DNA胶抽提试剂及使用该试剂纯化PCR产物的方法技术

本发明专利技术公开了一种DNA胶抽提试剂及使用该试剂纯化PCR产物的方法，它包括DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液和洗涤液，DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液的配方为：6mol/L盐酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.5％月桂酰肌氨酸，0.1mol/L 2‑巯基乙醇；洗涤液的配方为：10mmol/L Tris.HCl、100mmol/L NaCl、1mmol/L EDTA、体积浓度80％乙醇，Tris.HCl的pH值为8.0。本发明专利技术的DNA胶抽提试剂与再生硅柱一起使用，可以减少一次性商业试剂盒的使用数量，减少实验室垃圾的产生，保护环境，节约社会资源和使用费用。

【技术实现步骤摘要】
DNA胶抽提试剂及使用该试剂纯化PCR产物的方法
本专利技术属于生物试剂领域，具体涉及一种DNA胶抽提试剂及使用该试剂纯化PCR产物的方法。
技术介绍
基因克隆(也称分子克隆)是现代分子生物学最常用技术，广泛应用于生物，医学，生物制药工业等领域。基因克隆是指将获得的目的基因或DNA(脱氧核糖核酸)片段与质粒(载体)在体外进行重组并将重组载体导入宿主进行复制，通过提取质粒从而获得大量重组DNA的过程。这一过程包括目的基因扩增与纯化，限制性酶酶切反应，酶切产物琼脂糖电泳与DNA胶抽提或纯化，目的DNA与质粒连接，连接产物的细菌转化，细菌培养和重组质粒提取等主要步骤。其中,DNA的纯化对基因克隆的效率起关键作用。在基因克隆过程中，DNA胶抽提试剂盒常用于酶切后的DNA经电泳后从琼脂糖中抽提和纯化DNA。使用DNA胶抽提试剂盒纯化DNA不仅可以提高DNA质量，也大大加速基因克隆的效率和研究的进程。目前，DNA胶抽提试剂盒是全球绝大多数实验室常使用的试剂盒，而且用量较大，但同时也是实验室主要支出之一。虽然DNA胶抽提试剂盒在市场上产生了巨大经济效益，但由于这些试剂盒主要被设计和制备成一次性使用，使用试剂盒不仅产生大量实验室垃圾，也造成资源的浪费。因此，本专利技术的目的是要减少DNA胶抽提试剂盒的消耗，保护环境，同时也为实验室节约资金。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题为：如何提供一种DNA胶抽提试剂，解决现有的DNA胶抽提试剂盒一次性使用造成环境污染和浪费的问题。本专利技术的技术方案为：DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液，它的配方为：6mol/L盐酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.5％月桂酰肌氨酸，0.1mol/L2-巯基乙醇。DNA胶抽提试剂，它包括DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液和洗涤液，DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液的配方为：6mol/L盐酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.5％月桂酰肌氨酸，0.1mol/L2-巯基乙醇；洗涤液的配方为：10mmol/LTris.HCl、100mmol/LNaCl、1mmol/LEDTA、体积浓度80％乙醇，Tris.HCl的pH值为8.0。本专利技术还公开了一种PCR产物胶抽提和纯化的方法，包括以下步骤：(1)将PCR扩增产物进行琼脂糖胶电泳；(2)电泳结束，将含DNA的胶块切出，称量切出胶块的重量，将胶块置于无菌离心管中；(3)向离心管中加入胶块重量的三倍体积的上述所述的DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液，在75℃金属浴中加热将胶溶解；其中胶块重量以毫克计，DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液体积以微升计；(4)待胶完全溶解后，冷却至室温，往离心管中加胶重量的1倍体积的异丙醇混合；其中胶块重量以毫克计，异丙醇体积以微升计；(5)将离心管中的胶混合液移至附带收集管的硅柱中，置于离心机中，以12000rpm速度离心1分钟，弃收集管中废液；(6)向硅柱中加入上述所述的洗涤液，以12000rpm速度离心1分钟，弃收集管中废液，将硅柱放回收集管，不加任何液体，以相同速度再次离心1分钟以除尽硅柱中残留液；(7)将硅柱置于无菌离心管中，向硅柱中加去离子蒸馏水，室温1分钟后，以12000rpm速度离心1分钟；(8)将离心管中收集的DNA样品进行检测。进一步地，为了达到本专利技术节约材料的目的，所述硅柱为再生硅柱。进一步地，再生硅柱采用专利申请号：201710437190.7中权利要求2的方法制备。即：(1))取使用后的一次性硅柱置于收集管中，加0.75mL蒸馏水，进行离心分离并弃去废液；(2)加入1mol/L磷酸溶液0.5mL，静置3分钟进行离心分离并弃去废液；重复该步骤五次；(3)用0.75mL蒸馏水清洗硅柱，进行离心分离并弃去废液；(4)将硅柱移至无菌离心管中，再次离心分离，除尽硅柱中残留水分，即得到再生硅柱。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的DNA胶抽提试剂可以成功用于DNA的纯化而不影响DNA纯化的产量。