一种阿法骨化醇片剂有关物质的检查方法技术

本发明专利技术公开了一种阿法骨化醇片剂有关物质的高效液相色谱分析方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈‑水的混合液为流动相，紫外检测器的波长为265nm，特别是采用了涡旋‑萃取‑浓缩的方式获得供试品溶液和对照溶液，极大地保证了该片剂中极低剂量的药物及其有关物质可以被检测到。本方法可同时分析阿法骨化醇片剂中所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制各已知杂质的含量，各杂质峰之间及主峰与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，主峰与各杂质峰的峰纯度均大于1.0。本发明专利技术为阿法骨化醇片剂的质量控制提供了简易和可靠的分析方法。

A method for determination of related substances in Alfa alcalol tablet

The present invention discloses a high performance liquid chromatographic method for the determination of related substances in alfacalcitol tablets. The method adopts octadecyl silane bonded silica gel as filling agent, acetonitrile water mixture as mobile phase, and the wavelength of ultraviolet detector is 265 nm, in particular, the method of scroll extraction and concentration is used to obtain the solubility of the test sample. Liquid and control solutions greatly ensure that very low doses of the drug and its related substances in the tablet can be detected. This method can simultaneously analyze all known impurities in Alfacalcitol tablets, and can effectively control the content of each known impurity by principal component self-control method with correction factor. The separation degree between the impurity peaks and between the main peak and the adjacent impurity peaks is greater than 1.5, and the peak purity of the main peak and each impurity peak is greater than 1.0. The invention provides a simple and reliable analytical method for the quality control of Alfa calcified alcohol tablets.

