一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法技术

本发明专利技术属于鹿骨深加工技术领域，尤其涉及一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法。一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，包括如下步骤：将鹿角盘粉碎、浸泡研磨、微波处理、离心、微滤，10000Da和5000Da两级超滤、500Da膜纳滤，再减压浓缩、冷冻和干燥，即得鹿角盘天然肽。本发明专利技术的方法制备所得鹿角盘天然肽，颜色呈浅绿色，肽段分布为6肽至31肽；通过酶解制备得到的鹿角霜，肽段分布6肽至20肽。

Method for extracting polypeptide from deer horn plate by extracting natural peptide from Antler disc and enzymolysis

The invention belongs to the deer bone deep processing technical field, in particular to a method for extracting natural peptides from deer horn plate and preparing peptides by enzymatic hydrolysis. A method for extracting natural peptides from Antler plates and preparing peptides by enzymatic hydrolysis comprises the following steps: crushing, soaking and grinding, microwave treatment, centrifugation, microfiltration, ultrafiltration at levels of 10000Da and 5000Da, nanofiltration with 500 Da membrane, and then concentrating, freezing and drying the natural peptides from Antler plates. The natural peptide of antler dish prepared by the method of the invention is light green in color, and the peptide segments are 6 to 31 peptides, and the peptide segments are 6 to 20 peptides.

【技术实现步骤摘要】
一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法
本专利技术属于鹿骨深加工
，尤其涉及一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法。
技术介绍
传统的中药饮片中，鹿角胶属名贵的滋补品，鹿角胶的制取原料为梅花鹿，马鹿等鹿茸中角质化的部分，制取鹿胶后剩下的骨渣中药称为鹿角霜，亦为一味中药。据中国药典所载鹿角胶味甘、咸、湿、归肾、肝经，功能主治：温补肝、肾，益精养血，用于阳痿滑精，腰膝酸冷，虚落羸弱，崩漏下血，便血，尿血，阴疽肿痛。《药性歌括四百味白话解》中载：鹿角胶温，吐衄虚羸，跌打伤损，崩带安胎。鹿角霜则味咸性温，有益肾助阴的作用，但功效薄弱。据中国药典记载：传统的鹿角胶制法如下：将鹿角骨化的部分，锯成6-10cm，漂洗至水清，分3次水煮，滤过，合并滤液，(或加入少量明矾)静置，滤取胶液，用文火浓缩(或加入少量豆油，冰糖，黄油)，浓缩至膏状，冰凝切块，阴干，即得。据理论分析，这种制得的鹿胶其主要成分为胶原蛋白，极少数样品能得到微量天然肽。试验研究表明，鹿角盘包括梅花鹿、马鹿及水鹿均含有一定的天然肽，含量的多少与品种、鹿龄、生长环境等因素相关，在用梅花鹿的角盘测试中，鹿龄在1-4龄的比4龄以上的，野生比人工饲养的，温带的比亚热带的都高些，一般含量为1.1-5.8％。市面上销售的鹿胶(不加辅料的)，不含天然肽，可能与加工过程的某些因素有关。为证实此猜想，用含天然肽的鹿胶做实验得的结果具有一定说服力。试验条件：称取鹿胶10g，天然肽含量为53.11％，溶于200ml去离子水中，得含26.56mg/ml的溶液。在PH值为8.0，温度85-90℃间蒸煮20分钟，补充蒸发出去的水量会到200ml水平。此时碱溶液的肽量为9.29mg/ml，损失17.27mg/ml，经计算损失达65.02％，上述试验表明温度是主要原因，说明传统的制胶工艺长时间的温熬能造成鹿胶天然肽损失。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
为克服现有技术的不足，本专利技术提供一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法。本专利技术提供的技术方案如下：一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，包括如下步骤：(1)用粉碎机分级将鹿角盘粉碎至<80目，得鹿角盘粉，待用；(2)将鹿角盘粉，按固液比1:5，用热的去离子水，浸泡3-4h；(3)将浸泡过的鹿角盘粉连同浸泡水，用胶体磨循环研磨8-10min，使其成骨浆液，再添加去离子水，用稀NaOH调浆液为pH至8.5；(4)将调好pH值的骨浆液，置于微波发生罐中处理20min，在温度50-60℃下保温40min，检测料液的pH值，当PH值≤8.0时，结束微波处理，当pH≥8.0时，再按上述方法微波15min，保温15min；(5)将微波处理过的料液排出，用600目滤布，三足离心机脱液，滤渣收集待用，滤液用稀醋酸调pH至≤7.0；(6)将调pH至≤7.0的透过液，用中空纤维膜进行微滤，透过液用能拦截10000Da和5000Da超滤膜进行2级超滤，5000Da超滤的透过液用能拦截500Da的纳滤过滤；(7)检测纳滤的浓液，当浓度≥20％时，待冷却至室温送去冰柜冷冻至-28℃，当浓度小于20％时，则需低温浓缩至≥20％，再送去冷冻；(8)将冷冻至-28℃的冰块取出，打碎至粒径小于50mm后，置于微波真空机或其他真空干燥机中干燥，控温58℃，得到疏松状结晶产品，即为鹿角盘天然肽，颜色呈浅绿色，肽段分布为6肽至31肽；(9)将提取天然肽过程中得到的骨渣，微滤及2级超滤所得浓液合并，调合并液的浓度为10-13％，用稀NaOH调合并液的pH至9.5，置于微波频率为2450MHz的微波罐中进行处理，控温60℃，微波处理时间为30min，在温度50-60℃下保温60min，检测料液pH值，当pH值<8.4时，结束微波处理，当pH值>8.4时，再按上述微波处理15min，保温15min；(10)将微波处理过的料液，按底物的量的3.5％添加碱性蛋白酶进行微波辅助酶解，微波辅助酶解时间20min，控温60℃，在温度50-60℃下保温，当酶解液的pH下降至7.0后结束酶解，启动微波罐最大功率升温至85-90℃，保持5-8min，灭掉酶的活性；(11)将灭酶酶解液排出，冷却至<50℃后，进行物料分离，先用600目滤布三足离心机脱液，滤渣收集待用；离心的透过液处理与提取天然肽相同，离心所得的骨渣与微滤和2级超滤所得的浓液合并，在<75℃的条件下进行微波真空干燥，所得的产品即为鹿角霜；纳滤所得的浓液按提取天然肽的方法处理，所得产品为肽段分布6肽至20肽。作为优选，步骤(2)中去离子水的温度为60-70℃。作为优选，步骤(3)中鹿角盘粉与去离子水的固液比为1：8。作为优选，步骤(4)中微波发生罐的参数为2450mHz，温度为60℃。作为优选，步骤(6)中10000Da超滤的操作参数为：泵压0.2-0.4Mpa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比3-4倍；所述的5000Da超滤的操作参数为：泵压0.3-0.5MPa，温度40-45℃，膜面流量1-1.5m/s，浓缩比4-5倍。作为优选，步骤(6)中500Da纳滤膜过滤的操作参数为：泵压0.4-0.6MPa，循环流量1.5-2.5m3/h。作为优选，步骤(10)中碱性蛋白酶的浓度为20万u/g。作为优选，步骤(11)中微波真空干燥机的真空度为0.05-0.08MPa，温度为58℃。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术通过多个单因素小试，得到较优的条件会扩大综合试验，获得优化的工艺和操作最佳参数，最终得到本专利技术从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的，为提纯鹿角盘天然肽或酶解肽提供依据，从而提高鹿角盘的药用价值和经济价值。(2)本专利技术的方法制取的鹿胶天然肽，颜色呈浅绿色，肽段分布为6肽至31肽；对乳腺增生、结节、肿痛和乳癌的治疗效果非常好；通过酶解制备得到的鹿角霜，肽段分布6肽至20肽。附图说明图1为本专利技术从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的工艺流程图。具体实施方式以下实施例以便更好的理解本专利技术，并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1：一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，包括如下步骤：(1)用粉碎机分级将鹿角盘粉碎至<80目，得鹿角盘粉，待用；(2)将鹿角盘粉，按固液比1:5，用热的去离子水，浸泡3-4h；所述去离子水的温度为60-70℃；(3)将浸泡过的鹿角盘粉连同浸泡水，用胶体磨循环研磨8-10min，使其成骨浆液，再添加去离子水，用稀NaOH调浆液为pH至8.5；所述的鹿角盘粉与去离子水的固液比为1：8；(4)将调好pH值的骨浆液，置于微波发生罐中处理20min，在温度50-60℃下保温40min，检测料液的pH值，当PH值≤8.0时，结束微波处理，当pH≥8.0时，再按上述方法微波15min，保温15min；所述微波发生罐的参数为2450mHz，温度为60℃；(5)将微本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)用粉碎机分级将鹿角盘粉碎至

