基于核酸适配体-量子点结合苏云金芽孢杆菌孢子的荧光测定法制造技术

本发明专利技术公开了一种基于核酸适配体‑量子点结合苏云金芽孢杆菌孢子的荧光测定法，包括Cry1Ab蛋白即Bt蛋白的、核酸适配体‑量子点混合物的制备，将核酸适配体‑量子点与芽孢杆菌孢子结合。本发明专利技术通过核酸适配体‑量子点与芽孢杆菌孢子结合的方法对转基因水稻中Bt蛋白结果进行检测，检测结果客观、易判定，可对转基因产品的含量进行定量分析，同时检测速度快，检测灵敏度高。

Fluorescence detection of spores of Bacillus thuringiensis based on aptamer quantum dots

The present invention discloses a fluorescence determination method for Bacillus thuringiensis spores based on nucleic acid aptamer quantum dot binding, including the preparation of a mixture of Cry1Ab protein, i.e. Bt protein and nucleic acid aptamer quantum dot, and the binding of nucleic acid aptamer quantum dot to Bacillus spores. The invention detects the result of Bt protein in transgenic rice by combining nucleic acid aptamer quantum dots with spores of Bacillus. The result is objective and easy to determine. The content of transgenic products can be quantitatively analyzed, and the detection speed is fast, and the detection sensitivity is high.

【技术实现步骤摘要】
基于核酸适配体-量子点结合苏云金芽孢杆菌孢子的荧光测定法
本专利技术属于转基因成分的检测
，具体涉及一种基于核酸适配体-量子点结合苏云金芽孢杆菌孢子的荧光测定法。
技术介绍
转基因生物的安全评价是转基因生物及其产品市场化和商品化的前提，在安全评价中转基因成分的检测是一项重要内容。我国对转基因水稻的研究处于世界领先水平，其中，研发的一些抗病、抗虫转基因水稻品系已经申请生产种植用生物安全证书，但由于它们的转基因生物安全问题等一些原因，至今尚未有品系批准商业化生产应用。鉴于转基因水稻技术的成熟以及其产品市场化的趋势，因此建立一种快速、简便的检测Bt蛋白的方法，具有必要性和紧迫性。目前对于转基因成分的检测可从外源基因的核酸和蛋白质两个水平进行。核酸水平的检测，主要针对转入的外源基因的核苷酸序列并根据外源基因与内源基因的同源性设计检测方法，主要采用的方法是PCR扩增，即依据转入外源基因的启动子、目的基因、终止子及表达(重组)载体信息，设计特异性引物，进行聚合酶链式反应，依据产物的有无或多少判断是否为转基因产品。PCR反应具有高灵敏度、高特异性、高效性的特点，是转基因产品初筛阶段的主要检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于核酸适配体‑量子点结合苏云金芽孢杆菌孢子的荧光测定法，其特征在于，包括以下步骤：(1)核酸适配体‑量子点的制备：1.1、将13.9μL 10mM SMCC(琥珀酰亚胺‑4‑(N‑马来酰亚胺)环已烷‑1‑1羟酸酯)添加到125μL量子点中并在室温下放置一小时以激活量子点；1.2、在300μL 1mg/ml一倍工作浓度的PBS溶液中制备5′巯基修饰的寡核苷酸，向溶液中加入6.1μl 1m的二硫苏糖醇(DTT)并在室温下放置30分钟以缩减适配体；1.3、激活量子点的溶液以及缩减适配体的溶液分别通过一个nap‑5脱盐柱(Sephadex G‑25脱盐柱)，每个溶液收集500μl；1.4、然...

【技术特征摘要】
1.一种基于核酸适配体-量子点结合苏云金芽孢杆菌孢子的荧光测定法，其特征在于，包括以下步骤：(1)核酸适配体-量子点的制备：1.1、将13.9μL10mMSMCC(琥珀酰亚胺-4-(N-马来酰亚胺)环已烷-1-1羟酸酯)添加到125μL量子点中并在室温下放置一小时以激活量子点；1.2、在300μL1mg/ml一倍工作浓度的PBS溶液中制备5′巯基修饰的寡核苷酸，向溶液中加入6.1μl1m的二硫苏糖醇(DTT)并在室温下放置30分钟以缩减适配体；1.3、激活量子点的溶液以及缩减适配体的溶液分别通过一个nap-5脱盐柱(SephadexG-25脱盐柱)，每个溶液收集500μl；1.4、然后将量子点和缩减适体在室温下反应一个小时。将10.1μLβ-巯基乙醇(100μM的最终浓度)加入到混合物中来淬火共轭反应，并在室温下放置30分钟，通过柱纯化，共收集到250μL核酸适配体-量子点；1.5、将10μl核酸适配体-量子点溶解在1ml反渗透纯净水中。运用一个uv-2100分光光度计来衡量在260nm时的吸光度；1.6、核酸适配体-量子点的实际浓度由与最初的核酸适配体浓度(1.08mg/ml)进行比较来决定；(2)将核酸适配体-量子点与芽孢杆菌孢子结合：2.1、将30μL核酸适配体-量子点...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军安，
申请(专利权)人：武汉世格美检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42