一种CHO DG44培养基及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种CHO DG44培养基及其应用。所述培养基的成分中含有：OPM‑CHO CD07、L‑Glutamine、F‑68、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、LONG® R3  IGF‑I、亚油酸、吡哆胺二盐酸盐。本发明专利技术的CHO DG44培养基，用于培养CHO DG44细胞时，从细胞倍增时间，细胞最高密度和细胞培养时间上，都优于国外某知名品牌的CD DG44培养基，完全可以替代国外某知名品牌CD DG44培养基，更有利于CHO DG44细胞的培养。

A CHO DG44 medium and its application

The invention belongs to the field of biotechnology, in particular to a CHO DG44 medium and its application. The composition of the medium contains: OPM_CHO CD07, L_Glutamine, F_68, hypoxanthine, thymidine, LONG < R3 IGF_I, linoleic acid, pyridoxamine dihydrochloride. The CHO DG44 medium of the present invention is superior to a famous foreign brand CD DG44 medium in terms of cell doubling time, cell maximum density and cell culture time when it is used to culture CHO DG44 cells. It can completely replace a famous foreign brand CD DG44 medium and is more conducive to the culture of CHO DG44 cells.

【技术实现步骤摘要】
一种CHODG44培养基及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种CHODG44培养基及其应用。
技术介绍
动物细胞表达的单克隆抗体药物销售额迅速增长，作为商业化生产单抗的核心技术之一的大规模动物细胞悬浮培养成为抗体药物发展的新瓶颈。其中之一主要技术限制就是国内没有自己的高效能商业化动物悬浮培养基，而SIGMA、Invitrogen、Hyclone和Lonza等国际知名培养基，每升高达上千元，且配方保密，不利于后续的培养工艺优化。故研制出自主品牌且低成本的无血清无动物来源培养基，对工艺优化与反应器放大，以满足大量表达单克隆抗体的需求，对于抗体药物的产业化的意义是非常重大的。市场上抗体药物70％以上都是由CHODG44宿主细胞表达，是二氢叶酸还原酶缺陷型(DHFR-)中国仓鼠卵巢细胞。目前CHODG44转染前培养基主要使用某知名品牌CDDG44培养基，是化学成分确定的、无蛋白培养基，专门设计用于DG44细胞的生长和悬浮培养条件下蛋白质的表达。现希望专利技术一种国产新型CHODG44培养基。
技术实现思路
为了克服现有技术中所存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种CHODG44培养基及其应用。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种CHODG44培养基，所述培养基的成分中含有：OPM-CHOCD07、L-Glutamine、F-68、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、R3IGF-I、亚油酸、吡哆胺二盐酸盐。所述OPM-CHOCD07可通过商购途径从上海奥浦迈生物科技有限公司获得，货号为P081307-001。所述L-Glutamine为L-谷氨酰胺，分子式为C5H10N2O3，分子量为146.14，CAS号为56-85-9。所述L-Glutamine可通过商购途径获得，例如，可从味之素或GIBCO购买获得。所述F-68可通过商购途径获得，例如，可从GIBCO购买获得，货号为24040-032。所述次黄嘌呤(hypoxanthine)可通过商购途径获得，例如可从SIGMA购买获得，货号为H9636-1G。所述胸腺嘧啶核苷(thymidine)可通过商购途径获得，例如可从SIGMA购买获得，货号为T1895-1G。所述R3IGF-I为人胰岛素样生长因子-I(IGF-I)的重组类似物，可通过商购途径获得，例如可从SIGMA购买获得，货号为91590C。所述亚油酸的分子量为280.44、CAS号为60-33-3。所述亚油酸可通过商购途径获得，例如可从SIGMA购买获得，货号为L1012-100MG。所述吡哆胺二盐酸盐的分子量为241.11、CAS号为524-36-7。所述吡哆胺二盐酸盐可通过商购途径获得，例如可从SIGMA购买获得，货号为P9158-1G。优选地，所述CHODG44培养基为在OPM-CHOCD07中添加L-Glutamine、F-68、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、R3IGF-I、亚油酸和吡哆胺二盐酸盐获得。优选地，每1LCHODG44培养基中含有4～8mmol的L-Glutamine。优选地，每1LCHODG44培养基含有100g～250g的F-68。优选地，每1LCHODG44培养基含有50～200umol的次黄嘌呤。优选地，每1LCHODG44培养基含有8～32umol的胸腺嘧啶核苷。优选地，每1LCHODG44培养基含有5～20微克的R3IGF-I。