测定糖化血红蛋白的试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种糖化血红蛋白测定试剂盒,该试剂盒包括试剂R1和试剂R2，试剂R1包含胶乳、双缓冲液、表面活性剂；试剂R2包含糖化血红蛋白单克隆抗体、双表面活性剂、缓冲液，该试剂盒测定准确度高、成本低、稳定性好。

Kit for determination of glycosylated hemoglobin and preparation method thereof

The invention relates to the field of biological technology, in particular to a kit for determining glycosylated hemoglobin, which includes reagent R1 and reagent R2. The reagent R1 contains latex, double buffer solution, surface active agent, and reagent R2 contains monoclonal antibodies to glycosylated hemoglobin, double surfactants, and buffer solution. The kit has high accuracy. It has low cost and good stability.

【技术实现步骤摘要】
测定糖化血红蛋白的试剂盒及其制备方法
本专利技术属于糖化血红蛋白检测
，具体涉及一种糖化血红蛋白检测试剂盒。
技术介绍
糖化血红蛋白(HbAlc)是血红蛋白与血液中葡萄糖结合而成的产物，其数值与血糖浓度成正比，且为不可逆的结合，随红细胞消亡而消失(红细胞的生命期120天左右)。由于糖化血红蛋白与红细胞寿命和平均血糖水平相关，其是评价糖尿病患者长期血糖控制较理想的指标，可反映过去2～3个月的平均血糖水平，不受每天血糖波动的影响。与微血管和大血管并发症的发生关系密切。糖化血红蛋白水平升高，糖尿病视网膜病变、肾脏病变、神经病变、心血管事件发生风险均相应增加。糖化血红蛋白对糖尿病发生有较好的预测能力。目前，临床上测定HbA1c的方法有很多，较常用的是HPLC、胶乳免疫比浊法、酶法等。HPLC法是测定HbA1c的金标准，该法快速、准确、简便，但需要特殊的仪器且仪器、试剂昂贵，测试成本较高，很难在基层医院实验室开展。亲和层析法耗时前处理较为麻烦，耗时较长；酶法检测精密度较差；胶乳免疫比浊法不需要特殊仪器，可在生化仪上与其他生化项目一同检测，单位时间内通量大，且测试成本比HPLC法低，适用于批量检测。目前市面上胶乳试剂是传统的三试剂，试剂1为空白胶乳颗粒，试剂2为糖化血红蛋白(HbA1C)的单克隆抗体，试剂3为对应二抗羊抗鼠IgG抗体。因为单抗和二抗形成的免疫复合物长期保存稳定性较差，逐渐失活导致测定信号下降，所以在使用前操作人员需将试剂2和试剂3混合，操作繁琐，且混合后的试剂稳定效期较短。同时，由于胶乳免疫比浊法测定结果是测定HbA1c占总Hb蛋白的含量，因此在检测中重度贫血样本时易受影响，使检测结果偏低。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供了一种双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒及其制备方法，来取代传统的包含三种试剂的检测试剂盒。本专利技术解决了前述操作繁琐和试剂不稳定的问题，以及中重度贫血样本测值偏低的问题。具体而言，本专利技术提供了一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，其包含试剂R1及试剂R2，其中所述试剂R1包含胶乳，缓冲液A，及表面活性剂A；且其中所述所述试剂R2包含糖化血红蛋白抗体，表面活性剂B，及缓冲剂B。在一些实施方案中，缓冲液A包含选自下组的任意二种组分：甘氨酸，硼酸盐，Tris，磷酸盐。优选地，缓冲液A所含组分选自下组：甘氨酸+硼酸盐、甘氨酸+Tris、或甘氨酸+磷酸盐；最优选地，缓冲液A所含组分为甘氨酸+硼酸盐。在一些实施方案中，试剂R1中的甘氨酸浓度为2mM-200mM，优选为50-150mM，最优选为100mM。在一些实施方案中，试剂R1中的硼酸盐浓度为1mM-50mM，优选为10-30mM，最优选为20mM。在一些实施方案中，试剂R1中的胶乳粒径为50nm-200nm。在一个优选实施方案中，所述胶乳的粒径为80nm-150nm，最优选为106nm。在一些实施方案中，所述胶乳的浓度范围为0.2g/L-10g/L，优选地，所述胶乳的浓度范围为0.5g/L-2g/L，最优选为1g/L。在一些实施方案中，试剂R1中的表面活性剂A为吐温系列表面活性剂，优选为吐温20(Tween-20)。优选地，表面活性剂A的浓度为0.01ml/L-1ml/L，优选为0.01ml/L-0.1ml/L，最优选为0.05ml/L。在一些实施方案中，试剂R1进一步包含防腐剂。优选地，试剂R1中的防腐剂可以是Proclin系列防腐剂(例如PC150、PC200、PC300、PC950)、CAA(2-氯乙酰胺)、NaN3、苯酚、IZU(咪唑烷基脲)，优选为Proclin系列防腐剂或NaN3，最优选为PC950。在一些实施方案中，试剂R1中的防腐剂浓度为0.01ml/L-5ml/L，优选为0.2ml/L-2ml/L，最优选为1ml/L。在一些实施方案中，试剂R1的pH值为5-9，例如5.0，5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5，或9.0。