本发明专利技术提供一种鉴定缺血性卒中的病因亚型的microRNA标志物组合，包括miR‑125b、miR‑125a、miR‑let‑7b、miR‑let‑7e、miR‑7‑2‑3p和miR‑1908中的至少1种，及其在制备用于鉴定缺血性卒中的病因亚型的试剂中的用途和在制备用于预测受试者卒中风险的试剂中的用途。本发明专利技术还提供一种试剂盒，包括能够检测所述标志物组合的含量的试剂。使用本发明专利技术的上述microRNA标志物组合，对缺血性卒中进行分型具有操作简单安全，高灵敏性，高特异性以及易于大量分型的特点。
【技术实现步骤摘要】
一种鉴定缺血性卒中病因亚型的microRNA标志物组合及其用途
本专利技术属于精准诊断领域，具体地涉及一种缺血性卒中的病因亚型的microRNA标志物及其应用。
技术介绍
缺血性卒中(IS)是发达国家死亡和长期残疾的主要原因，约80％的卒中是缺血性的。在中国，每年有250万人卒中和100万人因卒中相关原因死亡。缺血性卒中是一种高度异质性疾病。绝大多数急性冠状动脉综合征是由于大中动脉粥样硬化。而缺血性卒中也可能是由于其他病因，包括颅内小血管疾病、心源性栓塞及血液疾病等。缺血性卒中的预后和处理与缺血性损伤的具体机制直接相关。比较特定缺血性卒中机制的临床特征、功能结果和死亡率可能使临床医生能够识别那些风险较高的患者，并更明确地评估治疗策略。对急性脑梗死患者亚型的正确分类对于早期治疗和预测预后至关重要。MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码的小分子RNA(约22个核苷酸长度)，是转录后水平强有力的基因表达调控因子。miRNA参与大量的生理和病理过程，如神经元死亡、变性或缺血性卒中。例如，miR-146aG等位基因和miR-146aG/-149T/-196a2C/-499G等位基因组合与缺血性卒中发病相关。MicroRNA-195通过其在大鼠中的抗淀粉样变性作用来防止慢性脑灌注不足导致的痴呆。Jeyaseelan等首次报道了miRNA参与调节SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAo)相关发病机制，表明miR-30a-3p在24小时再灌注的MCAo大鼠脑中下调而在随后的48小时再灌注期间上调。最近的研究表明，青年脑卒中患者内皮特异性miRNA-miR-126下调。此外，let-7激活导致中枢神经系统损伤的Toll样受体7。然而，血浆循环miRNA的表达尚未在不同的缺血性卒中亚型中进行评估。
技术实现思路
为了解决上述技术问题的至少一个，专利技术人进行了一项系统性基因阵列研究，研究了不同缺血性卒中亚型，发现细胞外循环miRNA在缺血性卒中亚型中差异表达，缺血性卒中亚型[CARD，LAA，LAC和SUE]影响生物通路，专利技术人进一步验证了不同组缺血性卒中亚型中的几种血清miRNA，并且这些循环miRNA在卒中前和卒中后进一步检测到差异表达，从而完成本专利技术。为此，本专利技术的一方面提供一种鉴定缺血性卒中的病因亚型的microRNA标志物组合，包括miR-125b、miR-125a、miR-let-7b、miR-let-7e、miR-7-2-3p和miR-1908中的至少1种，优选地，包括至少2种、3种、4种、5种或6种。在本专利技术的实施方案中，所述缺血性卒中的病因亚型包括选自心源性栓塞(CARD)、大动脉粥样硬化(LAA)、腔隙性脑梗死(LAC)和未确定病因学卒中(SUE)中的至少1种。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述缺血性卒中的病因亚型包括为CARD，所述microRNA标志物组合包括miR-125b、miR-125a、miR-let-7b、miR-let-7e中的至少1种，优选地，包括至少2种、3种或4种，更优选地，包括4种。在本专利技术的另一个具体实施方案中，所述缺血性卒中的病因亚型为LAA、LAC和SUE中的至少1种，优选地，包括至少2种或3种，更优选地，包括至少2种，最优选地，所述缺血性卒中的病因亚型为LAA和LAC，所述microRNA标志物组合包括miR-7-2-3p和miR-1908中的至少1种，优选地，包括2种。本专利技术的第二方面提供本专利技术第一方面所述的microRNA标志物组合在制备用于鉴定缺血性卒中的病因亚型的试剂中的用途。在本专利技术的实施方案中，所述试剂通过检测受试者组织中所述microRNA标志物组合的含量来进行缺血性卒中分型。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述microRNA标志物为miR-125b、miR-125a、miR-let-7b和miR-let-7e，如果受试者组织中miR-125b、miR-125a、miR-let-7b和miR-let-7e的水平比对照水平高，那么所述受试者为CARD型。在本专利技术的另外一个具体实施方案中，所述microRNA标志物为miR-7-2-3p或miR-1908，如果受试者组织中miR-7-2-3p的水平比对照水平高，或者miR-1908的水平比对照水平低，那么所述受试者为LAA、LAC或SUE型。根据本专利技术，上述用途使用定量PCR的方法或者其他方法来检测受试者组织中所述microRNA标志物组合的含量。