【技术实现步骤摘要】
一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒
本专利技术属于一种生物分离、纯化富集的试剂盒,具体涉及一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒。
技术介绍
莱克多巴胺为一种人工合成的β肾上腺素兴奋剂,当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,尤其是在猪的肝脏等内脏器官残留较高,食用后对人体健康造成了严重的危害。其主要危害是:出现肌肉振颤、头疼、恶心、呕吐等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。我国禁止在畜牧业中使用莱克多巴胺。由于生物组分的复杂性、待测物浓度低、前处理过程复杂等因素,现有的莱克多巴胺的提取工艺并不稳定,造成提取莱克多巴胺的富集效率低等,降低了检测的灵敏度和特异性,因而急需开发可以提高莱克多巴胺的富集效率的装置。免疫磁珠是由作为载体的磁性微球和免疫配基结合而成的纳米级材料。磁性微球载体通常是带有氨基、羧基、羟基或巯基等化学官能团的磁珠,该官能团与不同的免疫配基如活性蛋白、抗体、抗原、亲和素、生物素等结合形成免疫磁珠。磁性微球载体具有超顺磁性特点,可使免疫磁珠置于磁场时,显示其磁性,从磁场移出时,磁性消除,免疫磁珠重新分散。包被抗体的免疫磁珠作为固相载体,其上的抗体与相应抗原发生特异性结合形成抗原-抗体-磁珠复合物,这种复合物在磁场作用下,迅速向磁场移动,使复合物与其他物质分离,达到分离特异性抗原的目的,这种分离方法具有检测速度快、特异性高、灵敏度高、重复性好等优势。免疫磁珠的磁分离方法可重复性好,操作简单,不需昂贵的仪器设备,不影响被分离生物材料的生物学性状和功能,并由于磁珠特殊的性能,可以将免疫检 ...
【技术保护点】
1.一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒,其特征在于,包括以下步骤:该试剂盒由样本仓、试剂仓、清洗仓、洗脱仓等几个部分组成;样本仓用于放置样本的前处理溶液,试剂仓用于放置免疫磁珠,免疫磁珠上偶联了莱克多巴胺抗体,清洗仓用于放置清洗液清洗,洗脱仓主要用于洗脱反应结合物;步骤主要包括以下:(1)免疫磁珠的捕获收集样本首先将样本前处理溶液放于样本仓中,抗莱克多巴胺抗体免疫磁珠放入试剂仓,旋转混匀,然后将免疫磁珠加入到样本仓中,旋转重悬,37℃下旋转捕获30min,以实现最大程度地捕获样本中的莱克多巴胺,磁分离,弃去上清液;将捕获过样本的免疫磁珠在清洗仓中使用清洗液清洗,轻摇重悬,磁分离,弃上清;此过程可重复2‑3次;免疫磁珠捕获莱克多巴胺完成后,再经磁分离,从而实现莱克多巴胺样本的富集净化;去除磁分离后的上清,沉淀即为捕获了莱克多巴胺的免疫磁珠;(2)免疫磁珠的洗脱将步骤(1)中得到的免疫磁珠中在洗脱仓中加入洗脱液进行洗脱,室温震荡几秒钟,磁分离,上清液即为富集净化后的莱克多巴胺样本,可用于后续的测定。
【技术特征摘要】
1.一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒,其特征在于,包括以下步骤:该试剂盒由样本仓、试剂仓、清洗仓、洗脱仓等几个部分组成;样本仓用于放置样本的前处理溶液,试剂仓用于放置免疫磁珠,免疫磁珠上偶联了莱克多巴胺抗体,清洗仓用于放置清洗液清洗,洗脱仓主要用于洗脱反应结合物;步骤主要包括以下:(1)免疫磁珠的捕获收集样本首先将样本前处理溶液放于样本仓中,抗莱克多巴胺抗体免疫磁珠放入试剂仓,旋转混匀,然后将免疫磁珠加入到样本仓中,旋转重悬,37℃下旋转捕获30min,以实现最大程度地捕获样本中的莱克多巴胺,磁分离,弃去上清液;将捕获过样本的免疫磁珠在清洗仓中使用清洗液清洗,轻摇重悬,磁分离,弃上清;此过程可重复2-3次;免疫磁珠捕获莱克多巴胺完成后,再经磁分离,从而实现莱克多巴胺样本的富集净化;去除磁分离后的上清,沉淀即为捕获了莱克多巴胺的免疫磁珠;(2)免疫磁珠的洗脱将步骤(1)中得到的免疫磁珠中在洗脱仓中加入洗脱液进行洗脱,室温震荡几秒钟,磁分离,上清液即为富集净化后的莱克多巴胺样本,可用于后续的测定。2.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒,其特征在于所述的免疫磁珠富集净化莱克多巴胺的最佳反应条件为,37℃下,pH7.4,0.02mo1/L的含甲醇10%的PBS缓冲液中旋转捕获30min。3.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒,其特征在于所述的采用的捕获缓冲液优选为pH7.4,0.02mo1/L的含甲醇10%的PBS缓冲液。4.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒,其特征在于所述的洗脱液采用无水甲醇,免疫磁珠在洗脱液中的浓度采用5-10mg/mL;室温震荡1-5分钟为宜。5.根据权利要求1所述的一种基于免疫磁珠的莱克多巴胺样本前处理试剂盒,其特征在于优选地,步骤(1)中抗莱克多巴...
【专利技术属性】
技术研发人员:张波,张学记,郗日沫,王鹏,雷少军,张二林,雷达,刘向阳,孙骁帅,
申请(专利权)人:沭阳康源泰博生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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