一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库的方法技术方案

本发明专利技术属生物技术领域及基因工程技术领域，涉及抗体制备技术，具体涉及一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库从而筛选高亲和力抗体的方法。该方法利用CRISPR系统的剪切及后续NHEJ修复的途径，实现对抗体基因的可变区区域产生蛋白质序列的多样性，从而产生新抗体文库，为后续抗体筛选做准备。本发明专利技术方法比以往用易错pcr来形成抗体库及定向突变碱基替代等方法改进抗体库相比，产生的抗体库容大且多样化，打破抗体筛选时库容的限制，本方法通过调节CRISPR的表达，可循环产生新文库直至筛选出理想抗体，操作周期短，成本低，方便灵活。

【技术实现步骤摘要】
一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库的方法
本专利技术属生物
及基因工程
，涉及抗体制备技术，具体涉及一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库从而筛选高亲和力抗体的方法。
技术介绍
现有技术公开了Kohler和Milstein专利技术了单克隆抗体技术(1975年)，并在1984年获得了诺贝尔奖。因此，抗体对抗原的结合能力，使其在疾病诊断的免疫防治中具有重要意义。实践证实，抗体尤其是单克隆抗体已成为目前生物医药产业最具前景和应用价值的领域。现有技术公开了早年单抗的制备是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交形成的杂交瘤细胞产生的，其重链和轻链所形成的结构域可以识别和结合特异抗原。1998年，全球第一个人源化单克隆抗体帕利珠单抗(Palivizumab,商品名:Synagis),被美国食品药品管理局FDA批准上市,截至目前,FDA已批准上市了66个抗体药物。克隆抗体药物以其高特异性、有效性和安全性正在发展成为国际药品市场上一大类新型诊断和治疗药物，日益成为癌症及其他疾病治疗市场的新宠。因此，改进筛选和制备高效安全的单克隆抗体技术意义重大。随着基因工程技术的迅速发展，治疗性单抗经历本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建质粒，包括选择性表达含有CRISPR系统的质粒及选择性表达抗体基因的展示质粒；(2)转化质粒以及阳性克隆的选择，得到含有上述质粒的细胞株；(3)诱导CRISPR系统对抗体序列的剪切及修复，获得多样性新抗体文库；(4)诱导新抗体文库的表达及展示；(5)抗体的富集及高亲和力抗体的筛选。

【技术特征摘要】
1.一种利用CRISPR系统产生多样性抗体文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建质粒，包括选择性表达含有CRISPR系统的质粒及选择性表达抗体基因的展示质粒；(2)转化质粒以及阳性克隆的选择，得到含有上述质粒的细胞株；(3)诱导CRISPR系统对抗体序列的剪切及修复，获得多样性新抗体文库；(4)诱导新抗体文库的表达及展示；(5)抗体的富集及高亲和力抗体的筛选。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的选择性表达含CRISPR系统的质粒(简称CRISPR质粒)是指利用四环素系统或其它系统调节CAS9或sgRNA表达的质粒；sgRNA表达质粒根据初始抗体可变区特点设计多个sgRNA靶向序列；所述的选择性表达含有抗体基因的展示质粒是指利用半乳糖诱导或其他诱导抗体基因表达并展示在细胞表面的质粒，选自抗体展示质粒；所述的抗体基因是指Fab抗体、scFv抗体或其它用于筛选抗体的抗体基因序列，选自非免疫抗体文库或诱变后的抗体文库。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的细胞株是指与抗体展示质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘贇，徐值姣，应天雷，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31