【技术实现步骤摘要】
一种阿法骨化醇片剂有关物质的检查方法
本专利技术属于一种药物制剂的有关物质检查方法，具体涉及一种阿法骨化醇片剂有关物质的检查方法。
技术介绍
阿法骨化醇，化学名是(5Z，7E)-9，10-开环胆甾-5，7，10(19)-三烯-1α，3β-二醇。结构式如下所示，。阿法骨化醇在肝脏被迅速转化成1,25-二羟基维生素D3，后者为维生素D3的代谢物，起到调节钙和磷酸盐代谢的作用。由于这一转化过程很迅速，故阿法骨化醇的临床效应与1,25-二羟基维生素D3基本一致。其主要作用是通过提高体内血循环中1,25-二羟基维生素D3水平，从而增加钙、磷酸盐的肠道吸收，促进骨矿化，降低血浆甲状旁腺激素水平，能亢进(伴有骨病者)、甲状旁腺功能减退、营养和吸收障碍引起的佝偻病和骨软化症同时减少骨钙消溶。适用于防治骨质疏松症，肾原性骨病等。最早由美国骨保健国际公司（BoneCareInternational）研制，并先后在以色列，德国，日本，意大利获批上市。现丹麦Leo制药公司的产品在世界各国均有销售，多用于因维生素D代谢障碍而一起的钙代谢紊乱，临床用于骨质疏松症，慢性肾功能补全，甲状旁腺功能减退症，抗维生素D佝偻病，骨软化症等。目前，我国已批准多家国内药企生产阿法骨化醇的片剂，胶囊剂，软胶囊剂等。众所周知，阿法骨化醇片具有极低的单元药物含量，辅料占比很大，给样品的准确检测带来干扰，增加困难。但是一般来说，低剂量药物具有较强的生理活性，其降解产物也可能因较强的生理活性容易引起不良反应，因此低剂量药物的有关物质检查不能忽略，理应是质量控制的关键指标之一。目前，美国、欧洲、日本等国药典中未收载阿法骨化醇片剂的质量标准，有关阿法骨化醇片剂的有关物质或质量研究鲜有报道。最新的中国药典2015年版中收载了阿法骨化醇片的质量标准，但其中主要控制的是含量均匀度和含量测定，对于有关物质的检查项并未涉及，这可能也是由于阿法骨化醇本身主药的含量就极低，主药在制剂和贮藏过程中产生多种杂质，就更加难以与主成分分离并检测。目前，阿法骨化醇片的分析方法主要依赖于精密的仪器和复杂的研究。综上，为保证药品的质量和安全，需要开发一种灵敏度极高的分析方法和极为精细的前处理方法，以便简便快速准确的检查低剂量剂型阿法骨化醇片的有关物质，并获得较好的回收率，使得更好地控制该药品的质量，增加用药安全。。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种阿法骨化醇片的有关物质的高效液相色谱分析方法，以克服现有技术中阿法骨化醇片的有关物质检查方法缺失的缺陷，更好地满足对于阿法骨化醇片的质量控制要求。针对现有文献对阿法骨化醇片的降解杂质鉴定研究的缺失，本专利技术人通过工艺试制、强制降解试验对阿法骨化醇相关杂质进行富集、分离提纯，具体操作可采用本领域技术人员熟知的富集杂质和分离提纯的方法，例如，可以放大反应投料量，浓缩收集母液，进行柱层析、重结晶等方式提纯杂质。本专利技术人总共鉴定了3个主要杂质，并且对其进行了溯源归属，包括：杂质PY1，结构如下所示，；杂质PY2，结构如下所示，；杂质PZB，结构如下所示，。同时按中国药典2015版二部通则0512（高效液相色谱法）及通则9101（药品质量标准分析方法验证指导原则）的定义及验证方法，进行专属性验证，结果表明该方法可同时分析阿法骨化醇原料及制剂中的所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制各已知杂质含量，各杂质峰之间及主峰与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。所述“峰纯度”是指采用配有相应分析软件的光二极管阵列检测器，采集、记录、分析经色谱柱分离组份的光谱数据，自动生成的表征特定分离组份对应的光谱特征一致性的加权值。本专利技术报道了一种阿法骨化醇片的有关物质检查方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，及紫外检测器，乙腈/水混合液为流动相等度洗脱，达到分离分析阿法骨化醇片中各个有关物质的目的。本专利技术的目的之一是提供一种阿法骨化醇片的有关物质检查方法，稍笼统的描述步骤如下：（1）取本品50片，置于50ml纳氏比色管中，加水，涡旋至片完全崩解，加乙酸乙酯，充分振摇，静置使分层，取上层溶液减压浓缩至干，重复上述过程共三次；浓缩至干的残渣中加入一定体积的甲醇-水混合液，混匀，用玻璃注射器经0.45μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，即得供试品溶液；精密量取100μl供试品溶液，置于10ml量瓶中，用甲醇-水混合液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；（2）另取杂质PY1、杂质PY2、杂质PZB与阿法骨化醇适量，精密称定，加甲醇-水混合液溶解并稀释制成每lml中含有阿法骨化醇5.0μg，杂质PY1、杂质PY2和杂质PZB各0.05μg的溶液，作为系统适用性溶液；照中国药典2015年版四部通则0512的高效液相色谱法测定，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水的混合液为流动相，乙腈：水的体积比为60-90:40-10，柱温为25-35℃，紫外检测器检测波长为265nm，流速为1.0-2.0ml/min；精密量取系统适用性溶液和对照溶液500μl注入液相色谱仪，前阿法骨化醇峰，杂质PY1峰，杂质PY2峰，杂质PZB峰相对阿法骨化醇峰的相对保留时间分别约为0.85，0.92，1.1和1.24，各杂质峰与阿法骨化醇峰的分离度均符合要求；对照溶液中主峰的信噪比应大于10；（3）精密量取供试品溶液和对照溶液各500μl，注入液相色谱柱，记录色谱图至主峰保留时间的3倍；供试品溶液色谱图中如有杂质峰，以峰面积按加校正因子的主成分自身对照法计算，除前阿法骨化醇峰和辅料峰外，杂质PY1、杂质PY2和杂质PZB峰面积不得大于对照溶液主峰面积，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5.0倍；其中，杂质PY1的结构如下所示，；杂质PY2的结构如下所示，；杂质PZB的结构如下所示，。上述方法中优选地，在步骤1中，所述“加水”是加水25ml；所述“加乙酸乙酯”是加乙酸乙酯10ml，所述“甲醇-水混合液”是体积比80:20的甲醇/水混合液，所述“一定体积”是指2-5ml。上述方法中优选地，在步骤2中，所述“甲醇-水混合液”为体积比80:20的甲醇/水混合液，所述“色谱柱”选自：安捷伦C18柱，WatersXTerraC18150*4.6mm,3.5μm，WatersSunFireC18150*4.6mm,3.5μm，YMCODS-AQ150*4.6/3μm中的一种；所用流动相中乙腈：水的体积比为77:23，所述流动相流速为1.6-2.0ml/min；所述柱温是30-35℃；。检查方法中优选地，包含如下步骤，该方法特别适用于规格为0.5μg阿法骨化醇片的有关物质的检查：（1）取本品50片，置于50ml纳氏比色管中，加水25ml，涡旋至片完全崩解，加乙酸乙酯10ml，充分振摇，静置使分层，取上层溶液减压浓缩至干，重复上述过程共三次；浓缩至干的残渣中加体积比80:20的甲醇/水混合液5ml，混匀，用玻璃注射器经经0.45μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，即得供试品溶液；精密量取100μl供试品溶液，置于10ml量瓶中，用体积比80:20的甲醇/水混合液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；（2）另取杂质PY1、杂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种阿法骨化醇片的有关物质检查方法，其特征在于，包含如下步骤：（1）取本品50片，置于50ml纳氏比色管中，加水，涡旋至片完全崩解，加乙酸乙酯，充分振摇，静置使分层，取上层溶液减压浓缩至干，重复上述过程共三次；浓缩至干的残渣中加入一定体积的甲醇‑水混合液，混匀，用玻璃注射器经0.45μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，即得供试品溶液；精密量取100μl供试品溶液，置于10ml量瓶中，用甲醇‑水混合液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；（2）另取杂质PY1、杂质PY2、杂质PZB与阿法骨化醇适量，精密称定，加甲醇‑水混合液溶解并稀释制成每 l ml中含有阿法骨化醇5.0μg，杂质PY1、杂质PY2和杂质PZB各0.05μg的溶液，作为系统适用性溶液；照中国药典2015年版四部通则0512的高效液相色谱法测定，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈‑水的混合液为流动相，乙腈：水的体积比为60‑90 : 40‑10，柱温为25‑35℃，紫外检测器检测波长为265nm，流速为1.0‑2.0 ml/min；精密量取系统适用性溶液和对照溶液500μl注入液相色谱仪，前阿法骨化醇峰，杂质PY1峰，杂质PY2峰，杂质PZB峰相对阿法骨化醇峰的相对保留时间分别约为0.85，0.92，1.1和1.24，各杂质峰与阿法骨化醇峰的分离度均符合要求；对照溶液中主峰的信噪比应大于10；（3）精密量取供试品溶液和对照溶液各500μl，注入液相色谱柱，记录色谱图至主峰保留时间的3倍；供试品溶液色谱图中如有杂质峰，以峰面积按加校正因子的主成分自身对照法计算，除前阿法骨化醇峰和辅料峰外，杂质PY1、杂质PY2和杂质PZB峰面积不得大于对照溶液主峰面积，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5.0倍；其中，杂质PY1的结构如下所示，...

