一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物、试剂盒及其方法技术

本发明专利技术公开了一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物、试剂盒及其方法。该引物包括检测引物Ft和检测引物Bt；其中，检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还提供了一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素试剂盒，该试剂盒包括上述引物，Bst DNA聚合酶，以及钙黄绿素和氯化锰的混合溶液等，能对大肠杆菌志贺毒素进行聚合酶螺旋反应的检测，不会因温度的改变而造成时间损失，耗时短，反应过程简便、检测周期短、特异性强、可用肉眼观察检测结果。本发明专利技术对新型恒温扩增技术扩增的开发及微生物的现场检测具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物、试剂盒及其方法
本专利技术属于生物
，特别涉及一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物、试剂盒及其方法。
技术介绍
志贺毒素主要是由大肠杆菌产生的，产志贺毒素大肠杆菌(shigatoxin-producingEscheriachiacoli，STEC)—是食品主要致病菌之一。STEC主要毒力因子位于噬菌体上的stx1、stx2基因上，这两种基因分别编码志贺毒素Stx1、Stx2。志贺毒素Stx1、Stx2导致病人感染的剂量很低，可导致病人剧烈腹痛和腹泻，严重者发生急性肾衰竭而死亡。目前对志贺毒素的检测方法主要有传统的生化鉴定方法，以及分子生物技术的PCR方法，还有以免疫学为主的酶联免疫试剂盒和应用各类生化自动鉴定仪的检测方法，以及最新出现的基因芯片检测手段。常规检测鉴定方法工作量相对较大且检测结果一般4～5天才能得出结果，耗时长，根据实验现象判断鉴定结果，很难满足快速鉴定的需要。近年来发展起来的基因芯片检测及PCR扩增方法具有较强的特异性、快速、灵敏，但是成本较高。免疫学检测方法，如ELISA，免疫层析等，灵敏度高，但是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物，其特征在于：包括检测引物Ft和检测引物Bt；其中，检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物，其特征在于：包括检测引物Ft和检测引物Bt；其中，检测引物Ft的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；检测引物Bt的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。2.一种PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物。3.根据权利要求2所述的PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的试剂盒，其特征在于：所述的PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的引物中检测引物Ft和检测引物Bt的浓度均为50μM。4.根据权利要求3所述的PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的试剂盒，其特征在于，还包括如下组分：A、2×反应缓冲液：40.0mM的Tris-HCl，20.0mM的硫酸铵，20.0mM的氯化钾，16.0mM的硫酸镁，0.2％(v/v)的Tween20，1.4M的甜菜碱，10.0mM的dNTPs；B、BstDNA聚合酶；C、钙黄绿素和氯化锰的混合溶液。5.根据权利要求4所述的PSR等温扩增反应检测大肠杆菌志贺毒素的试剂盒，其特征在于，组分C中所述的钙黄绿素和氯化锰的混合溶液通过如下方法制备得到：(i)将钙黄绿素溶于二甲基亚砜中，配置50μM的钙黄绿素溶液；将氯化锰溶于水中，配置1mM的氯化锰水溶液；(i...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘君彦，徐振波，徐行勇，徐瑞瑞，苏健裕，刘丽艳，李冰，李琳，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44