【技术实现步骤摘要】
一种衍生化的含游离氨基的硫酸类肝素二糖的分离分析方法
本专利技术属于药物检测
，具体涉及一种衍生化的含游离氨基的硫酸类肝素二糖的分离分析方法。
技术介绍
肝素和硫酸类肝素是线性糖胺聚糖，由于肝素具有较强的抗凝作用，被广泛运用于治疗血栓栓塞性疾病、心肌梗死等疾病。肝素中不同的硫酸化、乙酰化和游离氨基取代模式形成了不同的二糖单元，赋予了肝素和硫酸类肝素众多的生物功能，参与了血管形成、血液凝固、细胞粘附及增生和肿瘤转移等生命活动。肝素和硫酸类肝素由重复的二糖单元组成，二糖单元由己糖醛酸和葡萄糖胺以1-4糖苷键连接而成，其中十二种代表性的二糖单元中存在常规的N-硫酸化葡萄糖胺、N-乙酰化葡萄糖胺和稀有的含游离氨基的葡萄糖胺残基。最近有研究发现，含游离氨基的硫酸类肝素在乳腺癌细胞中的浓度相当高，可抑制乙酰肝素酶的活性。利用人工化学合成含游离氨基的葡萄糖胺残基的四糖进行体外实验，发现它通过竞争性抑制乙酰肝素酶的活性从而进一步抑制了乳腺癌细胞的转移[S.Nadanaka,etal.J.Biol.Chem.,2014，289:15231-43]。此外有报道指出，含游离氨基的...
【技术保护点】
1.一种衍生化的含游离氨基的硫酸类肝素二糖的分离分析方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）将铵盐试剂溶解于去离子水中，用pH调节试剂调pH值至5.2‑6.0，制得浓度为20mM‑80mM的流动相A；将醇类试剂作为流动相B；（2）将待测的硫酸类肝素二糖各自溶解于去离子水中，配制成浓度为1mg/mL的二糖溶液。取等量的12种二糖，配制成二糖混合物，冻干；（3）将荧光疏水性的标记试剂溶于乙酸：二甲亚砜（v/v）=3：17的溶剂中，制得浓度为0.05‑0.2mol/L的标记试剂溶液；将氰基硼氢化钠溶于去离子水中，制得浓度为0.5‑2.0mol/L的氰基硼氢化钠溶液；（4）用（3）中...
【技术特征摘要】
1.一种衍生化的含游离氨基的硫酸类肝素二糖的分离分析方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）将铵盐试剂溶解于去离子水中，用pH调节试剂调pH值至5.2-6.0，制得浓度为20mM-80mM的流动相A；将醇类试剂作为流动相B；（2）将待测的硫酸类肝素二糖各自溶解于去离子水中，配制成浓度为1mg/mL的二糖溶液。取等量的12种二糖，配制成二糖混合物，冻干；（3）将荧光疏水性的标记试剂溶于乙酸：二甲亚砜（v/v）=3：17的溶剂中，制得浓度为0.05-0.2mol/L的标记试剂溶液；将氰基硼氢化钠溶于去离子水中，制得浓度为0.5-2.0mol/L的氰基硼氢化钠溶液；（4）用（3）中的标记溶液标记（2）中的干燥混合二糖，反应20min后，加入氰基硼氢化钠溶液，混合均匀，30-50℃水浴反应2-6小时；用50%(v/v)的二甲亚砜将上述标记的二糖混合物稀释到20-40ng/μL的二糖浓度，配制成多组不同二糖浓度的待测二糖溶液；（5）将标记后的多组不同浓度的硫酸类肝素标准二糖分别过C18色谱柱：流速为0.3...
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