牛血清中血红蛋白的定量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种牛血清中血红蛋白的定量检测方法，首先配制血红蛋白标准品稀释液，用稀释液按梯度0mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/、200mg/L配制系列标准品，1ml/瓶分装后冻干，2~8℃保存；使用时将标准品取出用纯化水复溶；取空白酶标板，设置好加样布局，分别加入20ul梯度标准品或待测样本，再加入酶免底物液50ul、酶免显色液50ul震荡混匀，室温反应10min，在酶标仪波长630或650进行读数；根据标准品检测的发光值和浓度值，绘制标准曲线：以横坐标X轴代表血红蛋白含量，纵坐标Y轴代表酶免读数OD值；R²≥0.995时视为最佳线性范围；最后根据待测样品的Y轴读数回算X轴血红蛋白含量，血红蛋白含量＜100mg/L时，符合诊断试剂产品辅料使用需求。本发明专利技术提升了试剂盒产品的特异性。

【技术实现步骤摘要】
牛血清中血红蛋白的定量检测方法
本专利技术涉及牛血清中理化指标的检测，尤其是涉及一种牛血清中血红蛋白的定量检测方法。
技术介绍
新生牛血清作为体外诊断试剂常用的辅料，主要用来进行酶结合物稀释液、标准品稀释液、样本稀释液、质控品稀释液等的配制。国内绝大多数的诊断试剂产品的显色原理均是采用辣根过氧化物酶-H2O2-TMB系统，利用辣根过氧化物酶中的铁卟啉环，催化双氧水分解产生氧自由基，进而催化TMB显色。1分子辣根过氧化物酶含有1个铁卟啉环，而1分子血红蛋白含有4个铁卟啉环，同样具有催化-H2O2-TMB显色的原理。因此当牛血清中含有较高含量的血红蛋白时，配制的试剂在参与反应的过程中，过多的血红蛋白有吸附到包被板或反应杯上的风险，造成本底升高甚至假阳性。由于牛血清的关键理化指标会影响到试剂盒产品的基本性能，而血红蛋白作为重要的影响因素之一，与试剂盒的本底和特异性息息相关。申请人在前期的研究过程中发现，血红蛋白含量越高，试剂盒的本底越高。血红蛋白主要是采血过程中红细胞破裂释放而来，新生牛的个体差异以及成品的批间差异等，都会造成牛血清中血红蛋白含量的不同。为了筛选符合诊断试剂要求的牛血清辅料本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛血清中血红蛋白的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：第一步，血红蛋白标准品稀释液的配制以每升纯化水计，加入30g的BSA，0.59g 的NaH2PO4•2H2O，5.8g的Na2HPO4•12H2O，8.0g的NaCl，0.2g的硫柳汞钠盐，配制成稀释液备用；第二步，血红蛋白梯度标准品的配制采用第一步配制的稀释液，按梯度0mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/、200mg/L配制血红蛋白系列标准品；配好后1ml/瓶分装后进行冻干，2~8℃保存；第三步，加样模式和反应模式将标准品取出恢复室温，用纯化水按1ml/瓶进行复溶；取空白酶标板，设置好加...

【技术特征摘要】
1.一种牛血清中血红蛋白的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：第一步，血红蛋白标准品稀释液的配制以每升纯化水计，加入30g的BSA，0.59g的NaH2PO4•2H2O，5.8g的Na2HPO4•12H2O，8.0g的NaCl，0.2g的硫柳汞钠盐，配制成稀释液备用；第二步，血红蛋白梯度标准品的配制采用第一步配制的稀释液，按梯度0mg/L、5mg/L、10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/、200mg/L配制血红蛋白系列标准品；配好后1ml/瓶分装后进行冻干，2~8℃保存；第三步，加样模式和反应模式将标准品取出恢复室温，用纯化水按1ml/瓶进行复溶；取空白酶标板，设置好加样布局，分别加入20ul梯度标准品或待测样本，再加入酶免底物液50ul、酶免显色液50ul进行震荡混匀，室温反应10min，在酶标仪波长630或650...

【专利技术属性】
技术研发人员：王萍，赵巧辉，李桂林，付光宇，吴学炜，
申请(专利权)人：郑州伊美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41