一种他卡西醇软膏剂有关物质检查方法技术

本发明专利技术公开了一种低浓度的他卡西醇软膏剂有关物质的高效液相色谱分析方法，该方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈‑水的混合液为流动相，特别是采用了涡旋‑萃取‑浓缩的方式获得供试品溶液和对照溶液，极大地保证了该软膏中极低剂量的药物及其有关物质可以被检测到，还优化了溶解浓缩至干剩余物的溶剂体系，使得出峰峰形更加尖锐，重现性好。本方法可同时分析他卡西醇软膏剂中所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制各已知杂质的含量，各杂质峰之间及主峰与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，主峰与各杂质峰的峰纯度均大于1.0。本发明专利技术为他卡西醇软膏剂的质量控制提供了简易和可靠的分析方法。

A method for the examination of related substances in Tacalcitol Ointment

The present invention discloses a high performance liquid chromatographic method for the determination of related substances in low concentration takashitol ointment. The method uses octadecyl silane bonded silica gel as filling agent and acetonitrile water mixture as mobile phase, in particular the method of vortex extraction concentration to obtain test solution and control solution. It greatly guarantees the detection of very low doses of drugs and related substances in the ointment, and optimizes the solvent system for dissolving and concentrating to dry residues, making the peak shape sharper and reproducible. This method can simultaneously analyze all known impurities in tacalcitol ointment, and can effectively control the content of each known impurity by principal component self-control method with correction factor. The separation degree between each impurity peak and between the main peak and the adjacent impurity peak is greater than 1.5, and the peak purity of the main peak and each impurity peak is greater than 1.0. The invention provides a simple and reliable analytical method for the quality control of Tacalcitol Ointment.