本专利技术的第三方面提供一种缺血性卒中分型的试剂盒，包括检测受试者组织中权利要求1所述microRNA标志物组合的含量的试剂，优选地，所述试剂包括用于扩增所述microRNA标志物组合的引物。更优选地，用于扩增miR-125b、miR-125a、miR-let-7b、miR-let-7e、miR-7-2-3p和miR-1908的引物序列分别SEQIDNO:1-6所示。进一步地，所述试剂盒还包括：(1)RNA提取试剂；(2)反转录试剂；(3)定量PCR试剂。在本专利技术的实施方案中，所述RNA提取试剂进一步包括RNA加PolyA的试剂。本专利技术的第四方面提供本专利技术第一方面所述的microRNA标志物组合在制备用于预测受试者卒中风险的试剂中的用途。在本专利技术的实施方案中，所述试剂通过检测受试者组织中所述microRNA标志物组合的含量来进行预测受试者卒中风险。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述microRNA标志物为miR-125b、miR-125a、miR-let-7b和miR-let-7e，如果受试者组织中miR-125b、miR-125a、miR-let-7b和miR-let-7e的水平升高，那么所述受试者具有成为CARD型卒中的风险。在本专利技术的另一个具体实施方案中，所述microRNA标志物为miR-7-2-3p或miR-1908，如果受试者组织中miR-7-2-3p的水平比对照升高，或者miR-1908的水平下降，那么所述受试者具有成为LAA或LAC型卒中的风险。本专利技术的有益效果使用本专利技术的microRNA标志物组合对缺血性卒中进行分型具有操作简单安全，高灵敏性，高特异性以及易于大量分型的特点。本专利技术检测结果将有益于缺血性卒中用药方案选择以及危险因素控制。附图说明图1示出了不同亚型的受试者差异表达的microRNA。图2示出了基于microRNA谱的主成分分析。图3示出了microRNA标志物在不同亚型中的表达水平。图4示出了microRNA标志物在卒中前后表达差异。具体实施方式如本专利技术所述，microRNA或者miRNA具有其在本领域中的普通含义。也就是说，microRNA表示来自遗传基因位点的RNA分子，其从可以形成局部RNA前体microRNA结构的转录物加工而来。成熟microRNA通常长度为20、21、22、23、24、或25个核苷酸，尽管其它数目的核苷酸也可存在，例如18、19、26、27或28个核苷酸。本专利技术所述的缺血性卒中亚型的分类对于决定治疗方案和预测结局很重要。两种分类系统广泛用于临床试验：牛津郡社区卒中项目(OCPS)和TOAST。专利技术人在本专利技术中使用了TOAST，因为它具有较高的观察者间一致性和在病因诊断方面的优势。一名研究神经病学专家根据TOAS本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鉴定缺血性卒中的病因亚型的microRNA标志物组合，其特征在于，所述microRNA标志物组合包括miR‑125b、miR‑125a、miR‑let‑7b、miR‑let‑7e、miR‑7‑2‑3p和miR‑1908中的至少1种，优选地，包括至少2种、3种、4种、5种或6种。
【技术特征摘要】
1.一种鉴定缺血性卒中的病因亚型的microRNA标志物组合，其特征在于，所述microRNA标志物组合包括miR-125b、miR-125a、miR-let-7b、miR-let-7e、miR-7-2-3p和miR-1908中的至少1种，优选地，包括至少2种、3种、4种、5种或6种。2.根据权利要求1所述的microRNA标志物组合，其特征在于，所述缺血性卒中的病因亚型包括选自心源性栓塞(CARD)、大动脉粥样硬化(LAA)、腔隙性脑梗死(LAC)和未确定病因学卒中(SUE)中的至少1种，任选地，所述缺血性卒中的病因亚型包括为CARD，所述microRNA标志物组合包括miR-125b、miR-125a、miR-let-7b、miR-let-7e中的至少1种，优选地，包括至少2种、3种或4种，更优选地，包括4种；任选地，所述缺血性卒中的病因亚型为LAA、LAC和SUE中的至少1种，优选地，包括至少2种或3种，更优选地，包括至少2种，最优选地，所述缺血性卒中的病因亚型为LAA和LAC，所述microRNA标志物组合包括miR-7-2-3p和miR-1908中的至少1种，优选地，包括2种。3.权利要求1所述的microRNA标志物组合在制备用于鉴定缺血性卒中的病因亚型的试剂中的用途。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂通过检测受试者组织中所述microRNA标志物组合的含量来进行缺血性卒中分型，任选地，所述microRNA标志物为miR-125b、miR-125a、miR-let-7b和miR-let-7e，如果受试者组织中miR-125b、miR-125a、miR-let-7b和miR-let-7e的水平比对照水平高，那么所述受试者为CARD型；任选地，所述microRNA标志物为miR-7-2-3p或miR-1908...
【专利技术属性】
技术研发人员：桂雅星，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。