优选地，每1LCHODG44培养基含有10～100umol的亚油酸。优选地，每1LCHODG44培养基含有0.05～3mg的吡哆胺二盐酸盐。本专利技术的第二方面，提供了前述CHODG44培养基的制备方法，包括步骤：将各组分按配比混合，即可。本专利技术的第三方面，提供了前述CHODG44培养基用于CHODG44细胞悬浮培养的用途。本专利技术的第四方面，提供了一种悬浮培养CHODG44细胞的方法，包括步骤：将CHODG44细胞置于前述CHODG44培养基中进行培养。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术的CHODG44培养基，用于培养CHODG44细胞时，从细胞倍增时间，细胞最高密度和细胞培养时间上，都优于某知名品牌的CDDG44培养基，完全可以替代CDDG44培养基，更有利于CHODG44细胞的培养。附图说明图1：OPM-DG44CDM1驯化CHODG44细胞生长图。图2：比较CHODG44细胞在CDDG44-1、OPM-DG44CDM1、OPM-DG44CDM2和OPM-DG44CDM3培养基中培养生长活细胞图。图3：CHODG44细胞在CDDG44-1、OPM-DG44CDM1、OPM-DG44CDM2和OPM-DG44CDM3培养基中培养生长活率图。图4：CHODG44细胞在CDDG44-1、OPM-DG44CDM1、OPM-DG44CDM2和OPM-DG44CDM3培养基中倍增时间。图5：有限流加培养比较CHODG44细胞在培养基中的生长-VCD。图6：有限流加培养比较CHODG44细胞在培养基中的生长-VIA。具体实施方式在进一步描述本专利技术具体实施方式之前，应理解，本专利技术的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本专利技术实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本专利技术的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本专利技术另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本专利技术中使用的所有技术和科学术语与本
技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本
的技术人员对现有技术的掌握及本专利技术的记载，还可以使用与本专利技术实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本专利技术。除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本
常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULARCLONING：ALABORATORYMANUAL，Secondedition，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989andThirdedition，2001；Ausubel等，CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，JohnWiley&Sons，NewYork，1987andperiodicupdates；theseriesMETHODSINENZYMOLOGY，AcademicPress，SanDiego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTUREANDFUNCTION，Thirdedition，AcademicPress，SanDiego，1998；METHODSINENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.WassarmanandA.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，SanDiego，1999；和METHODSINMOLECULARBIOLO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CHO DG44培养基，所述培养基的成分中含有：OPM‑CHO CD07、L‑Glutamine、F‑68、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、

【技术特征摘要】
1.一种CHODG44培养基，所述培养基的成分中含有：OPM-CHOCD07、L-Glutamine、F-68、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、R3IGF-I、亚油酸、吡哆胺二盐酸盐。2.根据权利要求1所述的CHODG44培养基，其特征在于，所述OPM-CHOCD07可通过商购途径从上海奥浦迈生物科技有限公司获得，货号为P081307-001。3.根据权利要求1所述的CHODG44培养基，其特征在于，所述CHODG44培养基为在OPM-CHOCD07中添加L-Glutamine、F-68、次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷、R3IGF-I、亚油酸和吡哆胺二盐酸盐获得。4.根据权利要求1所述的CHODG44培养基，其特征在于，每1LCHODG44培养基中含有4～8mmol的L-Glutamine。5.根据权利要求1所述的CHODG44培养基，其特征在于，每1LCHODG44培养基含有10...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晔，肖志华，
申请(专利权)人：上海奥浦迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31