCCCCTTTTTT，命名为P3；SEQIDNo.5为CCCCCCTTTCCCCCC，命名为P4；SEQIDNo.6为CCCCCCTTTCCCTTT，命名为P5；SEQIDNo.7为CCCCCCTTTTTTCCC，命名为P6；SEQIDNo.8为CCCCCCTTTTTTTTT，命名为P7；SEQIDNo.9为CCCTTTCCCCCCCCC，命名为P8；SEQIDNo.10为CCCTTTCCCCCCTTT，命名为P9；SEQIDNo.11为CCCTTTCCCTTTCCC，命名为P10；SEQIDNo.12为CCCTTTCCCTTTTTT，命名为P11；SEQIDNo.13为CCCTTTTTTCCCCCC，命名为P12；SEQIDNo.14为CCCTTTTTTCCCTTT，命名为P13；SEQIDNo.15为CCCTTTTTTTTTCCC，命名为P14；SEQIDNo.16为CCCTTTTTTTTTTTT，命名为P15；SEQIDNo.17为TTTCCCCCCCCCCCC，命名为P16；SEQIDNo.18为TTTCCCCCCCCCTTT，命名为P17；SEQIDNo.19为TTTCCCCCCTTTCCC，命名为P18；SEQIDNo.20为TTTCCCCCCTTTTTT，命名为P19；SEQIDNo.21为TTTCCCTTTCCCCCC，命名为P20；SEQIDNo.22为TTTCCCTTTCCCTTT，命名为P21；SEQIDNo.23为TTTCCCTTTTTTCCC，命名为P22；SEQIDNo.24为TTTCCCTTTTTTTTT，命名为P23；SEQIDNo.25为TTTTTTCCCCCCCCC，命名为P24；SEQIDNo.26为TTTTTTCCCCCCTTT，命名为P25；SEQIDNo.27为TTTTTTCCCTTTCCC，命名为P26；SEQIDNo.28为TTTTTTCCCTTTTTT，命名为P27；SEQIDNo.29为TTTTTTTTTCCCCCC，命名为P28；SEQIDNo.30为TTTTTTTTTCCCTTT，命名为P29；SEQIDNo.31为TTTTTTTTTTTTCCC，命名为P30；SEQIDNo.32为TTTTTTTTTTTTTTT，命名为P31。优选地，所述探针的5’末端标记有荧光基团。优选地，所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种或至少两种的组合，优选为FAM。第二方面，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包含第一方面所述的探针。优选地，所述试剂盒还包括单层氧化石墨烯纳米片。第三方面，本专利技术提供一种鉴定细菌的方法，包括如下步骤：(1)将第一方面所述的探针与氧化石墨烯溶于磷酸盐缓冲液中进行反应；(2)将细菌悬浊液加入步骤(1)得到的反应后溶液进行加热孵化，冷却至室温后测试荧光信号；(3)将步骤(2)得到的荧光信号数据输入电脑软件中进行处理，得到结果。优选地，步骤(1)所述探针的浓度为400-600nM，例如可以是400nM、450nM、500nM、550nM或600nM。优选地，步骤(1)所述氧化石墨烯的浓度为80-120μg/mL，例如可以是80μg/mL、85μg/mL、90μg/mL、95μg/mL、100μg/mL、105μg/mL、110μg/mL、115μg/mL或120μg/mL。优选地，步骤(1)所述反应的温度为20-35℃，例如可以是20℃、23℃、25℃、27℃、30℃或35℃。优选地，步骤(1)所述反应的时间为5-15min，例如可以是5min、8min、10min、12min或15min。优选地，步骤(2)所述加热的温度为30-40℃，例如可以是30℃、33℃、35℃、37℃、39℃或40℃。优选地，步骤(2)所述细菌浊液的麦氏浊度为3.5-4.5MCF，例如可以是3.5MCF、4MCF或4.5MCF。优选地，步骤(2)所述加热的时间为20-40min，例如可以是20min、25min、30min、35min或40min。优选地，步骤(3)所述软件包括模式识别软件，优选为SYSTAT13.0；优选地，步骤(3)所述处理的方法为：采用经典线性判别分析(classicallineardiscriminantanalysis)进行处理，得到结果。作为优选技术方案，一种鉴定细菌的方法，具体包括如下步骤：(1)将第一方面所述的浓度为400-600nM探针与浓度为80-120μg/mL的氧本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鉴定细菌的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1‑32所示。
【技术特征摘要】
1.一种鉴定细菌的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.1-32所示。2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述探针的5’末端标记有荧光基团；优选地，所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种或至少两种的组合，优选为FAM。3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1或2所述的探针；优选地，所述试剂盒还包括单层氧化石墨烯纳米片溶液。4.一种鉴定细菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将权利要求1或2所述的探针与氧化石墨烯溶于磷酸盐缓冲液中进行反应；(2)将细菌悬浊液加入步骤(1)得到的反应后溶液进行加热孵化，冷却至室温后测试荧光信号；(3)将步骤(2)得到的荧光信号数据输入电脑软件中进行处理，得到结果。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述探针的浓度为400-600nM。6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述氧化石墨烯的浓度为80-120μg/mL；优选地，步骤(1)所述反应的温度为20-35℃；优选地...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘刚，王乐乐，李妍，闻艳丽，罗超，梁文，许丽，李兰英，
申请(专利权)人：上海市计量测试技术研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31
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