【技术特征摘要】
1.一种阿法骨化醇片的有关物质检查方法，其特征在于，包含如下步骤：（1）取本品50片，置于50ml纳氏比色管中，加水，涡旋至片完全崩解，加乙酸乙酯，充分振摇，静置使分层，取上层溶液减压浓缩至干，重复上述过程共三次；浓缩至干的残渣中加入一定体积的甲醇-水混合液，混匀，用玻璃注射器经0.45μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，即得供试品溶液；精密量取100μl供试品溶液，置于10ml量瓶中，用甲醇-水混合液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；（2）另取杂质PY1、杂质PY2、杂质PZB与阿法骨化醇适量，精密称定，加甲醇-水混合液溶解并稀释制成每lml中含有阿法骨化醇5.0μg，杂质PY1、杂质PY2和杂质PZB各0.05μg的溶液，作为系统适用性溶液；照中国药典2015年版四部通则0512的高效液相色谱法测定，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水的混合液为流动相，乙腈：水的体积比为60-90:40-10，柱温为25-35℃，紫外检测器检测波长为265nm，流速为1.0-2.0ml/min；精密量取系统适用性溶液和对照溶液500μl注入液相色谱仪，前阿法骨化醇峰，杂质PY1峰，杂质PY2峰，杂质PZB峰相对阿法骨化醇峰的相对保留时间分别约为0.85，0.92，1.1和1.24，各杂质峰与阿法骨化醇峰的分离度均符合要求；对照溶液中主峰的信噪比应大于10；（3）精密量取供试品溶液和对照溶液各500μl，注入液相色谱柱，记录色谱图至主峰保留时间的3倍；供试品溶液色谱图中如有杂质峰，以峰面积按加校正因子的主成分自身对照法计算，除前阿法骨化醇峰和辅料峰外，杂质PY1、杂质PY2和杂质PZB峰面积不得大于对照溶液主峰面积，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5.0倍；其中，杂质PY1的结构如下所示，；杂质PY2的结构如下所示，；杂质PZB的结构如下所示，。2.根据权利要求1所述的检查方法，其特征在于，在步骤1中，所述“加水”是加水25ml；所述“加乙酸乙酯”是加乙酸乙酯10ml，所述“甲醇-水混合液”是体积比80:20的甲醇/水混合液，所述“一定体积”是指2-5ml。3.根据权利要求1所述的检查方法，其特征在于，在步骤2中，所述“甲醇-水混合液”为体积比80:20的甲醇/水混合液，所述“色谱柱”选自：安捷伦C18柱，WatersXTerraC18150*4.6mm,3.5μm，WatersSunFireC18150*4.6mm,3.5μm，YMCODS-AQ150*4.6/3μm中的一种；所用流动相中乙腈：水的体积比为77:23，所述流动相流速为1.6-2.0ml/min；所述柱温是30-35℃。4.根据权利要求1所述的阿法骨化醇片的有关物质检查方法，其特征在于，包含如下步骤：（1）取本品50片，置于50ml纳氏比色管中，加水25ml，涡旋至片完全崩解，加乙酸乙酯10ml，充分振摇，静置使分层，取上层溶液减压浓缩至干，重复上述过程共三次；浓缩至干的残渣中加体积比80:20的甲醇/水混合液5ml，混匀，用玻璃注射器经经0.45μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，即得供试品溶液；精密量取100μl供试品溶液，置于10ml量瓶中，用体积比80:20的甲醇/水混合液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；（2）另取杂质PY1、杂质PY2、杂质PZB与阿法骨化醇适量，精密称定，加体积比80:20的甲醇/水混合液溶解并稀释制成每lml中含有阿法骨化醇5.0μg，杂质PY1、杂质PY2和杂质PZB各0.05μg的溶液，作为系统适用性溶液；照中国药典2015年版四部通则0512的高效液相色谱法测定，采...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮清清，刘婷婷，闵涛，徐丽，曹卫，王芳，
申请(专利权)人：南京海融制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32