一种提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法技术

提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法：用六种含有碳纳米管和石墨烯量子点的培养基依次对早梨茎尖进行处理，可显著提高茎尖的冻后成活率。本发明专利技术与现有技术比较，早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果好、成活率高、茎尖易再生。

A method for improving the cryopreservation effect of early pear pear shoot tip droplet vitrification

To improve the cryopreservation effect of shoot tip droplets of Zaoli Pear by vitrification, six kinds of medium containing carbon nanotubes and graphene quantum dots were used to treat the shoot tip of Zaoli pear successively, which could significantly improve the survival rate of shoot tip after freezing. Compared with the prior art, the vitrification method for shoot tip droplets of early pear has good cryopreservation effect, high survival rate and easy regeneration of shoot tip.

【技术实现步骤摘要】
一种提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法
：本专利技术涉及一种提高植物茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法，确切地说是一种提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法。
技术介绍
：上饶早梨是江西上饶县花厅和田墩等镇的优良地方早熟梨种质资源。上饶早梨的主栽品种一般有两个，即“六月雪”和“黄皮消”，其中“六月雪”品质更胜一筹，是上饶早梨最优良品种，成熟早，且表皮细薄、肉质脆嫩、核少汁多、味道香甜，清朝曾被荐为贡品。超低温保存是离体保存与低温生物学相结合的产物，是指-80℃以下的极低温度保存种质资源的一整套生物学技术。超低温保存是一种安全、有效的种质资源保存途径，尤其对于无性繁殖及顽拗性种子植物的保存，是唯一长期保存的途径。小滴玻璃化法兼容了传统滴冻法和玻璃化法的优点，最早的滴冻法是由Kartha等(1982)首次提出，并应用于木薯的茎尖超低温保存，其将茎尖置于玻璃化液滴中，再于程序化降温仪中逐步降温。小滴玻璃化是在此基础上并结合传统玻璃化法的主要程序，即用装载液及玻璃化液对材料进行处理，而后将材料放在含有玻璃化液滴的铝箔纸上并投入液氮冻存的一种超低温保存法。目前该方法已成功应用在山药、苹果和马铃薯等多种植物上。但小滴玻璃化法超低温保存也存在成活率低、保存效果不佳等问题。针对这些问题，本专利技术开发了一种提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法，可为上饶早梨种质资源的长期保存提供技术基础。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供一种成活率高、茎尖易再生的提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法。实现本专利技术目的的技术方案是，一种提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法，其特征在于有以下步骤：(1)在超净工作台内，切取早梨茎尖并将其接种于液体培养基一：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+0.3M蔗糖，进行常规预培养；(2)将茎尖转移到液体培养基二：MS+2M甘油+0.4M蔗糖+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规装载；(3)将茎尖转移到液体培养基三：PVS2+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规脱水；(4)将茎尖转移到铝箔条上液体培养基四：PVS2+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规小滴玻璃化法液氮保存；(5)液氮保存后，将铝箔条取出，经过常规化冻后转移到液体培养基五：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+1.2M蔗糖，进行常规洗涤；(6)将茎尖转移到固体再生培养基六：MS+1-2mg/L噻苯隆+0.1-0.3mg/LNAA+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，可显著提高茎尖的冻后成活率。具体实施方式：结合下述实施例对本专利技术作进一步说明：(1)第一次处理在超净工作台内，切取早梨茎尖并将其接种于液体培养基一：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+0.3M蔗糖，进行常规预培养；(2)第二次处理将茎尖转移到液体培养基二：MS+2M甘油+0.4M蔗糖+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规装载；(3)第三次处理将茎尖转移到液体培养基三：PVS2+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规脱水；(4)第四次处理将茎尖转移到铝箔条上液体培养基四：PVS2+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规小滴玻璃化法液氮保存；(5)第五次处理液氮保存后，将铝箔条取出，经过常规化冻后转移到液体培养基五：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+1.2M蔗糖，进行常规洗涤；(6)第六次处理将茎尖转移到固体再生培养基六：MS+1-2mg/L噻苯隆+0.1-0.3mg/LNAA+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，可显著提高茎尖的冻后成活率。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法，其特征在于有以下步骤：(1)在超净工作台内，切取早梨茎尖并将其接种于液体培养基一：MS+0.3‑0.5g/L碳纳米管+0.3‑0.5g/L石墨烯量子点+0.3M蔗糖，进行常规预培养；(2)将茎尖转移到液体培养基二：MS+2M甘油+0.4M蔗糖+0.3‑0.5g/L碳纳米管+0.3‑0.5g/L石墨烯量子点，进行常规装载；(3)将茎尖转移到液体培养基三：PVS2+0.3‑0.5g/L碳纳米管+0.3‑0.5g/L石墨烯量子点，进行常规脱水；(4)将茎尖转移到铝箔条上液体培养基四：PVS2+0.3‑0.5g/L碳纳米管+0.3‑0.5g/L石墨烯量子点，进行常规小滴玻璃化法液氮保存；(5)液氮保存后，将铝箔条取出，经过常规化冻后转移到液体培养基五：MS+0.3‑0.5g/L碳纳米管+0.3‑0.5g/L石墨烯量子点+1.2M蔗糖，进行常规洗涤；(6)将茎尖转移到固体再生培养基六：MS+1‑2mg/L噻苯隆+0.1‑0.3mg/L NAA+0.3‑0.5g/L碳纳米管+0.3‑0.5g/L石墨烯量子点+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，接种后将材料放入培养室进行常规条件培养，可显著提高茎尖的冻后成活率。...

【技术特征摘要】
1.提高早梨茎尖小滴玻璃化法超低温保存效果的方法，其特征在于有以下步骤：(1)在超净工作台内，切取早梨茎尖并将其接种于液体培养基一：MS+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点+0.3M蔗糖，进行常规预培养；(2)将茎尖转移到液体培养基二：MS+2M甘油+0.4M蔗糖+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规装载；(3)将茎尖转移到液体培养基三：PVS2+0.3-0.5g/L碳纳米管+0.3-0.5g/L石墨烯量子点，进行常规脱水；(4)将茎尖转移到铝箔条上液体培养基四...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹明华，洪森荣，叶思雨，
申请(专利权)人：上饶师范学院，
类型：发明
国别省市：江西,36