一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品技术

本发明专利技术公开一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品，该方法包括以下步骤：用EB66传代细胞分别接种鸭坦布苏、禽流感病毒株；在病毒ELD50或EID50效价达到最高时分别收获鸭坦布苏、禽流感病毒并保存；分别灭活鸭坦布苏、禽流感病毒；将灭活后的鸭坦布苏和禽流感病毒在吐温‑80中完全混合，得到病毒混合液，在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化，配制成鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗。本发明专利技术通过采用EB66传代细胞系分别进行鸭坦布苏和禽流感病毒的培养，然后制备成的鸭坦布苏、禽流感二联疫苗具有生产工艺稳定、批间差异小、质量可控、产量和质量显著提高等优点。

Method and product for producing two inactivated vaccine of duck tembus and avian influenza

The invention discloses a method for producing duck Tambusu and avian influenza binary inactivated vaccine and its products. The method comprises the following steps: inoculating duck Tambusu and avian influenza virus strains respectively with EB66 passage cells; harvesting duck Tambusu and avian influenza virus respectively when the viral ELD50 or EID50 titer reaches the highest; inactivating and preserving duck Tambusu and avian influenza virus respectively; Duck Tambusu and avian influenza virus were mixed completely in Tween 80 to get the virus mixture. The virus mixture was mixed with sterilized oil adjuvant and emulsified to prepare the duck Tambusu and avian influenza binary inactivated vaccine. The invention adopts EB66 passage cell line to culture duck tambusu and avian influenza virus respectively, and then prepares duck tambusu and avian influenza binary vaccine, which has the advantages of stable production process, small difference between batches, controllable quality, remarkable increase in yield and quality.

【技术实现步骤摘要】
一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品
本专利技术涉及兽用生物制品
，具体地，涉及一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品。
技术介绍
鸭坦布苏病毒病(DuckTembusuVirusStrain)，也称蛋鸭黄病毒病，是由黄病毒科鸭坦布苏病毒引起的一种以蛋鸭、种鸭产蛋骤然大幅下降为主要临床特征、以出血性卵巢炎为主要病变特征的急性传染病。该病自2010年在我国发现以来，广泛传播，各省种蛋鸭养殖区每年均有发生。该病从最初的夏季产蛋高峰期爆发发展至现在的不定期发生，呈现出了一种无规律的变化，对种蛋鸭养殖业危害极大造成严重的经济损失。禽流感(H9亚型)(AvainInfluenzaH9subtype)是由A型流感病毒引起的一种禽类的感染和/或疾病综合征，鸡、火鸡、鸭、鹅等家禽鸡野鸟、水禽等均可被感染。H9亚型禽流感病毒(H9AIV)一般呈低至中等毒力，但它分布广泛、能造成鸭的免疫抑制进而引发与其它鸭病的混合感染，产蛋鸭感染后也可引起产蛋率的明显下降，极大影响了蛋鸭的经济效益，因此它对养鸭业的危害也不可忽视。鸭坦布苏病毒病禽和流感(H9亚型)是鸭业养殖中的高发病，对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用EB66传代细胞分别接种鸭坦布苏、禽流感病毒株；(2)在病毒ELD50或EID50效价达到最高时分别收获鸭坦布苏、禽流感病毒并保存；(3)分别灭活鸭坦布苏、禽流感病毒；(4)将灭活后的鸭坦布苏和禽流感病毒在吐温‑80中完全混合，得到病毒混合液，在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化，配制成鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗。

【技术特征摘要】
1.一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用EB66传代细胞分别接种鸭坦布苏、禽流感病毒株；(2)在病毒ELD50或EID50效价达到最高时分别收获鸭坦布苏、禽流感病毒并保存；(3)分别灭活鸭坦布苏、禽流感病毒；(4)将灭活后的鸭坦布苏和禽流感病毒在吐温-80中完全混合，得到病毒混合液，在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化，配制成鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗。2.如权利要求1所述产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体操作步骤如下：采用无血清培养基，通过悬浮培养法对EB66细胞进行传代培养，获取EB66传代细胞；利用所述EB66传代细胞分别接种鸭坦布苏、禽流感病毒株后，分别进行吸附培养，然后补加原工作体积1～2倍的无血清培养基，其中所述禽流感病毒株的培养需要补加TPCK胰酶，所述TPCK胰酶的补加策略为在接毒后第0天和第1天各补加2mg/L所述TPCK胰酶或者在接毒后第0天一次性补加4mg/L所述TPCK胰酶。3.如权利要求2所述产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于：所述吸附培养的培养时间为0.5h～2h，培养温度为33℃～35℃，搅拌速度为80rmp～120rmp。4.如权利要求2所述产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法，其特征在于：所述吸附培养完成后，补加原工作体积1倍的所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：温良海，陈瑞爱，罗顺，李延鹏，蔡仕君，叶俊贤，李鹏杰，董楠，罗琼，
申请(专利权)人：华农肇庆生物产业技术研究院有限公司，华南农业大学，肇庆大华农生物药品有限公司，甘肃健顺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44