【技术实现步骤摘要】
一种他卡西醇软膏剂有关物质检查方法
本专利技术属于一种药物制剂的有关物质检查方法，具体涉及一种低浓度的他卡西醇软膏剂有关物质检查方法。
技术介绍
银屑病，又称牛皮癣，是一种慢性炎症性皮肤病，患病时间长，易于复发，有的病例几乎终生不愈；其发病以青壮年为主，对患者的身体健康和精神状态均有所影响；临床上常为红斑和鳞屑等症状，全身均可发病，以头皮，四肢伸侧较多，在冬季易加重；目前治疗银屑病外用药物主要有维生素D类衍生物、皮质类固醇类、维A酸类、蒽林、角质脱剥剂等；皮质类固醇是由肾上腺皮质产生的类固醇类物质，多是激素类，如糖皮质类固醇和盐皮质类固醇等；在牛皮癣的治疗中，已知使用联合治疗，其中牵涉一种类固醇化合物，如皮质类固醇化合物，和一种维生素D类似物。维生素D(vitaminD)为固醇类衍生物，具抗佝偻病作用，又称抗佝偻病维生素。目前认为维生素D也是一种类固醇激素，维生素D家族成员中最重要的成员是VD2(麦角钙化醇)和VD3(胆钙化醇)。维生素D均为不同的维生素D原经紫外照射后的衍生物。缺乏维生素D可能对身体极其有害。维生素D衍生物活性较高，故其制剂含量都非常低，通常在0.0001～0.0005％之间。他卡西醇(Tacalcitol)，是维生素D3活性代谢产物的类似物，化学名为(+)－(5Z，7E，24R)－9，10－开链胆甾－5，7，10(19)－三烯－1a，3b，24－三醇，化学式C27H44O3，CAS登录号57333-96-7；是一种治疗银屑病(牛皮癣)的药物。于1993年由日本的帝人制药株式会社(Teijin)生物医药研究院推出上市，商品名为萌尔夫。由于他卡西醇药效好且可以用于面部感染的银屑病的治疗，因此成为治疗银屑病(牛皮癣)的主要外敷药物。他卡西醇性质不稳定，对光、热、空气均很敏感，尤其是在反应过程中容易产生一些异构体杂质及其它有关物质，难于分离纯化，因而合成条件较难把握，合成工艺技术门槛高、难度大。同时，对原料药和制剂产品的质量控制也提出了更好的要求。目前为止，由于他卡西醇在制剂中的含量极低，主药本身的理化性质有极不稳定，因此，目前为止的公开文献中，对于他卡西醇的杂质研究和质量控制鲜有报道。众所周知，他卡西醇软膏具有极低的单元药物含量，辅料占比很大，给样品的准确检测带来干扰，增加困难。但是一般来说，低剂量药物具有较强的生理活性，其降解产物也可能因较强的生理活性容易引起不良反应，因此低剂量药物的有关物质检查不能忽略，理应是质量控制的关键指标之一。日本药典中收载了他卡西醇软膏的质量标准，其中在纯度检查中虽然描述了检查方法，但是其明确指出该方法只是适用于相对稍大规格即20μg/g的软膏的纯度检查，也就是说对于更低规格的软膏有关物质检查无能为力，并且其他公开文献中，进一步深入的探讨更低浓度比如2μg/g规格的他卡西醇软膏有关物质或质量研究鲜有报道。这可能也是由于他卡西醇本身主药的含量就极低，主药在制剂和贮藏过程中产生多种杂质，就更加难以与主药分离并检测。目前，他卡西醇软膏的分析方法主要依赖于精密的仪器和复杂的研究。综上，为保证药品的质量和安全，需要开发一种灵敏度极高的分析方法和极为精细的前处理方法，以便简便快速准确的检查低剂量剂型的他卡西醇软膏的有关物质，并获得较好的回收率，使得更好地控制该药品的质量，增加用药安全。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种低浓度他卡西醇软膏的有关物质的高效液相色谱分析方法，以克服现有技术中对于更低规格比如2μg/g规格的他卡西醇软膏有关物质检查方法的缺失，更好地满足对于他卡西醇软膏的质量控制要求。针对现有文献对他卡西醇软膏的降解杂质鉴定研究的缺失，本专利技术人通过工艺试制、强制降解试验对他卡西醇相关杂质进行富集、分离提纯，具体操作可采用本领域技术人员熟知的富集杂质和分离提纯的方法，例如，可以放大反应投料量，浓缩收集母液，进行柱层析、重结晶等方式提纯杂质。本专利技术人总共鉴定了1个主要杂质PY1，结构如下所示，同时按中国药典2015版二部通则0512(高效液相色谱法)及通则9101(药品质量标准分析方法验证指导原则)的定义及验证方法，进行专属性验证，结果表明该方法可同时分析他卡西醇软膏中的所有已知杂质，并且可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制各已知杂质含量，各杂质峰之间及主峰与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。所述“峰纯度”是指采用配有相应分析软件的光二极管阵列检测器，采集、记录、分析经色谱柱分离组份的光谱数据，自动生成的表征特定分离组份对应的光谱特征一致性的加权值。本专利技术报道了一种他卡西醇软膏的有关物质检查方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，及紫外检测器，乙腈/水混合液为流动相等度洗脱，达到分离分析他卡西醇软膏中主峰他卡西醇，前他卡西醇，杂质PY1，以及其他有关物质的目的。本专利技术提供了一种低浓度的他卡西醇固体或半固体制剂的有关物质检查方法，包含如下步骤：避光操作，取本品约1g(相当于他卡西醇2μg)，置25ml顶空瓶中，加入5ml正己烷，密封，涡旋5min，使其完全溶解，再加入5ml甲醇，再涡旋5min，静置分层，将上层浑浊溶液弃去，下层于25℃下旋蒸至干，加1ml80％甲醇溶解后，用0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；取供试品溶液0.1ml，置10ml棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液①，再取4ml，置10ml棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱；调整流速，使他卡西醇的保留时间约为24min；检测波长265nm；时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)0406030406050010060010060.14060704060取系统适用性溶液和供试品溶液各300μl注入液相色谱仪，系统适用性溶液连续6针的相对标准偏差不得过10％；系统适用性溶液主峰面积应为溶液①主峰面积的28％～52％；供试品溶液中前他卡西醇和他卡西醇的分离度不得小于5；供试品溶液色谱图中，除他卡西醇和前他卡西醇峰外，按面积归一化法计算，相对保留时间0.83的色谱峰不得过0.8％，杂质总量不得过2.0％。本专利技术提供的有关物质检查方法，该检查方法适用的剂型包括：片剂，胶囊，颗粒剂，软膏剂，凝胶剂，乳膏剂，贴剂，巴布剂。优选地，本专利技术提供的有关物质检查方法，该检查方法适用的剂型是他卡西醇软膏。优选地，本专利技术提供的有关物质检查方法，该检查方法适用的剂型是他卡西醇软膏，软膏规格是大于等于2μg/g且小于等于20μg/g。优选地，本专利技术提供的有关物质检查方法，该检查方法适用的剂型是他卡西醇软膏，软膏规格是20μg/g。最优选地，本专利技术提供的有关物质检查方法，该检查方法适用的剂型是他卡西醇软膏，软膏规格是2μg/g。最优选地，本专利技术提供的有关物质检查方法，该检查方法是用于检查规格为2μg/g他卡西醇软膏的有关物质的检查方法，具体包含如下：避光操作；取本品约1g(相当于他卡西醇2μg)，置25ml顶空瓶中，加入5ml正己烷，密封，涡旋5min，使其完全溶解，再加入5ml甲醇，再本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种低剂量的他卡西醇固体或半固体制剂的有关物质检查方法，其特征在于，包含如下步骤：避光操作；取本品约1g（相当于他卡西醇2μg），置25ml顶空瓶中，加入5ml正己烷，密封，涡旋5min，使其完全溶解，再加入5ml甲醇，再涡旋5min，静置分层，将上层浑浊溶液弃去，下层于25℃下旋蒸至干，加1ml 80%甲醇溶解后，用0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；取供试品溶液0.1ml，置10ml棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液①，再取4ml，置10ml棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱；调整流速，使他卡西醇的保留时间约为24min；检测波长265nm；

