异克舒令在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了异克舒令在制备预防或治疗流感病毒感染药物中的应用。申请人在人肺上皮细胞系A549和人单核细胞系U937上检测了异克舒令对细胞的毒性，又在完全无毒性的浓度范围内测定了异克舒令在两种细胞系中的抗病毒活性，结果显示这种小分子化合物具有显著的抗病毒活性，且抗病毒作用呈剂量依赖效应。在致死性小鼠流感感染模型中，使用异克舒令治疗感染小鼠，可以有效降低感染小鼠肺洗液中的病毒滴度、延缓小鼠体重下降速度、延长小鼠存活时间并提高小鼠存活率。因此，本发明专利技术披露的异克舒令是一种新型抗流感病毒药物，具备安全性好、选择指数高且动物模型实验有效等优点，可以用于开发预防或治疗流感病毒感染的药物，具有广阔的应用前景。

Application of isksulurin in the preparation of drugs for treatment or prevention of influenza virus infection

The invention discloses the application of isksulin in the preparation of medicine for preventing or treating influenza virus infection. The applicant tested the cytotoxicity of isokesulin on human pulmonary epithelial cell line A549 and human monocyte cell line U937. The antiviral activity of isokesulin in two cell lines was also determined in a completely non-toxic concentration range. The results showed that this small molecule compound had significant antiviral activity and showed antiviral activity. Dose dependent effect. In the model of lethal influenza infection in mice, the use of Ikeshuling in the treatment of infected mice can effectively reduce the titer of virus in the lung lavage of infected mice, delay the rate of weight loss in mice, prolong the survival time of mice and improve the survival rate of mice. Therefore, the Ikeshulin disclosed by the invention is a new type of anti-influenza virus drug, which has the advantages of good safety, high selectivity index and effective animal model experiment. It can be used to develop drugs for preventing or treating influenza virus infection, and has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
异克舒令在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用
本专利技术属于医药
，主要涉及异克舒令在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用。
技术介绍
流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，流感病毒属。根据病毒粒子核蛋白(NP)和基质蛋白(M)的抗原特性及基因特性的不同，流感病毒分为A、B、C三型，也称甲、乙、丙三型。A型流感病毒全基因组由8条大小不等的单股负链RNA组成，分别以节段1至节段8命名。病毒基因组全长约13.6kb，编码10种结构蛋白(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M1、M2、PB1-F2和NS2/NEP)和非结构蛋白(NS1)。根据病毒粒子表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的不同，A型流感病毒可进一步分为17个H(H1-H17)和10个N(N1-N10)亚型。人流感病毒主要是H1,H2和H3亚型。而目前危害严重的高致病性禽流感多为H5、H7和H9亚型，其中以H5N1亚型致死率最高。B型流感病毒常引起流感局部流行，不引起世界性流感大爆发，仅在人和海豹中发现。C型流感病毒多以散在形式存在，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流感流行，可感染人类和猪。流感病毒自20世纪初发现以来已在全球范围内造成五次大流行，十年左右会产生一次暴发流行，在全球范围内造成了巨大的损失。流感流行每年可导25万～50万例死亡，300万～500万重病例，全球约共有5～15％的人被感染。接种疫苗和使用抗病毒药物是应对流感大流行的重要手段，然而由于流感病毒抗原变异能力强，在大流行前基本上不可能大规模生产疫苗。目前，经美国食品和药物管理局(FDA)批准正式上市的抗流感病流感病毒有预防和治疗作用，研究表明此类药物具有神经毒性等毒副作用，而且由于耐药株的普遍存在，所以CDC建议此类药物不再用于预防流感病毒感染。(2)神经氨酸酶抑制剂，此类药的代表是奥斯他韦和扎拉米韦。此类药物对所有已知的人流感病毒及高致病性禽流感病毒均有效。但是近年来关于奥斯他韦的耐药株不断有报道。因此，研究并开发新型抗流感病毒药物有重要意义异克舒令(Isoxsuprine)，又称苯氧丙酚胺，是一类血管扩张药，用于治疗脑血管和外周血管疾病，也用于防止新生儿早产。其药理作用表现为阻断a胆碱能受体及激动β胆碱能受体的作用，也具有直接舒张血管平滑肌及子宫平滑肌的作用。