优选地，试剂R1的pH值为8-8.5，最优选为8.1。在一些实施方案中，试剂R2中所述表面活性剂B为吐温系列表面活性剂+聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂。在一些实施方案中，所述吐温系列表面活性剂选自下组：吐温20(Tween-20)、吐温21(Tween-21)、吐温40(Tween-40)、吐温60(Tween-60)、吐温61(Tween-61)、吐温80(Tween-80)、吐温81(Tween-81)、吐温85(Tween-85)。在一些优选实施方案中，所述吐温系列表面活性剂是Tween-20或Tween-80，优选为Tween-20。在一些实施方案中，所述聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂可以是聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯十二烷基醚、聚氧乙烯十六烷基醚、或二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚；优选为二苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚。在一些实施方案中，试剂R2中所述吐温系列表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L，优选为0.2ml/L-0.8ml/L，最优选为0.5ml/L。在一些实施方案中，试剂R2中所述聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂的浓度为0.05ml/L-2ml/L，优选为0.2ml/L-0.8ml/L；最优选为0.5ml/L。在一些实施方案中，试剂R2中所述糖化血红蛋白抗体为糖化血红蛋白单克隆抗体(例如多聚单克隆抗体)。在一些实施方案中，所述糖化血红蛋白单克隆抗体可以是鼠抗人或兔抗人单克隆抗体。在一些实施方案中，试剂R2中所述糖化血红蛋白抗体的浓度为0.01-1mg/ml，优选为0.03-0.2mg/ml，最优选为0.1mg/ml。在一些实施方案中，试剂R2中的缓冲液B可以是2-吗啉乙磺酸(MES)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、甘氨酸、硼酸盐、或磷酸盐等。在一个优选实施方案中，缓冲液B是磷酸盐缓冲液。更优选地，所述磷酸盐的浓度为10-200mM，优选为20-80mM，最优选为50mM。在一些实施方案中，试剂R2还包含保护剂。优选地，所述保护剂选自下组：甘露醇、蔗糖、山梨醇、和海藻糖。更优选地，所述保护剂为甘露醇。在一些实施方案中，试剂R2中的保护剂浓度为2ml/L-50ml/L，更优选为5ml/L-30ml/L，最优选为20ml/L。在一些实施方案中，试剂R2还包含蛋白稳定剂。优选地，所述蛋白稳定剂为BSA。在一些实施方案中，试剂R2中的蛋白稳定剂浓度为1g/L-50g/L，优选为1g/L-10g/L，最优选为5g/L。在一些实施方案中，试剂R2还包含无机盐。优选地，所述无机盐为钠盐或钾盐，最优选为NaCl或KCl。在一些实施方案中，试剂R2中的无机盐浓度为1g/L-30g/L，优选为5g/L-15g/L，最优选为9g/L。在一些实施方案中，试剂R2还包含防腐剂。优选地，试剂R2中的防腐剂可以是Proclin系列防腐剂(例如PC150、PC200、PC300、PC950)、CAA、NaN3、苯酚、IZU，优选为IZU。在一些实施方案中，试剂R2中的防腐剂浓度为0.5-5g/L，优选为2-4g/L，最优选为3g/L。在一些实施方案中，试剂R2还包含螯合剂。在一些实施方案中，所述螯合剂选自下组：EDTA.2Na、EDTA.2K、EDTA.4Na，优选为EDTA.2Na。在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，其包含试剂R1及试剂R2，其中所述试剂R1包含胶乳，缓冲液A，及表面活性剂A；且其中所述试剂R2包含糖化血红蛋白抗体，表面活性剂B，及缓冲剂B；其中所述缓冲液A包含选自下组的任意二种组分：甘氨酸，硼酸盐，Tris，磷酸盐，所述表面活性剂B为吐温系列表面活性剂+聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂。

【技术特征摘要】
1.一种用于测定糖化血红蛋白的试剂盒，其包含试剂R1及试剂R2，其中所述试剂R1包含胶乳，缓冲液A，及表面活性剂A；且其中所述试剂R2包含糖化血红蛋白抗体，表面活性剂B，及缓冲剂B；其中所述缓冲液A包含选自下组的任意二种组分：甘氨酸，硼酸盐，Tris，磷酸盐，所述表面活性剂B为吐温系列表面活性剂+聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂。2.权利要求1的试剂盒，其中所述试剂R1的pH值为5-9。3.权利要求1或2的试剂盒，其中所述吐温系列表面活性剂选自下组：吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81、和吐温85。4.权利要求1或2的试剂盒，其中所述聚氧乙烯烷基醚型非离子表面活性剂选自下组：聚氧乙烯烷...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘萍萍，耿英利，黎明，吴昌英，龙腾镶，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51