本专利技术的DNA胶抽提试剂与再生硅柱一起使用，可以减少一次性商业试剂盒的使用数量，减少实验室垃圾的产生，保护环境，节约社会资源和使用费用。附图说明图1为再生硅柱配合本专利技术的DNA胶抽提试剂对DNA胶抽提效果与试剂盒原装硅柱和试剂对DNA胶抽提效果的对比。具体实施方式实施例1DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液的配置琼脂糖胶溶解液包括6mol/L盐酸胍(Guanidine.HCl),25mmol/L柠檬酸钠(SodiumCitrate)，0.5％月桂酰肌氨酸(N-Lauroylsarcosine)，0.1mol/L2-巯基乙醇。下面以100毫升琼脂糖胶溶解液为例，配制方法如下：(1)分别在电子天平中称量57.3克盐酸胍，7.35克柠檬酸钠和0.5克月桂酰肌氨酸，将药品置于250毫升容量的烧杯中，加50毫升蒸馏水，在磁力搅拌器上加热溶解。(2)用20微升移液枪吸取6.8微升2-巯基乙醇，加入到上述溶解液中，搅拌混匀。(3)将溶液转移至100毫升量筒中，加蒸馏水定容至100毫升。将定容好的溶液分装于50毫升无菌离心管中，密封保存。实施例2洗涤液的配置洗涤液包含10mmol/LTris.HCl(pH8.0),100mmol/LNaCl,1mmol/LEDTA,80％乙醇。下面以100毫升洗涤液为例，配制方法如下：(1)按照常规方法配制1mol/LTris.HCl(pH8.0)母液以及0.5mol/LEDTA母液；(2)在电子天平中称量0.585克NaCl，置于250毫升试剂瓶中；(3)向试剂瓶中加1毫升1mol/LTris.HCl(pH8.0)母液以及200微升0.5mol/LEDTA母液；(4)向试剂瓶中加18.5毫升蒸馏水将NaCl彻底溶解；(5)用量筒量取80毫升无水乙醇，加入到试剂瓶中，与溶液彻底混匀，加盖密封。实验例为了鉴定本专利技术的DNA胶抽提试剂对DNA胶抽或纯化的效果，利用Qiagen和Axygen胶抽提试剂盒中的再生硅柱(再生硅柱的制备方法参照专利申请号：201710437190.7，专利技术名称为：硅柱快速再生方法)和本专利技术的试剂对电泳后的DNA胶进行纯化；同时与Qiagen和AxygenDNA胶抽提试剂盒原装硅柱和试剂的DNA纯化效果进行比较。利用本专利技术的试剂完成DNA胶抽提方法如下：(1)按照常用方法制备1％琼脂糖胶，待胶冷却后，拔出上样梳并置于含1xTAE的电泳槽中，将50微升PCR产物(LIFDNA)装载于上样孔中，在100V电压下进行电泳20分钟；(2)电泳结束，在紫外灯下将含DNA的胶块切出，在电子天平中称量切出胶块的重量，将胶块置于1.5毫升无菌离心管中；(3)向离心管中加入胶块重量的三倍体积的本专利技术的DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液(按100毫克胶加100微升胶溶解液比例计算)，在75℃金属浴中加热将胶溶解；(4)待胶完全溶解后，冷却至室温，往离心管中加胶重量的1倍体积的异丙醇混合。(5)将离心管中的胶混合液移至再生硅柱中(注:再生硅柱附带收集管)，置于离心机中，以12000rpm速度离心1分钟，弃收集管中废液；(6)向再生硅柱中加600毫升本专利技术的洗涤液，以12000rpm速度离心1分钟，弃收集管中废液。将再生硅柱放回收集管，不加任何液体，以相同速度再次离心1分钟以除尽再生硅柱中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液，其特征在于，它的配方为：6mol/L盐酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.5％月桂酰肌氨酸，0.1mol/L 2‑巯基乙醇。

【技术特征摘要】
1.DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液，其特征在于，它的配方为：6mol/L盐酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.5％月桂酰肌氨酸，0.1mol/L2-巯基乙醇。2.DNA胶抽提试剂，其特征在于，它包括权利要求1所述的DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液和洗涤液，洗涤液的配方为：10mmol/LTris.HCl、100mmol/LNaCl、1mmol/LEDTA、体积浓度80％乙醇，Tris.HCl的pH值为8.0。3.一种PCR产物胶抽提和纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将PCR扩增产物进行琼脂糖胶电泳；(2)电泳结束，将含DNA的胶块切出，称量切出胶块的重量，将胶块置于无菌离心管中；(3)向离心管中加入胶块重量的三倍体积的权利要1所述的DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液，在75℃金属浴中加热将胶溶解；其中胶块重量以毫克计，DNA胶抽提用琼脂糖胶溶解液体积以微升计；(4)待胶完全溶解后，冷却至室温，往离心管中加胶重量的1倍体积的异丙醇混合；其中胶块重量以毫克计，异丙醇体积以微升计；(5)将离心管中的胶混...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓文生，张程，赵沙沙，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42