【技术特征摘要】
1.一种低剂量的他卡西醇固体或半固体制剂的有关物质检查方法，其特征在于，包含如下步骤：避光操作；取本品约1g（相当于他卡西醇2μg），置25ml顶空瓶中，加入5ml正己烷，密封，涡旋5min，使其完全溶解，再加入5ml甲醇，再涡旋5min，静置分层，将上层浑浊溶液弃去，下层于25℃下旋蒸至干，加1ml80%甲醇溶解后，用0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液；取供试品溶液0.1ml，置10ml棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液①，再取4ml，置10ml棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱；调整流速，使他卡西醇的保留时间约为24min；检测波长265nm；取系统适用性溶液和供试品溶液各300μl注入液相色谱仪，系统适用性溶液连续6针的相对标准偏差不得过10%；系统适用性溶液主峰面积应为溶液①主峰面积的28%~52%；供试品溶液中前他卡西醇和他卡西醇的分离度不得小于5；供试品溶液色谱图中，除他卡西醇和前他卡西醇峰外，按面积归一化法计算，相对保留时间0.83的色谱峰不得过0.8%，杂质总量不得过2.0%。2.根据权利要求1所述的有关物质检查方法，其特征在于，该检查方法适用的剂型包括：片剂，胶囊，颗粒剂，软膏剂，凝胶剂，乳膏剂，贴剂，巴布剂。3.根据权利要求2所述的有关物质检查方法，其特征在于，该检查方法适用的剂型是他卡西醇软膏。4.根据权利要求3所述的有关物质检查方法，其特征在于，该检查方法适用的剂型是他卡西醇软膏，软膏规...

【专利技术属性】
技术研发人员：李聚江，徐丽，闵涛，石若鹏，袁士发，柏丹丹，王继芳，
申请(专利权)人：南京海融制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32