基于药物预处理的间充质干细胞来源外泌体的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种基于药物预处理的间充质干细胞来源外泌体的制备方法。本发明专利技术的间充质干细胞来源外泌体的制备方法包括：采用他汀类药物预处理间充质干细胞，并培养处理后的间充质干细胞以收集其分泌的外泌体。本发明专利技术还提供了他汀类药物在制备促进间充质干细胞的抗凋亡能力和/或促归巢能力的制剂中的应用，还提供了他汀类药物在制备促进间充质干细胞分泌具有心梗微环境改善作用和/或心肌修复能力的外泌体的制剂中的应用。

【技术实现步骤摘要】
基于药物预处理的间充质干细胞来源外泌体的制备方法
本专利技术是关于一种基于药物预处理的间充质干细胞来源外泌体的制备方法，具体是关于一种基于他汀类药物预处理的高效间充质干细胞来源外泌体的制备方法。
技术介绍
WHO统计数据表明：2016年心血管疾病是全球第一大死因(约1760万人，32.2％)，其中有948万人死于缺血性心脏病(17.3％)(CollaboratorsGM.Global,regional,andnationalunder-5mortality,adultmortality,age-specificmortality,andlifeexpectancy,1970–2016:asystematicanalysisfortheGlobalBurdenofDiseaseStudy2016.TheLancet2017；390(10100):1084-1150；CollaboratorsGCOD.Global,regional,andnationalage-sexspecificmortalityfor264causesofdeath,1980–2016:asystematicanalysisfortheGlobalBurdenofDiseaseStudy2016.TheLancet2017；390(10100):1151-1210)。急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction,AMI)导致大量心肌缺血坏死，继而被瘢痕组织替代引发心衰和死亡。现有治疗手段无法有效再生和修复心肌。近年来干细胞移植治疗，尤其是间充质干细胞(MSCs,mesenchymalstemcells)，例如骨髓间充质干细胞(bonemarrow-mesenchymalstemcells,BM-MSCs)，移植治疗AMI被寄予厚望(OrlicD,KajsturaJ,ChimentiS,JakoniukI,AndersonSM,LiB,PickelJ,McKayR,Nadal-GinardB,BodineDMandothers.Bonemarrowcellsregenerateinfarctedmyocardium.Nature2001；410(6829):701-705；FisherSA,DoreeC,MathurA,Martin-RendonE.Meta-AnalysisofCellTherapyTrialsforPatientsWithHeartFailure.CirculationResearch2015；116(8):1361-1377；AfzalMR,SamantaA,ShahZI,JeevananthamV,Abdel-LatifA,Zuba-SurmaEK,DawnB.AdultBoneMarrowCellTherapyforIschemicHeartDisease:EvidenceandInsightsFromRandomizedControlledTrials.CircRes2015；117(6):558-575)。然而临床研究表明，间充质干细胞虽能一定程度通过旁分泌保护作用改善梗死后心功能，但效果并不显著。进一步研究表明，其发挥旁分泌保护作用的主要机制是通过分泌一种细胞外囊泡结构——外泌体(exosome)实现的(MakridakisM,RoubelakisMG,VlahouA.Stemcells:insightsintothesecretome.BiochimBiophysActa2013；1834(11):2380-2384；HuangP,TianX,LiQ,YangY.Newstrategiesforimprovingstemcelltherapyinischemicheartdisease.HeartFailRev2016；21(6):737-752；LaiRC,ArslanF,LeeMM,SzeNS,ChooA,ChenTS,Salto-TellezM,TimmersL,LeeCN,ElORandothers.ExosomesecretedbyMSCreducesmyocardialischemia/reperfusioninjury.StemCellRes2010；4(3):214-222)。外泌体具有来源广、稳定、无免疫原性等优点，且BM-MSCs来源的外泌体(MSC-Exo)可改善心梗微环境，因此，有望成为新一代的心肌修复产品(LamichhaneTN,SokicS,SchardtJS,RaikerRS,LinJW,JaySM.EmergingRolesforExtracellularVesiclesinTissueEngineeringandRegenerativeMedicine.TissueEngineeringPartB:Reviews2015；21(1):45-54)。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种高效间充质干细胞来源外泌体的制备方法。本专利技术的研究发现，他汀类药物例如阿托伐他汀(Atorvastatin,ATV)预处理间充质干细胞，可显著提高间充质干细胞的抗凋亡能力和促归巢能力，制备出具有显著心梗微环境改善作用和高效心肌修复能力的干细胞来源外泌体。一方面，本专利技术提供了一种间充质干细胞来源外泌体的制备方法，该方法包括：采用他汀类药物预处理间充质干细胞，并培养处理后的间充质干细胞以收集其分泌的外泌体。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的间充质干细胞来源外泌体的制备方法包括：在间充质干细胞的培养基中加入他汀类药物预处理12-24小时后，更换细胞培养基为无外泌体的完全培养基继续培养；48小时后收集条件培养基并利用超速离心法分离得到经他汀类药物预处理间充质干细胞分泌的外泌体。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的间充质干细胞来源外泌体的制备方法中，所述超速离心法包括步骤：收集条件培养基后，依次离心去除细胞、离心去除细胞碎片、高速离心去除大囊泡，然后超速离心收取沉淀并重悬后，再次超速离心获得外泌体；在本专利技术的一优选具体实施方案中，收集条件培养基后，300g离心10min去除细胞；2000g离心20min去除细胞碎片；16500g高速离心30min去除大囊泡；120000g超速离心70min收取沉淀并重悬后，再次120000g超速离心70min获得外泌体。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的间充质干细胞来源外泌体的制备方法中，所述他汀类药物包括阿托伐他汀。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的间充质干细胞来源外泌体的制备方法中，所述间充质干细胞包括骨髓间充质干细胞或脂肪间充质干细胞。另一方面，本专利技术还提供了按照本专利技术所述方法制备得到的外泌体。另一方面，本专利技术还提供了他汀类药物在制备促进间充质干细胞的抗凋亡能力和/或促归巢能力的制剂中的应用。另一方面，本专利技术还提供了他汀类药物在制备促进间充质干细胞分泌具有心梗微环境改善作用和/或心肌修复能力的外泌体的制剂中的应用。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述他汀类药物包括阿托伐他汀；优选地，利用1μM他汀类药物预处理间充质干细胞24小时。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述间充质干细胞包括骨髓间充质干细胞或脂肪间充质干细胞。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞来源外泌体的制备方法，该方法包括：采用他汀类药物预处理间充质干细胞，并培养处理后的间充质干细胞以收集其分泌的外泌体。

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞来源外泌体的制备方法，该方法包括：采用他汀类药物预处理间充质干细胞，并培养处理后的间充质干细胞以收集其分泌的外泌体。2.根据权利要求1所述的方法，该方法包括：在间充质干细胞的培养基中加入他汀类药物预处理12-24小时后，更换细胞培养基为无外泌体的完全培养基继续培养；48小时后收集条件培养基并利用超速离心法分离得到经他汀类药物预处理间充质干细胞分泌的外泌体。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述超速离心法包括步骤：收集条件培养基后，300g离心10min去除细胞；2000g离心20min去除细胞碎片；16500g高速离心30min去除大囊泡；120000g超速离心70min收取沉淀并重悬后，再次120000g超速离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨跃进，黄沛森，陈桂浩，
申请(专利权)人：中国医学科学院阜外医院，
类型：发明
国别省市：北京,11