故可舒张脑血管、骨骼肌血管及皮肤血管，也有正性肌力效应。但到目前为止，并未发现任何关于异克舒令抗流感病毒的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，提供了异克舒令或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防流感病毒感染药物中的应用，从而为临床上流感的治疗提供一种安全有效的小分子化合物。异克舒令在无毒性范围内能够有效地抑制流感病毒的复制，可进一步开发为治疗或预防流感病毒感染疾病的药物，具有广泛的应用前景。异克舒令的英文名为Isoxsuprine，化学名为苯氧丙酚胺，具有结构式Ⅰ所示的结构：为了实现上述的目的，本专利技术采用的技术方案是：异克舒令或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防流感病毒感染药物中的应用：1在体外细胞流感感染模型中评价异克舒令的毒性、抗病毒活性并计算其选择指数，其步骤如下：(1)将人肺泡巨噬细胞系A549和单核细胞系U937以合适密度铺至96孔板中，若要检测抗病毒效果，则同时感染合适浓度的流感H1N1病毒(2)同时加入用培养基稀释成不同浓度梯度的异克舒令，培养48h。(3)检测药物处理组与未处理组的细胞活力，以检测异克舒令的细胞毒性。(4)检测药物处理组与未处理组上清中流感病毒神经氨酸酶活性，以评估异克舒令抗病毒活性。(5)计算异克舒令在两种细胞系上的选择指数。2在致死性动物流感感染模型中评价异克舒令在动物活体内的抗病毒效果，其步骤如下(1)建立致死性小鼠流感感染动物模型(2)通过腹腔给药的方式用异克舒令治疗感染小鼠，连续七天，每天两次(3)感染后第三天，即病毒复制高峰期，取对照组与药物处理组小鼠肺灌洗液，检测其中流感病毒滴度(4)每天记录小鼠体重，死亡率，并绘制体重变化曲线和小鼠存活率曲线(5)以感染后小鼠体重变化、存活率、肺灌洗液中病毒滴度来评价异克舒令效果。所述的流感病毒包括但不限于：甲型流感病毒H1N1亚型(A/PuertoRico/8/1934)、H3N2亚型(A/Human/Hubei/3/2005)、H7N8亚型(A/Duck/Hubei/216/1983)以及B型流感病毒(B/Human/Hubei/1/2007)。本专利技术的保护范围还包括：异克舒令或其药学上可接受的盐在制备体外抑制流感病毒复制药物中的应用；异克舒令或其药学上可接受的盐作为唯一有效成分在制备治疗或预防流感病毒感染药物中的应用；异克舒令或其药学上可接受的盐在制备治疗小鼠流感病毒感染药物中的应用。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果：1异克舒令是小分子化合物，其在A549细胞和U937细胞中CC50(半数致死浓度)均大于1000.0μM。异克舒令在两种细胞系上能够剂量依赖的抑制流感病毒复制，其在U937细胞中的EC50(半数抑制浓度)仅为2.4μM，在A549上的EC50为3.3μM。通过计算，异克舒令的选择指数(SI)在两种细胞系上均大于300，说明其具有安全高效的特点。2异克舒令在小鼠致死性流感感染模型中有效果，可以显著降低小鼠体重下降程度，降低小鼠肺洗液中的病毒滴度，提高小鼠的存活时间和最终生存率。这使得异克舒令具有非常大的临床治疗潜力。3异克舒令已经上市多年，安全性良好，且具有大量的临床实验数据，若将其作为流感治疗用药，可显著降低临床试验时间，节省大量成本。附图说明图1异克舒令在U937中的毒性及抗病毒效果；图1中A为不同浓度异克舒令处理后U937细胞活力；图1中B为不同浓度异克舒令在U937上对H1N1流感病毒的抑制率。图2异克舒令在A549中的毒性及抗病毒效果；图2中A为不同浓度异克舒令处理后A549细胞活力；图2中B为不同浓度异克舒令在A549上对H1N1流感病毒的抑制率。图3异克舒令在小鼠致死性流感感染模型中的效果；图3中A为小鼠体重变化曲线图3中B为小鼠存活率曲线图4小鼠感染后第三天肺洗液中病毒滴度。具体实施方式为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合具体实施方法对本
技术实现思路
作进一步说明，但本专利技术的保护内容不局限于以下实施例。本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为常规技术；所用试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。目前，抗流感病毒药物评价模型主要分为体外模型(invitromodel)和体内模型(invivomodel)。体外模型主要使用各种流感敏感细胞系或流感病理相关细胞系对药物进行评价，其优点在于可提供大量遗传性状相同的细胞为研究对象，操作方便，可消除其它外界因素的影响，并可以检测药物毒性、有效浓度和选择指数指数，为后期机理研究提供更多基础。体内模型一般使用各种模式动物感染模型，通过药物处理后的各种表型指标来衡量药物在活体动物内的整体效果。其优点是可对候选药物在活体内的效果进行真实、系统的评价。本专利技术采用与流感病理密切相关的人源肺上皮细胞系A549和人单核细胞系U937对异克舒令的体外抗流感效果进行定量分析，并计算其选择指数。随后，采用致死性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.异克舒令或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.异克舒令或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防流感病毒感染的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的流感病毒为甲型流感病毒或乙型流感病毒。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：异克舒令作为药物活性成分，制成任何一种药学上可接受的剂型。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、注射剂。5.根据权利要求1所述的应用，所述的流感病毒为A型流感病毒H1N1亚型（A/Puerto...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈绪林，刘歌，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42