【技术特征摘要】
1.一种从鹿角盘中提取鹿角盘天然肽和酶解制备多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)用粉碎机分级将鹿角盘粉碎至<80目，得鹿角盘粉，待用；(2)将鹿角盘粉，按固液比1:5，用热的去离子水，浸泡3-4h；(3)将浸泡过的鹿角盘粉连同浸泡水，用胶体磨循环研磨8-10min，使其成骨浆液，再添加去离子水，用稀NaOH调浆液为pH至8.5；(4)将调好pH值的骨浆液，置于微波发生罐中处理20min，在温度50-60℃下保温40min，检测料液的pH值，当PH值≤8.0时，结束微波处理，当pH≥8.0时，再按上述方法微波15min，保温15min；(5)将微波处理过的料液排出，用600目滤布，三足离心机脱液，滤渣收集待用，滤液用稀醋酸调pH至≤7.0；(6)将调pH至≤7.0的透过液，用中空纤维膜进行微滤，透过液用能拦截10000Da和5000Da超滤膜进行2级超滤，5000Da超滤的透过液用能拦截500Da的纳滤过滤；(7)检测纳滤的浓液，当浓度≥20％时，待冷却至室温送去冰柜冷冻至-28℃，当浓度小于20％时，则需低温浓缩至≥20％，再送去冷冻；(8)将冷冻至-28℃的冰块取出，打碎至粒径小于50mm后，置于微波真空机或其他真空干燥机中干燥，控温58℃，得到疏松状结晶产品，即为鹿角盘天然肽，颜色呈浅绿色，肽段分布为6肽至31肽；(9)将提取天然肽过程中得到的骨渣，微滤及2级超滤所得浓液合并，调合并液的浓度为10-13％，用稀NaOH调合并液的pH至9.5，置于微波频率为2450MHz的微波罐中进行处理，控温60℃，微波处理时间为30min，在温度50-60℃下保温60min，检测料液pH值，当pH值<8.4时，结束微波处理，当pH值>8.4时，再按上述微波处理15min，保温15min；(10)将微波处理过的料液，按底物的量的3.5％添加碱性蛋白酶进行微波辅助酶解，微波辅助酶解时间20min，控温60℃，在温度50...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗乌支，
申请(专利权)人：罗乌支，
类型：发明
国别省市：北京,11